Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia

Biology

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Summary

O advento da tecnologia local específico recombinase (SSR) eo sistema Cre / lox tem levado a inúmeros avanços em biologia molecular, e provou-se como uma valiosa ferramenta para avaliar a função do gene em animais transgênicos. Esta entrevista aborda o mecanismo de recombinação sítio específica por Ciclização recombinase (CRE) e como o uso desta enzima tem levado ao desenvolvimento de mutagênese condicional, que tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock out estratégias.

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Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).

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Abstract

Site-specific recombinase tecnologia (SSR) permite a manipulação da estrutura dos genes para explorar a função do gene e se tornou uma ferramenta integrante da biologia molecular. Site-specific recombinases são proteínas que se ligam a seqüências de DNA-alvo distintos