Mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit Assay en Ca2 +-mitochondriale zwelling Assay geactiveerd

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Dit protocol is gericht op het beschrijven van een methode om te onderzoeken of het Ca2 + retentie capaciteit en Ca2 +- geactiveerd mitochondriale zwelling van geïsoleerde mitochondria van SH-SY5Y cellen stapsgewijze.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Li, W., Zhang, C., Sun, X. Mitochondrial Ca2+ Retention Capacity Assay and Ca2+-triggered Mitochondrial Swelling Assay. J. Vis. Exp. (135), e56236, doi:10.3791/56236 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

De productie van ATP door oxidatieve fosforylatie is de primaire functie van de mitochondriën. Mitochondriën in hogere eukaryoten ook deelnemen aan cytosolische Ca2 + bufferen en de ATP productie in mitochondriale kan worden bemiddeld door intramitochondrial gratis Ca2 + concentratie. CA2 + retentie capaciteit kan worden beschouwd als het vermogen van de mitochondriën te behouden van calcium in de mitochondriale matrix. Geaccumuleerde intracellulaire Ca2 + leidt tot de doorlaatbaarheid van de innerlijke mitochondriale membraan, genoemd de opening van mitochondriale permeabiliteit overgang porie (mPTP), die leidt tot het weglekken van moleculen met een moleculair gewicht van minder dan 1,5 kDa. CA2 +-mitochondriën zwelling wordt gebruikt om aan te geven van de opening van de mPTP geactiveerd. Hier beschrijven we twee testen om te controleren de Ca2 + retentie capaciteit en Ca2 +-mitochondriale zwelling in geïsoleerde mitochondriën geactiveerd. Na bepaalde hoeveelheden van Ca2 + worden toegevoegd, kunnen alle stappen worden voltooid in één dag en geregistreerd door een microplate-lezer. Dus, deze twee eenvoudige en effectieve testen kunnen worden vastgesteld om te beoordelen de Ca2 +-mitochondriale functies.

Introduction

Mitochondriën zijn de belangrijkste cellulaire organen te produceren bijna 95% van de ATP in de cellen van zoogdieren gebruikt door oxidatieve fosforylering. Het is gemeld dat de afgezonderd micromolar concentratie van Ca2 + door de mitochondriën, de aanwezigheid van ADP en anorganisch fosfaat kan worden gebruikt om phosphorylate ADP op1ATP synthese. Wanneer de concentratie van cytosolische Ca2 + boven een drempel gaat, mitochondriën kunnen opname Ca2 + snel en efflux het langzaam. Zo kunnen de functionerende mitochondriën toestroom de verhoogde cytosolische Ca2 +. Irrelevant voor de deelname aan de oxidatieve fosforylatie, de mitochondriale Ca2 + ook deelnemen aan de cytosolische calcium-signalen en het mechanisme van de mitochondriale apoptotic activeren door de opening van de mPTP in de binnenste mitochondriale inducerende membraan2. Het is algemeen erkend dat een abnormale verhoging van de intracellulaire Ca2 + mitochondriale enorme zwelling veroorzaken kan door het openen van de mPTP-3. Dus, dit protocol heeft tot doel te beoordelen van de mitochondriale functie door het kwantificeren van de mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit en Ca2 +-trigged mitochondriale zwelling.

CA2 + retentie capaciteit is de meting van het vermogen van de mitochondriën om opname cytosolische calcium. Mitochondriën kunnen buffer het cytosolische vrij calcium en calcium-afhankelijke cellulaire processen regelen door opname van de calcium in de vorm van inactieve precipitaten. Verminderde Ca2 + retentie capaciteit treedt op in stress verschijnselen die is gekoppeld aan de beperking van de energie en zelfs neurodegeneratieve ziekten4,5. Geïsoleerde mitochondriën of digitonin-permeabel cellen kunnen worden gebruikt voor identificatie van de Ca2 + retentie capaciteit, en de verhoogde capaciteit om te accumuleren Ca2 + door geïsoleerde mitochondriën met de additonal glutamaat en malate wordt niet verricht door de mitochondriale isolatie procedure6. Een bepaalde hoeveelheid digitonin moet worden gebruikt om de permeabilize van de plasma-membranen van verschillende celtypes. Het hexapotassium zout van Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof, een Ca2 +-gevoelige cel-impermeant zichtbaar licht-prikkelbaar indicator, gebruikte7is geweest. CA2 +-bindende groen fluorescente kleurstof is een indicator van de lage-affiniteit en gebruikt om te tonen dat intracellulaire gratis Ca2 + concentraties stijgen blijven tijdens langdurige (5 min) stimulaties8. Deze methode is minder gevoelig dan de radioactieve filter techniek maar werd sterk vereenvoudigd. De extra Ca2 + calcium groene fluorescentie verheft en de Ca2 + ICT door mitochondriën retourneert de fluorescentie op basislijn. Opeenvolgende toevoegingen van Ca2 + aangebracht totdat de mitochondriën niet opname extramitochondrial Ca2 + 9. Een fluorescentie microplate lezer kan worden gebruikt om voortdurend verslag de calcium groene fluorescentie.

Na Ca2 + accumulatie, mitochondriën depolarized, vrijgegeven Ca2 + in het medium, en begon te zwellen. CA2 +-mitochondriën zwelling wordt gebruikt om aan te geven van de opening van de mPTP geactiveerd. Elektronenmicroscopie en de daling lichtabsorptie bij 540 nm kan worden gebruikt voor het meten van de Ca2 +-geactiveerd mitochondriale zwelling10,11. Volume van de mitochondriën kan rechtstreeks worden bepaald door de voorwaartse hoek lichtverstrooiing12, waar de dalingen van de extinctie passieve zwelling van de mitochondriale matrix reflecteren.

Hier, we illustreren de methodologie te onderzoeken van de mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit en Ca2 +-mitochondriale zwelling in geïsoleerde mitochondriën van de cellen van de SH-SY5Y geactiveerd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. isolatie van Mitochondria

Opmerking: Alle oplossingen en apparatuur moeten worden precooled op 0 - 4 ° C en op ijs.

  1. Zaad ongeveer 3 x 106 SH-SY5Y cellen per 10 cm cel cultuur schotel. Cultuur cellen in hoge-glucose Dulbecco gewijzigd van Eagle medium met 10% foetale runderserum, penicilline (100 U/mL)-streptomycine (100 µg/mL). Handhaven bij 37 ° C in een broedstoof met 5% CO2 's nachts.
    Opmerking: ten minste 1-2 x 107 SH-SY5Y cellen zijn nodig voor elke isolatie assay.
  2. Verwijder het medium en de cellen met ongeveer 1 mL ijs koud PBS in een 10 cm schotel voor de cultuur van de cel 3 keer wassen.
  3. Voeg nieuwe 1 mL ijs koud PBS in 10 cm cel cultuur schotel en schraap de Adherente cellen in een nieuwe 1,5 mL-buis. Centrifugeer bij 800 x g gedurende 10 minuten bij 4 ° C.
  4. Tijdens het centrifugeren, bereiden 5 mL mitochondriale isolatie buffer (250 mM sacharose, 10 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazine-ethanesulfonic zuur), 10 mM KCl, 1.5 mM MgCl2, 1 mM EDTA) aangevuld met 50 μl van protease remmers voorraad oplossing (100 x concentratie; 1 EDTA-gratis tablet opgelost in 500 µL van ddH2O).
  5. Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet met 1 mL van mitochondriale isolatie buffer. Incubeer de 1,5 mL-buis op ijs gedurende 30 minuten.
  6. Lyse de zwevende cellen met een glas homogenizer (15-25 strokes) op en neer handmatig op ijs.
    Opmerking: Zorg ervoor dat er geen luchtbellen cellen worden gehomogeniseerd. Tellen de onbeschadigde cellen en bared kernen Microscoop visueel en bevestigen dat > 90% cel breuk is opgetreden.
  7. Breng het homogenaat in een tube 1,5 mL en centrifugeer bij 1.000 x g gedurende 5 min bij 4 ° C tot het verwijderen van het puin (kernen en resterende intact cellen).
  8. Breng de bovendrijvende substantie in een nieuwe 1,5 mL-buis en centrifugeer bij 1.000 x g gedurende 5 min 4 ° C.
  9. Het supernatant overbrengen in een nieuwe buis en centrifugeer bij 14.000 x g gedurende 15 min 4 ° C.
  10. Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet met mitochondriën met 1 mL van mitochondriale isolatie buffer.
  11. Centrifugeer de oplossing gedurende 15 minuten staan bij 14.000 x g 4 ° C om het neerslaan van de mitochondriën.
  12. De resulterende mitochondriën pellet moet worden bewaard op ijs en geresuspendeerde in 50-100 μl KCl media (125 mM KCl, 2 mM K2HPO4, 1 mM MgCl2, 20 mM HEPES, 5 mM glutamaat, 5 mM malate, en 2 μM rotenon, pH 7.4) volgens het volume van het pellet vóór elke kont ay.
  13. Gebruik 5 μL van mitochondriale oplossing om te meten de mitochondriale eiwitconcentratie door standaard BCA assay, OD562 meten met behulp van een plaat lezer13.

2. bepaling van mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit

  1. Voorbereiden van de KCl-media en voeg de Ca2 +-groen fluorescente kleurstof binden aan een eindconcentratie van 0,5 μM voordat het experiment.
  2. 1 ml van geïsoleerde mitochondriën (0,4 mg/mL) in KCl media met 0,5 μM Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof in elke plaat 6-well goed.
  3. Incubeer de mitochondriën en het Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof in de 6-well plaat bij kamertemperatuur beschermd tegen omgevingslicht voor 1 min. 4 toevoegen μL aliquots van een 20 mM CaCl2 oplossing (20 mM CaCl2, 127 mM KCl, 1 mM MgCl2 20 mM HEPES, 5 mM glutamaat, 5 mM-malaat, pH 7.4) aan elke plaat 6-well goed met behulp van de automatische instelling om 200 nmol Ca2 +/mg-mitochondriale eiwit afzien.
  4. Gebruik een fluorescentie spectrometer om te controleren de fluorescentie wijzigingen elke 3 s gedurende 2 minuten met een golflengte van excitatie van 506 nm en een golflengte van de emissie van 531 nm. De plaat is voorzien van schudden bij 600 omwentelingen per minuut voor 3 s tussen lezingen gecontroleerd door software (Figuur 1).
  5. Toevoegen van een extra 4 μL hoeveelheid 20 mM CaCl2 oplossing aan elk putje en controleren van de fluorescentie wijzigingen elke 3 s voor 2 min. Herhaal deze stap totdat de fluorescentie toeneemt met de tijd.
    Opmerking: De mitochondriën worden uitgedaagd met de toegevoegde Ca2 + aangegeven door de verhoogde opname fluorescentie. Wanneer de mPTP wordt geopend, wordt de fluorescentie met tijd verhoogt.
  6. Het interpreteren van het totale bedrag van Ca2 + toegevoegd totdat de mPTP wordt geopend als de Ca2 + retentie capaciteit.

3. bepaling van Ca 2 +-geïnduceerde mitochondriale zwelling

  1. Bereiden de KCl media voordat het experiment.
    1. Breng 1 mL van geïsoleerde mitochondriën (0,4 mg/mL) in KCl media in elke plaat 6-well goed.
  2. Voeg 10 μL van 20 mM CaCl2 waterige oplossing (500 nmol/mg mitochondriale eiwit) in mitochondriale eiwitten mitochondriaal zwelling activeren.
  3. Opnemen van de afname van de absorptie bij 540 nm elke 3 s op een microplate-lezer gecontroleerd door software voor 10 min (Figuur 2). De fluorescentie veranderingen worden veroorzaakt door een toestroom van opgeloste stoffen over het mitochondriaal binnenste membraan.
    Opmerking: De verminderde absorptie bij 540 nm komt overeen met de gezwollen mitochondriën. Als de lezer niet dat een afname van de absorptie ziet doet, kan een langer interval lezen of lezen van tijd worden aangenomen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

De resultaten van de vertegenwoordiger van Ca2 + retentie capaciteit:
Resultaten werden uitgedrukt als fluorescentie waarden. Met de extra pulsen van Ca2 + (200 nmols/mg mitochondriale eiwit), de fluorescentie stegen met dubbele boven basislijn met de opening van de mPTP. 5 μM Bongkrekate (BKA), een inhibitor van de omwenteling van Ca2 +-geïnduceerde mPTP opening, of 1 μM atractyloside (ATR), een activator van Ca2 +-geïnduceerde mPTP opening, werden toegevoegd in geïsoleerde mitochondriën. Het bedrag van de totale toegevoegde Ca2 + totdat mPTP opening door een dubbele verhoging boven de basislijn fluorescentie aangegeven werd geïnterpreteerd als Ca2 + retentie capaciteit. Onze gegevens bleek dat de mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit in BKA behandeling veel hoger dan die in ATR groep. Deze gegevens bevestigd de geschikte meting van mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit (Figuur 3).

Vertegenwoordiger resultaten van Ca2 +-geïnduceerde mitochondriale zwelling:
Resultaten werden uitgedrukt als percentage veranderingen in absorptie bij 540 nm versus eerste extinctie gedurende een periode van 10 min na toevoeging van CaCl2. Geactiveerd door toevoeging van Ca2 + (500 nmol/mg mitochondriale eiwit), de verminderde absorptie gecontroleerd bij 540 nm aangegeven de mitochondriale zwellingen. Met de behandeling van BKA of ATR toonde de kalibratiekromme een lichte of scherpe daling ten opzichte van eerste absorptie, die aangeeft dat BKA mPTP openen terwijl ATR kan vergemakkelijken de mPTP openen (Figuur 4) kan remmen.

Figure 1
Figuur 1: de software-instellingen voor mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit assay. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 2
Figuur 2: de software-instellingen voor mitochondriale Ca2 +-geactiveerd mitochondriale zwelling assay. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 3
Figuur 3: Het meten van Ca2 + retentie capaciteit. Extra-mitochondriale Ca2 + in geïsoleerde mitochondriën werd gemeten fluorometrically met de Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof in aanwezigheid van 5 μM bongkrekate (BKA), 1 μM atractyloside (ATR) of blanco-controle (CON). Sporen van Ca2 + retentie door geïsoleerde mitochondriën met BKA, ATR en CON werden gemeten op 506 nm (Ex) en 531 nm (Em) op een microplate-lezer. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 4
Figuur 4: Het meten van Ca2 +-geïnduceerde mitochondriale zwelling. CA2 +-geïnduceerde mitochondriale zwelling van de SH-SY5Y in aanwezigheid van 5 μM bongkrekate (BKA), 1 μM atractyloside (ATR) of blanco-controle (CON) werd uitgedrukt als een percentage verminderde ijkkromme van de initiële absorptie bij 540 nm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hier, beschreven we een eenvoudige en effectieve protocol voor de mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit assay en Ca2 +-mitochondriale zwelling assay geactiveerd.

Voor de mitochondriale isolatie, door ervoor te zorgen dat alle materialen en buizen op ijs, zijn met name wanneer de cellen homogenisatie. 0,25% trypsine-EDTA kan ook worden gebruikt om het loskoppelen van de cellen van de schotel voor 5 minuten bij 37 ° C. Na 15 tot 25 lijnen is het noodzakelijk om te observeren de intact celmembraan onder de Microscoop en te voorkomen dat de breuk van het membraan van de mitochondriën. Echter, de geïsoleerde mitochondriën die we verkregen zijn ruwe mitochondriën en gezuiverde mitochondriën kunnen worden verkregen door middel van 1,0 M / 1.5M discontinue sacharose verloop. De biologische kenmerken van mitochondriën in levende cellen lijken meer op die in vivo dan in geïsoleerde mitochondriën vanwege de concentraties van de middellange componenten die de mitochondriën omringen. De mitochondriale Ca2 + retentie capaciteit of Ca2 +-geactiveerde mitochondriale zwelling assay werd bepaald onder omstandigheden die energiek. Voor bepaling van functionerende mitochondriën, kan 5 mM-succinaat worden toegevoegd als respiratoire substraten in plaats van glutamaat en malate6.

CA2 +-bindende groen fluorescente kleurstof (bindt Ca2 + met een affiniteit voor 4,29 ± 0,67 mM), is meer geschikt voor het meten van micromolar concentraties van Ca2 + dan hogere affiniteit kleurstoffen zoals fura-2 7. Na toevoeging van de Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof, de incubatie moet minder dan 240 s. opeenvolgende toevoegingen van Ca2 + (variërend van 25-200 nmol) waren geïnjecteerd met 1-3 min. intervallen. De kalibratiekrommen Toon de concentraties van Ca2 + die de mitochondriën niet in staat zijn te sekwestreren, met vermelding van de mitochondriale opname van pulsen van Ca2 +. Anders, de Ca2 +-bindende groen fluorescente kleurstof werd ook gebruikt in calcium signalering van onderzoeken, zoals intracellulaire gratis Ca2 + meting van de concentratie, volgende Ca2 + toestroom en release en multiphoton excitatie Imaging voor Ca2 + in levende weefsels.

Voor bepaling van Ca2 + -geïnduceerde mitochondriale zwelling, zwelling kan ook worden opgewekt met de toevoeging van 200 mM ATR en CaCl2. Als een besturingselement, kunnen de mitochondriën worden geïncubeerd met 1 mM CsA gedurende 5 minuten vóór de meting, die de mPTP openen geremd. Eerder onderzoek toonde kalibratiekrommen van absorptie als een functie van het percentage van gezwollen mitochondriën14. Het werd gemeld dat 1 mM CsA, 0.1 mM ruthenium rood, en een gelijk volume verse mitochondriën (0,5 mg/mL) kan worden toegevoegd in de reactie wanneer zwelling compleet was. Omdat de CsA en ruthenium rode de mPTP openen in het vers toegevoegde mitochondriën remmen kunnen, geven de kalibratiekrommen zowel de gezwollen mitochondriën en niet-gezwollen mitochondriën15. Het protocol van mitochondriale zwelling op Ca2 + overbelasting is ook een effectieve en directe meting van Ca2 +-geïnduceerde mPTP openen.

Sinds de ontdekking van vervoer van Ca2 + door mitochondria van zoogdieren en andere hogere gewervelde dieren van meer dan 50 jaar geleden, is er veel onderzoek naar de mechanismen en de functies van mitochondriale calcium efflux en toestroom. De mitochondriale Ca2 + opname mechanismen bevatten de mitochondriale Ca2 + uniporter, de snelle modus of RAM-geheugen en de ryanodine receptor (mRyR)16. De tests die we hierboven kan beschreven evalueren Ca2 +-gerelateerde mitochondriale functie eenvoudig en effectief.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

X. zon onder toezicht van de experimenten. Wei Li de experimenten uitgevoerd. Chen Zhang en X. zon schreef het papier.

Acknowledgements

Deze studie werd ondersteund door subsidies verlenen van de uitstaande wetenschapper van Shandong (JQ201421) en de subsidie van NSFC (81371226).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SH-SY5Y cell line ATCC (The Global Bioresource Center) ATCC Number: CRL-2266
Calcium green-5N Life Technologies c-3737 Ca2+-binding green fluorescent dye
complete protease inhibitors Roche Molecular Biochemicals 4693116001
glass homogenizer Kimble Chase 9885303002
glutamate Sigma-Aldrich RES5063G-A7
malate Sigma-Aldrich 46940-U
rotenone Sigma-Aldrich R8875
HEPES Sigma-Aldrich H3375
MgCl2 Sigma-Aldrich 00457
K2HPO4 Sigma-Aldrich V900050
KCl Sigma-Aldrich P9541
CaCl2 Sigma-Aldrich V900266
Varioskan flash instruments Thermo Scientific IC100E
Bongkrekate Biovision 1820-100
atractyloside Sigma-Aldrich C4992
high-glucose Dulbecco’s modified Eagle medium Hyclone SH30022 4.5 g/L glucose, L-glutamine, without sodium pyruvate
fetal bovine serum Hyclone SV30087
penicillin Sigma-Aldrich P3032
streptomycin Invitrogen 11860-038
BCA assay kit Thermo Scientific NCI3225CH
PBS Hyclone SH30256.01
10 cm cell culture dish NEST 704001

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rossi, C. S., Lehninger, A. L. Stoichiometry of respiratory stimulation, accumulation of Ca++ and phosphate, and oxidative phosphorylation in rat liver mitochondria. J Biol Chem. 239, (11), 3971-3980 (1964).
  2. Gunter, T. E., Buntinas, L., Sparagna, G., Eliseev, R., Gunter, K. Mitochondrial calcium transport: mechanisms and functions. Cell Calcium. 28, (5-6), 285-296 (2000).
  3. Crofts, A. R., Chappell, J. B. Calcium Ion Accumulation and Volume Changes of Isolated Liver Mitochondria. Reversal of Calcium Ion-Induced Swelling. Biochem J. 95, 387-392 (1965).
  4. Wojda, U., Salinska, E., Kuznicki, J. Calcium ions in neuronal degeneration. IUBMB Life. 60, (9), 575-590 (2008).
  5. Celsi, F., et al. Mitochondria, calcium and cell death: a deadly triad in neurodegeneration. Biochim Biophys Acta. 1787, (5), 335-344 (2009).
  6. Murphy, A. N., Bredesen, D. E., Cortopassi, G., Wang, E., Fiskum, G. Bcl-2 potentiates the maximal calcium uptake capacity of neural cell mitochondria. Proc Natl Acad Sci U S A. 93, (18), 9893-9898 (1996).
  7. Rajdev, S., Reynolds, I. J. Calcium green-5N, a novel fluorescent probe for monitoring high intracellular free Ca2+ concentrations associated with glutamate excitotoxicity in cultured rat brain neurons. Neurosci Lett. 162, (1-2), 149-152 (1993).
  8. Stout, A. K., Reynolds, I. J. High-affinity calcium indicators underestimate increases in intracellular calcium concentrations associated with excitotoxic glutamate stimulations. Neuroscience. 89, (1), 91-100 (1999).
  9. Bambrick, L. L., et al. Cyclosporin A increases mitochondrial calcium uptake capacity in cortical astrocytes but not cerebellar granule neurons. J Bioenerg Biomembr. 38, (1), 43-47 (2006).
  10. Zhao, K., et al. Cell-permeable peptide antioxidants targeted to inner mitochondrial membrane inhibit mitochondrial swelling, oxidative cell death, and reperfusion injury. J Biol Chem. 279, (33), 34682-34690 (2004).
  11. Muriel, M. P., et al. Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death. J Comp Neurol. 426, (2), 297-315 (2000).
  12. Allman, R., Hann, A. C., Phillips, A. P., Martin, K. L., Lloyd, D. Growth of Azotobacter vinelandii with correlation of Coulter cell size, flow cytometric parameters, and ultrastructure. Cytometry. 11, (7), 822-831 (1990).
  13. Wiechelman, K. J., Braun, R. D., Fitzpatrick, J. D. Investigation of the bicinchoninic acid protein assay: identification of the groups responsible for color formation. Anal Biochem. 175, (1), 231-237 (1988).
  14. Petronilli, V., Nicolli, A., Costantini, P., Colonna, R., Bernardi, P. Regulation of the permeability transition pore, a voltage-dependent mitochondrial channel inhibited by cyclosporin A. Biochim Biophys Acta. 1187, (2), 255-259 (1994).
  15. Pastorino, J. G., et al. Functional consequences of the sustained or transient activation by Bax of the mitochondrial permeability transition pore. J Biol Chem. 274, (44), 31734-31739 (1999).
  16. Gunter, T. E., Sheu, S. S. Characteristics and possible functions of mitochondrial Ca(2+) transport mechanisms. Biochim Biophys Acta. 1787, (11), 1291-1308 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics