En in vivo østrogenmangel muse model til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen

Biochemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Biochemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Klinisk, østrogenmangel hos menopausale kvinder kan forværre forekomsten af lipid forstyrrelser og åreforkalkning. Vi etablerede en in vivo østrogenmangel model ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus. Musemodellen er anvendelig til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sun, B., Yin, Y. z., Xiao, J. An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause. J. Vis. Exp. (150), e59536, doi:10.3791/59536 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Postmenopausale kvinder har større risiko for at udvikle hjerte-kar-sygdomme end præmenopausale kvinder. Hunmus ovariectomized (OVX) ved fravænning display øget aterosklerotiske læsioner i aorta sammenlignet med kvindelige mus med intakt ovariefunktion. Men, laboratorie modeller, der involverer østrogen-mangelfuld mus med atherosclerosis-tilbøjelige status mangler. Dette underskud er afgørende, fordi klinisk østrogenmangel hos menopausale kvinder kan forværre forekomsten af præ-eksisterende eller igangværende lipid forstyrrelser og åreforkalkning. I denne undersøgelse, vi etablere en in vivo østrogen-mangelfuld musemodel ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i apolipoprotein E (ApoE)-/- mus. Vi sammenligner derefter virkningerne af 17β-estradiol og pseudoprotodioscin (PPD) (en phytoøstrogen) peroralt administreret via hasselnødde spredning. Vi finder, at selv om PPD udøver en vis effekt på at reducere den endelige kropsvægt og plasma TG i OVX apoE-/- mus, det har anti-aterosklerotisk og hjerte-beskyttende kapaciteter sammenlignelig med sin 17β-estradiol modstykke. PPD er en phytoøstrogen, der er blevet rapporteret til at udøve anti-tumor egenskaber. Den foreslåede metode er således anvendelig til screening af phytoøstrogener via udskiltes administration til erstatning for traditionel hormonsubstitutionsbehandling hos postmenopausale kvinder, som er blevet rapporteret at have potentielt skadelige tumorigenetiske Kapacitet. Peroral administration via hasselnødde spredning er ikke-invasiv, hvilket gør det almindeligt gældende for mange patienter. Denne artikel indeholder trin-for-trin demonstrationer af bilateral ovariektomi via dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus og udskiltes 17β-estradiol eller phytoøstrogen hormon udskiftning via hasselnød spredning. Plasma-lipid og kardiovaskulære funktionsanalyser ved hjælp af ekkokardiografi følger.

Introduction

Epidemiologiske og kliniske undersøgelser har vist, at postmenopausale kvinder har en betydeligt større risiko for hjerte-kar-sygdomme end præmenopausale kvinder1,2. Hormonsubstitutionsterapi (HRT) kan reducere den relative risiko for Kardiovaskulær sygdom til 0,37-0.793. Blandt andre komplikationer, åreforkalkning forårsaget af hjerte-kar-sygdomme er den førende dødsårsag verdensomspændende4. Men, laboratorie modeller, der involverer østrogen-mangelfuld mus præsenterer åreforkalkning udsat status mangler. Denne protokol giver en in vivo østrogenmangel musemodel til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen.

Tidligere undersøgelser viser, at anvendelsen af ovx i aterosklerotisk gnavere fodret en høj-kolesterol diæt kan efterligne postmenopausale kvinder, der lider af åreforkalkning5,6,7,8. En reproducerbar og bekvem dyremodel, der ligner den aterosklerotiske tilstand hos menopausale kvinder, er grundlaget for eksogen østrogen forskning. Her, en dobbelt dorsal-lateral indsnit af bilateral ovariektomi blev anvendt i atherosclerosis-tilbøjelige apolipoprotein E knockout (ApoE-/-) mus9,10. Sammenlignet med midterste abdominal eller dorsale indsnit, dobbelt dorsale-lateral indsnit er en lettere, mindre tidskrævende metode, der kan undgå alvorlige bughulen vedhæftning og inflammation. Peroral administration via hasselnødde spredning (Se tabel over materialer) er ikke-invasiv og praktisk, hvilket gør det almindeligt anvendelig som en langsigtet administration mode11. Langsom frigivelse pellet implantation er også populære6. Implantaterne kandog forværre forekomsten af infektion, især i mus, som er udsat for OVX. Andre ikke-invasive administration tilstande, såsom oral sonde og vand administration, også har mange ulemper. Oral sonde typisk stress mus og kan forårsage Esophageal skade. Administration af hormonet via drikkevand er meget gavnligt; Men, tilsætning af DMSO som en emulgator er uundgåelig som eksogene østrogener er uopløselige i vand. Her valgte vi udskiltes 17β-estradiol eller phytoøstrogen hormon udskiftning via hasselnød spredning til langvarig administration.

For nylig, den gavnlige virkning af HRT på det kardiovaskulære system af postmenopausale kvinder er blevet anfægtet i women's Health Initiative (WHI) forsøg12. På den ene side, udefrakommende østrogen alene udøver en gavnlig virkning på det kardiovaskulære system; på den anden side kan det kombineres med metohydroxyprogesteron acetat for at øge risikoen for kardiovaskulære hændelser. Mere alvorligt, HRT kan føre til bryst-og uterin tumorprogression, og denne effekt har markant begrænset sin brug13,14. Mere interesse har været fokuseret på de kardiovaskulære-beskyttende virkninger af eksogene østrogener mangler mitotisk aktivitet i tumorceller15,16,17. Flere undersøgelser i mennesker og dyr tyder på, at phytoøstrogener med strukturer svarende til østrogener kan spille en gavnlig rolle i hjerte-kar-beskyttelse15,18.

Således er formålet med det nuværende arbejde (i) at opbygge en in vivo østrogenmangel musemodel ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus og (II) at sammenligne de kardiovaskulære beskyttende virkninger af peroralt administreret 17β-estradiol og pseudoprotodioscin (PPD) via hasselnødde spredning. 17β-estradiol er en slags eksogene østrogen, der tilhører kvindelige seksuelle hormoner6,11,19. PPD, en steroid saponin og phytoøstrogen fra Dioscorea planter, er tidligere blevet rapporteret at udøve anti-tumor egenskaber20.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyrepleje-og forsøgsprotokoller blev godkendt af det kinesiske akademi for lægevidenskab og Peking Union Medical College (lov nr.: SYXK (Beijing) 2013-0023). Oprindelsen af ApoE-/- mus er C57BL/6j9,10.

1. bilateral Ovariektomi via et dobbelt dorsal-lateral incision i apoE-/- mus

  1. Ved fravænning (alder 28 dage), bedøve kvindelig ApoE-/- C57BL/6j mus med Avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt).
    Bemærk: 32 ApoE-/- mus blev tilfældigt inddelt i 4 grupper: SHAM, ovx, ovx/E2 og ovx/PPD Group (n = 8 pr. gruppe).
  2. Anbring dyret i en udsat position på en varmepude. Påfør øjen smøremiddel for Øjenværn under anæstesi.
  3. Hold kropstemperaturen inden for 36 ± 0,5 °C. Giv 5 mg/kg legemsvægt af den analgetiske carprofen subkutant til det laterale aspekt af musens hals.
  4. Barberer en 3 x 5 cm2 muse område cephalgic fra bækkenbens Crest. Forud for at dække dyret med en 3 x 5 cm2 blænde kirurgisk ark, Rengør det barberede område grundigt med jod og derefter 70% ethanol. Brug sterile instrumenter og handsker under forsøget.
  5. Brug saks og pincet til at lave et snit 1 cm lateral til midterlinjen og 1 cm lateral til Costal ribben.
  6. Bluntly dissekere det subkutane væv ved hjælp af pincet.
  7. Brug dissekere Goggles (Se tabel over materialer) til at identificere den hvide fedtvæv i bughulen.
  8. Brug mikrosaks og mikropincet til at lave en 0,5-1 cm indsnit gennem fascia indtil bughulen er nået.
    Bemærk: For den Sham-opererede gruppe, Luk sårene direkte. Sutur muskellag og hud separat ved hjælp af en Monofilament sutur.
  9. Når den hvide fedtvæv i bughulen kan ses, grab fedtvæv ved hjælp af mikropincet og forsigtigt trække det ud. En lyserød morbær formet æggestok indpakket af fedtvæv i bughulen kan ses.
  10. Ligate den 0,5-1 cm proksimale fartøj og livmoder horn ved hjælp af en Monofilament sutur. Fjern æggestokkene ved hjælp af mikrosaks og Placer det resterende væv tilbage i bughulen.
    Bemærk: De vigtigste negative symptomer for ovx-operationen er ureter ligering, hvilket fører til høj dødelighed hos ovx-betjente mus. Dette kan undgås ved at identificere væv ved hjælp af en dissekting Goggle.
  11. Luk sårene. Sutur muskellag og hud separat ved hjælp af en Monofilament sutur.
  12. Brug saks og pincet til at lave et nyt snit 1 cm lateral til midterlinjen og 1 cm lateral til de Costal ribben på den anden side. Gentag ovenstående procedure (1,5 til 1,11).
  13. Lad dyret vågne fra anæstesi. Opbevar musen separat på den første dag efter operationen.
  14. Rengør eller Udskift buret hyppigt under tilbagesøgnings fasen.
  15. Ca. 24 timer efter operationen administreres en anden 5 mg/kg legemsvægt af den analgetiske carprofen subkutant.

2. peroral administration af 17β-estradiol eller PPD via Hasselnødde spredning

  1. 17β-estradiol eller PPD opløses grundigt i sesam-olie, og derefter blandes sesam-olien med hasselnødde spredning (Se tabel over materialer). En daglig portion for hver 30 g mus indeholder 3 μg 17β-estradiol eller 15 μg PPD, 4 μL sesamolie og 60 mg hasselnødde spredning. Forbered en placebo for hver 30 g mus indeholder 4 μL sesamolie og 60 mg hasselnød spredning.
    Bemærk: Den daglige administration del af 17β-estradiol eller PPD var baseret på tidligere undersøgelser6,11 og indledende eksperimenter.
  2. En uge efter OVX, fodre musene med en høj-kolesterol kost (1,25% kolesterol, 0% cholat) for 12 uger. En typisk eksperimentel behandlingsordning, som anvendes i denne undersøgelse, er illustreret i figur 1.
  3. 5 dage før udskiltes administration af hasselnød spredt i uge 4, træne musene til at spise placebo indeholdende ca 30 mg hasselnød spredning for 2-5 mus i 5 dage. Træne musene i grupper i deres hjem bure i løbet af de første 3 dage. Placer musene i separate bure på den fjerde og femte dag af træningen og tjene den daglige portion til at ligne den eksperimentelle situation.
  4. I løbet af de sidste 9 uger, placere musene i separate bure og derefter tjene en daglig portion hasselnød spredt portion for hver fodring lejlighed.
    Bemærk: Serveres en daglig portion indeholdende 17β-estradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) via hasselnød SPREDT i henholdsvis ovx/E2 og ovx/PPD-gruppen; serveres en daglig portion indeholdende hormon-fri hasselnød spredning i SHAM og OVX gruppe.

3. bestemmelse af intima-medie tykkelse og kardiel dysfunktion ved hjælp af et Microultrasound system

  1. Ultrasonografisk biomicroskopi
    1. En dag før opsigelsen, undersøge intima-medie tykkelse og kardiel dysfunktion ved hjælp af et microultrasound system (Se tabel over materialer) som tidligere beskrevet21.
    2. Før undersøgelse, give hver mus en 200 mg/kg intraperitoneal injektion af Avertin (tribromoethanol) som anæstesi (n = 8 mus per gruppe).
    3. Barberer halsen hår af hver mus omhyggeligt. Påfør varm ultralyd transmission gel liberalt for at sikre optimal billedkvalitet.
    4. Opnå baseline ultrasonografiske billeder af aorta roden og stigende aorta med 30 MHz Scan hoved på en 12,7 mm fokus og en opløsning på 40 μm.
    5. Brug elektro kardiografi med en bly II-konfiguration til overvågning.
    6. Capture rigtige parasternal lang-akse billeder af opstigende aorta, aorta Arch, og brachiocephalic arterie gren i et fly i systole (figur 3).
  2. Målinger af intima-medier og maksimal plaque tykkelse
    1. Juster afstanden mellem transduceren og det arterielle sted let for at opnå klare billeder.
    2. Opbevar en 10 s Cine loop digitalt til offline undersøgelse på et billedanalyse system.
    3. Vælg en optimal fryse ramme skal udføres billede manuelt for yderligere målinger. Kontroller billederne i den mindre krumning af den opstigende aorta. Hvis plak i opstigende aorta kan ses, måle den maksimale plaque tykkelse. Hvis plak i opstigende aorta ikke kan ses, måles den maksimale IMT.
    4. Mål IMT (afstanden mellem den vaskulære luminal-intimale grænseflade og den mediale-adventitial grænseflade). Mål den maksimale plaque tykkelse (den tykkeste afstand mellem grænsen af det vaskulære lumen og det utilsigtede lag).
    5. Gennemsnitlige data fra tre læsions steder (figur 3).
  3. Bestemmelse af kardiel dysfunktion ved hjælp af ekkokardiografi
    Bemærk:
    Undersøg hjertets funktion gennem ekkokardiografi ved hjælp af et microultrasound-system, som tidligere beskrevet22.
    1. Direkte en ultralyd stråle mod hjertet, nær de papillære muskler.
    2. Opnå todimensionel elektrokardiogram-baseret kilohertz-visualisering.
    3. Udfør in vivo transthoracic ekkokardiografi af venstre ventrikel ved hjælp af et 30 MHz scannings hoved.
    4. Mål parametre forbundet med hjertets funktion digitalt fra M-mode tracings.
    5. Gennemsnitlige data fra tre til fem kardiale cyklusser (tabel 1).
  4. Intra-og interobserver-variabilitet
    1. For validering af intraobserver variabilitet, analysere data af en operatør ved to forskellige lejligheder.
    2. Til evaluering af interobserver variabilitet, analysere data af en anden operatør.

4. ugentlig måling af legemsvægt og plasma total kolesterol (TC) og triglycerid (TG)

  1. Ugentlig måling af legemsvægt
    1. Mål legemsvægt en gang om ugen fra uge-1 til uge 12.
      Bemærk: n = 8 mus pr. gruppe.
  2. Plasma præparat
    1. Før du samler blodprøver gennem intrakardiel punktering, forberede sprøjter og rør. Brug EDTA som antikoagulerende middel. Tilsæt 10 μL 0,5 M EDTA til hver 2 mL sprøjte, og tilsæt 8 μL 0,5 M EDTA til hvert 1,5 mL rør.
    2. Ved uge 12, efter en overnatning hurtigt, bedøve mus med Avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneally).
      Bemærk: n = 3 mus pr. gruppe.
    3. Forbered ventrale brystområdet med 70% ethanol.
    4. Brug sakse og pincet til at åbne brysthulen og skær ribbenene, indtil det bankende hjerte er eksponeret.
    5. Indsæt 25 G nålen i højre ventrikel. Aspirer langsomt, indtil blodet begynder at flyde ind i sprøjten.
      Bemærk: Vi bruger engangssprøjter i steril tilstand med 25 G nåle (Se tabel over materialer).
    6. Fortsæt med at aspirere med stabilt, jævnt tryk. Hvis der ikke ses blod, skal du flytte nålen og gentage aspiration.
    7. Hold mus dybt bedøvet før indsamling af den nødvendige blodvolumen. Normalt kan der opsamles op til 1 mL blod. Euthanize musene ved livmoderhals dislokation under denne dybe bedøvelses tilstand.
    8. Blodprøver afpipetteres i 1,5 mL rør, og blodet vendes grundigt for at sikre, at EDTA blandes i blodet. Placer derefter blodprøver på is med det samme.
    9. Centrifugerings prøverne i 20 minutter ved 400 x g ved 4 °c inden for 30 min. af samlingen.
    10. Saml supernatanten forsigtigt. Og opbevar plasmaprøverne ved-80 °C.
  3. Konstruere standardkurver for måling af TC-eller TG-indhold
    1. For TC standardkurven, forberede forskellige koncentrationer af kolesterol standarder: 0 mmol/L, 0,52 mmol/L, 1,03 mmol/L, 2,07 mmol/L, 4,14 mmol/L, 6,20 mmol/L, 8,27 mmol/L og 10,34 mmol/L. foranstaltning OD for hver kolesterol standard. Sæt gennemsnitlig OD for hver kolesterol standard. Som den lodrette (Y) akse værdi, Angiv koncentration som den vandrette (X) akse værdi. Opret en standardkurve ved hjælp af en statistisk software.
    2. For TG standardkurven, forberede forskellige koncentrationer af TG standarder: 0 mmol/L, 0,45 mmol/L, 0,90 mmol/L, 1,81 mmol/L, 3,62 mmol/L, 5,42 mmol/l, 7,23 mmol/L og 9,04 mmol/L. foranstaltning OD for hver TG standard. Sæt gennemsnitlig OD for hver TG-standard som den lodrette (Y) akse værdi; Indstil koncentration som den vandrette (X) akse værdi. Opret en standardkurve ved hjælp af en statistisk software.
      Bemærk: En fire-parameter logistisk kurve fitting (4-pl) blev anvendt til standardkurve konstruktionen i nærværende undersøgelse. Kontroller standardkurven, før du måler plasmaprøverne, og sørg for, at r2 er større end 0,995.
  4. Måling af TC-indhold
    1. Mærk flasken med farve reagens (25 mL) fra TC-analysesættet som "TC-arbejdsopløsning".
    2. Vortex de afkølede prøver kortvarigt. Klargør fortyndinger: 20 μL plasma i 80 μL destilleret vand. Kortvarigt vortex fortyndinger.
    3. Der tilsættes 2,5 μL kolesterol standarder (5,17 mmol/L) eller 2,5 μL fortyndet plasma eller 2,5 μL destilleret vand (tomt) til de relevante brønde på en 96-brønd plade. Triplication anbefales.
    4. Til alle brønde tilsættes 250 μL af farve reagenset.
    5. Inkuber ved 37 °C i 10 min.
    6. Drej mikropladen læseren på og lad en 10 min varme op.
    7. Fjern pladen (-erne) fra inkubator og Læs mikropladen læseren ved 510 nm. Sørg for, at der hverken er bobler eller støv i mikrotiterbrøndene eller i bunden af pladen.
    8. TC-koncentrationen beregnes på følgende måde:
      TC CONT. = kolesterol standarder CONT. × (plasmaprøve OD-blank O. D)/(kolesterol standarder OD-blank O. D)
  5. Måling af TG-indhold
    1. Mærk flasken med farve reagens (25 mL) fra TG-analysesættet som "TG-arbejdsopløsning".
    2. Vortex de afkølede prøver kortvarigt.
    3. Der tilsættes 2,5 μL TG-standarder (2,26 mmol/L) til eller 2,5 μL fortyndet plasma eller 2,5 μL destilleret vand (tomt) til passende brønde af en 96-brønd plade. Triplication anbefales.
    4. Til alle brønde tilsættes 250 μL af farve reagenset.
    5. Inkuber ved 37 °C i 10 min.
    6. Drej mikropladen læseren på og lad en 10 min varme op.
    7. Fjern pladen (-erne) fra inkubator og Læs mikropladen læseren ved 510 nm.
      Bemærk: Sørg for, at der ikke er bobler eller støv til stede i mikrotiterbrøndene eller på bunden af pladen.
    8. TG-koncentrationen beregnes på følgende måde:
      TG CONT. = TG standarder CONT. × (plasmaprøve OD-blank O. D)/(TG standarder OD-blank O. D)

5. en Face analyse af aorta aterosklerotiske læsioner

  1. Aorta isolation og excision
    1. Ved uge 12, efter en overnatning hurtigt, bedøve mus med Avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneally). Euthanize musene ved livmoderhals dislokation under denne dybe bedøvelses tilstand.
      Bemærk: Vi brugte 3 mus pr. gruppe.
    2. Forbered ventrale brystområdet med 70% ethanol. Brug sakse og pincet til at åbne brysthulen og skær ribbenene, indtil det bankende hjerte er eksponeret.
    3. Fyld en 50 mL sprøjte med fosfat bufferet saltvand ved pH 7,4 (Se tabel over materialer). Indsæt en 25 G nål i venstre ventrikel og skær det højre atrium for at undgå højt tryk fra perfusion.
    4. Udfør in situ perfusion ved en strømningshastighed på 0,05-0,08 mL/min. absorbere perfusions væske med væv.
    5. Fjern ribben og lunger i thorax hulrum med saks og pincet. Derefter åbne bughulen og fjerne organerne inde for en bedre udsigt over aorta.
    6. Fjern aorta ved at holde hjertet med mikropincet og adskille aorta fra rygsøjlen dorsalt med microscisssors indtil bækkenbens bifurcation.
      Bemærk: Ved dissekting i nærheden af de renale atriale grene, skæres dybt ved hjælp af mikrosaks for at undgå aorta skader.
    7. Fix hjertet og aorta for 48 h i 4% PARAFORMALDEHYD. Aortas opbevares i saltvand ved stuetemperatur eller ved 2-8 °C i et par timer.
      Bemærk: Denne procedure vil lette rengøringen.
  2. Klargøring af aorta
    1. Fjern hjertet. Fjern forsigtigt de utilsigtede væv fra Aortas ved hjælp af mikropincet og microscisssors under et stereomicroskop. Brug saltvand til at holde vævet fugtig under rengøringen.
      Bemærk: Vær omhyggelig med ikke at rive eller Nick aorta og nogle vigtige grene, såsom innominere arterie, venstre fælles carotis arterie, og venstre subclavia arterie.
    2. Efterlad 1 mm af innominere og venstre almindelige carotis arterier og afbrød hele venstre subclavia arterie.
    3. Skær åbne den ydre krumning gennem innominere arterien, derefter til venstre fælles carotis arterie, og derefter til venstre subclavia arterie.
    4. Skær åben langs den indre krumning af den stigende del til bunden af mave delen.
    5. Fastgør aorta fladt på en sort plastik plade og anvende saltvand for at holde Aortas fra tørring.
  3. Billede af den intimale region aorta
    1. Tag billeder af en Face Aortas med et stereomikroskop. Medtag en millimeter skala lineal i billederne for at kalibrere målinger.
    2. Medtag buen og thorax regioner i samme billede og maveregionen i en anden. Gem billeder som JPEG eller TIFF.
      Bemærk: Arch regionen er fra krydset af myokardiet til 3 mm distale fra venstre subclavia arterien, thorax regionen er 3 mm distale til venstre subclavia arterie til den sidste interkostale arterie, og abdominal regionen er den sidste interkostale arterie til bækkenbens Tvedeling.
  4. Kvantificering af aterosklerotisk læsion-en-ansigts metode
    1. Kalibrering
      1. Åbn billedet med billedanalyse software (Se tabel over materialer), gå til rumlig kalibrering og følg instruktionerne.
      2. Skift referenceenheder til mm ved at placere linealen over stregen.
    2. Måling
      1. Indstil korrekt kalibrering for hvert billede.
      2. Mål 3 mm på linealen.
      3. Bue og thorax region måling: skitsere buen regionen fra krydset af myokardiet til 3 mm distale fra venstre subclavia arterien og thorax regionen fra 3 mm distale til venstre subclavia arterie til den sidste interkostale arterie. Spor læsioner i buen og thorax regionen og se på aorta gennem mikroskopet.
      4. Abdominal region måling: skitsere maveregionen fra slutningen af thorax region til bækkenbens bifurcation. Spor læsioner i maveregionen og se på aorta gennem mikroskop.
      5. Beregn læsionsområdet i forhold til den indvendige overflade af aorta.
      6. Kontroller kvantificeringen gennem en anden observatør, der er blind for studiegrupperne.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

En typisk eksperimentel behandlingsordning, som anvendes i denne undersøgelse, er illustreret i figur 1. Ved fravænning (alder 28 dage), kvindelige apoE-/- C57BL/6j mus blev bedøvet withavertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneally). Mus var bilateralt OVX eller Sham drives gennem en 1 cm dorsale incision. En uge efter bilateral OVX blev musene fodret med et højt kolesterolindhold (1,25% kolesterol, 0% cholat) i 12 uger. 17β-estradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) blev peroralt administreret parallelt via hasselnødde spredning i løbet af de sidste 9 ugers behandling. Alle mus blev vejet ugentligt. Som vist i figur 2blev virkningerne af både eksogene østrogener (17β-estradiol og PPD) på plasma-lipiderne og den ugentlige legemsvægt af ApoE-/- mus efter østrogenmangel evalueret. Efter 12 uger med en høj kolesterol diæt viste OVX-mus en bemærkelsesværdig stigning i plasmakoncentrationen af TC og TG. OVX-mus peroralt administreret med 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning udviste signifikant lavere plasma-TC-koncentrationer end fingbetjente mus (figur 2a). Plasma-TG-niveauerne faldt i OVX-mus peroralt administreret med 17β-østradiol, men ikke med PPD (figur 2b). Som vist i figur 2c, mens en tendens mod øget legemsvægt (BW) blev observeret i ovx-mus sammenlignet med de fingerede mus, blev BW i ovx-mus peroralt administreret med 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning efter en højt kolesteroldiæt viste en tendens modsat, at i OVX mus. Men den endelige kropsvægt af mus i forskellige grupper viste ingen væsentlige ændringer.

Kardiovaskulær funktion blev evalueret ved hjælp af ekkokardiografi. Som vist i figur 3blev den maksimale plaque eller IMT af opstigende aorta målt i ovx-mus peroralt administreret med 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning. Aortabuen af høj-kolesterol-diæt-fodret apoE-/- mus blev observeret af B-mode ekkokardiografi. Repræsentative langsgående billeder af stigende aorta blev fanget af skal udføres biomicroskopi. De røde pile indikerer plaques. OVX-mus udviste øget maksimal plaque eller IMT af opstigende aorta sammenlignet med fingbetjente mus. Efter udskiltes administration af 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning faldt den maksimale plaque eller IMT i opstigende aorta markant sammenlignet med ovx-musene. (Figur 3). Vi observerede også kardiel dysfunktion som reaktion på OVX i apoE-/- mus efter en 12-ugers højt-kolesterol-diæt fodring (tabel 1). Hjertets funktion blev undersøgt gennem ekkokardiografi. I ovx-mus kunne udskiltes administration af 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning delvist dæmpe parametre, der viste kardiel dysfunktion.

Dernæst brugte vi en Face analyse til at bestemme aorta aterosklerotiske læsioner. Som tidligere rapporteret, efter 12 uger, en høj-kolesterol kost førte til aterosklerotisk plaque dannelse på luminale overflade af aorta. Som vist i figur 4steg den gennemsnitlige procentdel af aorta læsionsområdet i forhold til hele aorta området signifikant i ovx-mus. Efter udskiltes administration med 17β-estradiol eller PPD via hasselnødde spredning faldt aorta læsionsområdet bemærkelsesværdigt sammenlignet med den tilsvarende ovx-mus. Dette resultat er i overensstemmelse med beskyttelsen af 17β-estradiol eller PPD fra udvikling af aterosklerose præsenteret i figur 3.

Afslutningsvis, den foreslåede procedure, som bruger bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus, er gældende for screening ikke-invasive eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen. Det er også især nyttigt for at undgå skadelig tumorigenetisk kapacitet.

Figure 1
Figur 1. Muse behandling ordning. Ved fravænning (alder, 28 dage), kvindelige apoE-/- C57BL/6j mus blev bedøvet med Avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt). Mus var bilateralt ovariectomized (OVX) eller Sham drives gennem en 1 cm dorsale incision. En uge efter OVX blev musene fodret med et højt kolesterolindhold (1,25% kolesterol, 0% cholat) i 12 uger. 17β-estradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) blev peroralt administreret parallelt via hasselnødde spredning i løbet af de sidste 9 ugers behandling. Alle mus blev vejet hver uge. Ved uge 12 blev kardiovaskulær Funktionsanalyse evalueret ved hjælp af ekkokardiografi. Efter 12 uger af en høj-kolesterol diæt, alle mus blev euthanized, og blodprøver og væv blev høstet til yderligere undersøgelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2. Virkninger af forskellige eksogene østrogener på plasma lipiderne og ugentlig legemsvægt i apoE-/- mus. Sham-mus gennemgik en mock-operation og fik en høj-kolesterol diæt. OVX-mus gennemgik bilateral ovariektomi og derefter tilfældigt opdelt i følgende grupper: den OVX gruppe, som blev behandlet med en høj-kolesterol diæt; den ovx/E2 (17β-estradiol) gruppe, som fik en høj-kolesterol diæt i 12 uger plus 0,1 mg/kg E2 gennem udskiltes administration via hasselnød spredning i de sidste 9 ugers behandling; og ovx/PPD gruppen, som fik en høj-kolesterol diæt i 12 uger plus 0,5 mg/kg PPD gennem udskiltes administration via hasselnød spredning i de sidste 9 ugers behandling. Det totale kolesterol-og triglyceridniveau i plasma blev målt via enzymatiske metoder (A-B). Data udtrykkes som middel ± SEM af n = 5 mus pr. gruppe. Ugentlige legems vægte blev målt fra uge-1 til uge 12 (C). Data udtrykkes som middel ± SEM af n = 8 mus pr. gruppe. En-vejs ANOVA efterfulgt af Dunnetts post hoc-test blev udført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med Sham Group; # p < 0,05 sammenlignet med ovx-koncernen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3. IMT eller maksimal plaque tykkelse målinger i apoE-/- mus. B-mode billeder, der viser aortabuen af apoE-/- mus præsenteres. De langsgående billeder af stigende aorta blev opnået ved ultrasonografisk biomicroskopi. Maksimal plaque eller IMT af opstigende aorta (mm) blev målt. De ultrasonografiske billeder viser plaque i den mindre krumning af opstigende aorta; de røde pile indikerer plaques. Data udtrykkes som middelværdien ± SEM af n = 8 mus pr. gruppe. En-vejs ANOVA efterfulgt af Dunnetts post hoc-test blev udført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med Sham Group; # p < 0,05 sammenlignet med ovx-koncernen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4. En Face analyse af aorta aterosklerotiske læsioner i apoE-/- mus. Den gennemsnitlige procentdel af aorta læsionsområdet i forhold til hele aorta området blev kvantificeret i alle grupper. Repræsentative mikrografer over de intimale læsioner (en ansigt) af aorta vises. Data udtrykkes som middelværdien ± SEM af n = 3 mus pr. gruppe. En-vejs ANOVA efterfulgt af Dunnetts post hoc-test blev udført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med Sham Group; # P < 0,05 sammenlignet med OVX-koncernen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Sham OVX OVX/E2 OVX/PPD
LVIDd (mm) 3,72 ± 0,10 3,74 ± 0. 24 3,68 ± 0,16 3,88 ± 0,16
Lvid'er (mm) 2,34 ± 0,11 2,16 ± 0,22 2,12 ± 0,13 2,55 ± 0,12#
IVSd (mm) 0,83 ± 0,09 0,84 ± 0,07 0,91 ± 0,05 0,74 ± 0,06#
IVSs (mm) 1,24 ± 0,02 1,35 ± 0,06 * 1,45 ± 0,04# 1,09 ± 0,04#
PWTd (mm) 0,7 ± 0,10 0,68 ± 0,04 0,72 ± 0,07 0,58 ± 0,07#
PWTs (mm) 1,10 ± 0,12 1,17 ± 0,08 1,24 ± 0,04 0,98 ± 0,08#
EDV (mm3) 58,89 ± 3,74 59,88 ± 9,02 57,39 ± 5,79 65,11 ± 6,13
ESV (mm3) 18,86 ± 2,17 15,75 ± 4,00 14,85 ± 2,37 23,45 ± 2,64#
EF (%) 67,84 ± 1,52 73,91 ± 3.63 * 74,23 ± 1,50 63,91 ± 3,61#
FS (%) 37,19 ± 1,53 42,22 ± 1,17 * 42,36 ± 1,21 34,28 ± 2,69#
LVIDd = LV indvendig diameter under diastole; LVIDs = LV indvendig diameter under systole; IVSd = intern ventrikel septum under diastole; IVSs = intern ventrikel septum under systole; PWTd = posterior vægtykkelse under diastole; PWTs = posterior vægtykkelse under systole; EF = udslyngning fraktion; FS = fraktioneret forkortelse; EDV = endediastolisk volumen; ESV = endesystolisk volumen.

Tabel 1: evaluering af hjertets funktion ved hjælp af ekkokardiografi. Parametre forbundet med hjertefunktion digitalt fra M-mode tracings blev kvantificeret i alle grupper. Data udtrykkes som middelværdien ± SEM af n = 8 mus pr. gruppe. En-vejs ANOVA efterfulgt af Dunnetts post hoc-test blev udført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med Sham Group; # p < 0,05 sammenlignet med ovx-koncernen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den beskrevne metode er en musemodel, der ligner lipid-forstyrrelser og åreforkalkning set hos menopausale kvinder. Det er veldokumenteret, at østrogenmangel hos postmenopausale kvinder kan forværre forekomsten af præ-eksisterende eller igangværende hyperkolesterolæmi med progressivt komplekse og udbredte atherosclerostiske læsioner1. For at efterligne den atherosclerosis-tilbøjelige status i klinikken, ApoE-mangelfuld mus, en reproducerbar og bekvem kilde til dyr, som til at studere atherogenesis23,24,25, blev anvendt. Som det fremgår af nærværende studie, viste kvindelige OVX apoE-/- mus ved fravænning en stigning i aterosklerotiske læsioner i aorta sammenlignet med kvindelige ApoE-/- mus med intakt ovariefunktion. I denne dyremodel, vi også sammenlignede effekten af forskellige eksogene østrogen udskiftning terapier på aterosklerotisk læsion størrelse under en kontrolleret kosten tilstand.

Den dobbelte rygkant-lateral indsnit af bilateral ovariektomi præsenteret i denne artikel er teknisk lettere, mindre tidskrævende, og sikrere sammenlignet med den midterste dorsale-lateral indsnit eller midterste abdominal indsnit af bilateral ovariektomi i ApoE-/- mus. Bilateral ovariektomi via midterste abdominal indsnit præsenterer en stor ulempe: det kan forårsage alvorlig bughulen vedhæftning, som igen, kan påvirke stof absorption. Nylige rapporter viser, at udskiltes administration af lavdosis 17β-østradiol beskytter mod cerebral iskæmi26. Derfor valgte vi udskiltes administration via hasselnødde spredning i nærværende undersøgelse. Kommerciel langsom-Release pellets er en hyppigt anvendte administration måde til at teste farmakologiske virkninger i en musemodel, men kan forårsage skadelige cerebral skade27. Implantater er tilbøjelige til infektioner, især hvis mus er udsat for bilateral OVX via en dobbelt dorsal-lateral incision. Selv om omhyggelig desinfektion af huden før indsnit udføres, infektion er vanskeligt at undgå. Vand administration og oral sonde er to mindre hyppigt anvendte metoder, der er blevet testet. Administration af hormonet via drikkevand er meget gavnlig på grund af at det er ekstremt noninvasive, fordi næsten ingen dyre håndtering er påkrævet. 17β-østradiol er dog ikke opløseligt i vand uden en emulgator. Således brugte vi DMSO i en koncentration på mindre end 0,5% for at lette dets opløsning i drikkevand. Men, denne tilgang til langsigtet administration af lav-dosis DMSO er vanskeligt at kontrollere og giftige for mus eller mennesker. Mus kan også drikkevand over hele 24 h af overvågning, hvilket gør det faktiske stofforbrug vanskeligt at bestemme. En anden ulempe ved denne fremgangsmåde er, at den enkeltes vandindtag er svært at kontrollere. Den største ulempe ved oral sonde er, at det er stressende for dyr og kan forårsage Esophageal skade og påvirke spise adfærd. I den beskrevne metode blev der gennemført en 5-dages træning af en spise hormon-fri hasselnødde spredning forud for forsøget. Ca. mere end 95% af musene vil acceptere hasselnødde spredningen, hvis de uddannes som det, der er nævnt i protokol afsnittet. Når den er fuldt beboet, vil de fleste af musene forbruge den inden for få sekunder. I overensstemmelse med et tidligere studie6,11faldt plasma E2-niveauerne i ovx-mus sammenlignet med det fingerede modstykke ved uge 4 (data ikke vist). I uge 12 efter bestemmelse, vi observeret uterus atrofi i OVX-opererede mus. Men, de cirkulerende østrogen niveauer blev ikke overvåget efter OVX i nærværende undersøgelse.

I fravær af påvisning af aterosklerotiske læsioner i opstigende aorta, kan aorta IMT evalueres ved at måle afstanden mellem lumen-intimale grænseflade og mediale-adventitial interface. Denne måling er baseret på en tidligere valideret protokol i mennesker28. Gennemsnitlige data fra tre steder, der er ca. 100 μm bortset fra hinanden. Den kardiale arbejdsbyrde øges efter OVX i apoE-/- mus kan på grund af kompenserende hypertrofisk vækst af individuelle kardiomyocytter, som i sidste ende kan føre til at øge hjertets udgang (tabel 1). Der henviser til, at ved udskiltes administration af PPD i 9 uger blev den kompenserende Hjertehypertrofi svækket med en EF-% sammenlignelig med det fingerede modstykke. For validering af intra-eller Inter-observatør variabilitet analyseres Variationskoefficienter for målinger af aterosklerotisk tykkelse og parametre forbundet med hjertets funktion af en operatør ved to forskellige lejligheder eller af en anden operatør.

Som præsenteret i vores undersøgelse, OVX mus peroralt administreret med 17β-estradiol eller PPD via hasselnød spredning tendens til at forhindre kropsvægt øgning og reducere østrogenmangel-associeret lipid forstyrrelse, selv om ingen signifikante forskelle i den endelige legemsvægt var Observeret. Tidligere undersøgelser har også vist, at lipid parametre variation kan være for lille til at forklare antiatherosclerotiske virkninger af hormoner29. De gavnlige virkninger af østrogen er ikke begrænset til ændringer i lipid protein egenskaber. Nogle nonlipid effekter af østrogen30,31, såsom betændelse, endoteldysfunktion, og hæmodynamiske stase, kan lette hjerte-kar-beskyttelse i sygdomme hos mennesker. I betragtning af resultaterne observeret i nærværende undersøgelse, beskyttelse af eksogene østrogen fra åreforkalkning udvikling er delvist uafhængig af systemiske lipidniveauer. I endotelceller hæmmede PPD udtryk for adhæsions molekyle og inflammatoriske mediatorer (data ikke vist). Desuden kan PPD undertrykke perivaskulær fedtvæv dannelse, som er tæt korreleret med endotel anti-contractility. Derfor var virkningen af PPD og 17β-estradiol anderledes, og den underliggende mekanisme skal undersøges nærmere. Utvivlsomt, overdreven forbrug af energi-rige fødevarer, såsom hasselnød spredning, kan forårsage vægtøgning. De små mængder hasselnød spredning (200 mg · kg-1· dag-1) som nævnt i denne undersøgelse kunne dog kun være ansvarlig for mindre end 5% af dyrenes daglige energi indtag. Også, ingen indlysende vægtøgning blev påvist ved hjælp af denne mængde af hasselnød spredning. Brugen af 17β-estradiol og PPD var hovedsagelig til behandling af kardiovaskulær sygdom. Fordi, under progression af åreforkalkning i OVX-opererede aopE-/- mus, fra uge 4 til uge 12, 17β-estradiol eller PPD blev peroralt administreret.

En ikke-ubetydelig punkt i den kliniske brug af HRT er dens skadelige bivirkninger, som omfatter æggestokkene og brystkræft13,14. Phytoøstrogen testet i nærværende undersøgelse er en steroid saponin sammensatte findes i Dioscorea planter. PPD er blevet rapporteret at have en hæmmende effekt på nogle Cancer cellelinjer20. Derudover viser PPD antiatherosclerotiske egenskaber sammenlignelig med dem af 17β-estradiol. Den model, vi præsenterer her, kan hjælpe med at screene potentielle kandidat forbindelser, herunder phytoøstrogen, som udøver en minimal effekt på tumor spredning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af den nationale Natural Science Foundation i Kina (81202526 til J.X.), National Natural Science Foundation i Kina (81302769 til B.S.), Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 til B.S.), den kinesiske postdoc Science Foundation (20110490325 til J.X.), og Ph.D. programmer Foundation af Undervisningsministeriet i Kina (20121106120031 til B.S.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
17β-estradiol, >98% Sigma-Aldrich E8875-250MG Estrogen
Disposable syringes (with 25 G needles) Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd 0.5*19TWLB Cardiac bleeding
High-cholesterol mouse diet Huafukang Bio-Technology N/A 1.25% cholesterol, 0% cholate
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System VisualSonics Vevo®770 Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction
2-Methyl-2-butanol Sigma-Aldrich 152463-250ML Preparation of avertin
Micro Dissecting forceps, Curved 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting forceps, Straight 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Monofilament suture 4-0 1/2 5 x 12 19 mm Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd R413 Suture and ligation of the tissues
Nut cream (Nutella) Ferrero N/A Medium for peroral 17β-estradiol or PPD
OptiVisor optical glass binocular magnifier Dohegan Optical Company Inc. N/A Assistant of identifying the tissues during ovariectomy
Phosphate-buffered saline at pH 7.4 SIGMA P3813 Preparing 1 L saline
Pro MultiLabel Microplate Reader Tecan Infinite M1000 Plasma TC and TG determination
Pseudoprotodioscin Shanghai Winherb Medical S & T Development W-0427 CAS registry no. 102115-79-7
Rimadyl, 50 mg/mL Pfizer Pharma GmbH 462986 Postoperative analgesia after ovariectomy
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547-1L Dissolving the 17β-estradiol or PPD
Solcoseryl Eye-Gel Menarini, Solco Basle Ltd. Eye protection during anesthesia
Stereo microscope MCALON MCL-6STV Image of the intimal region of aorta
Table model high speed centrifuge SIGMA 1-14K Preparation of plasma
Scissors, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Scissors, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tribromoethanol Sigma-Aldrich T48402-5G Preparation of avertin
Triglycerides (TG) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A110-1 Plasma TG determination
Total cholesterols (TC) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A111-1 Plasma TC determination

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133, (4), e38-e360 (2016).
  2. Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329, (4), 247-256 (1993).
  3. Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26, (6), 1403-1410 (1995).
  4. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420, (6917), 868-874 (2002).
  5. Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153, (1), 81-88 (2000).
  6. Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, (3), 10022-10027 (1996).
  7. Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45, (2), 454-462 (2000).
  8. Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63, (5), 1063-1069 (2014).
  9. Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258, (5081), 468-471 (1992).
  10. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14, (1), 133-140 (1994).
  11. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64, (e4013), 1-4 (2012).
  12. Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288, (3), 321-333 (2002).
  13. Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372, (9639), 608-610 (2008).
  14. Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15, (6B), 2639-2642 (1995).
  15. Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76, (6), 1191-1201 (2002).
  16. Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4, (e551), 1-13 (2013).
  17. Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299, (1), C128-C138 (2010).
  18. Guivarc'h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7, (13), 1-17 (2018).
  19. Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107, (4), 466-475 (2010).
  20. Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23, (4), 545-550 (2009).
  21. Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833, (15), 441-450 (2018).
  22. Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168, (7), 1758-1770 (2013).
  23. Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10, (6), 1051-1057 (1990).
  24. Keaney, J. F. Jr, et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89, (5), 2251-2259 (1994).
  25. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14, (1), 133-140 (1994).
  26. Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281, (5), R1531-R1539 (2001).
  27. Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25, (3), 414-420 (2005).
  28. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74, (6), 1399-1406 (1986).
  29. Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143, (12), 4495-4501 (2002).
  30. Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75, (6), 1102-1109 (1987).
  31. Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40, (5), 893-900 (1999).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics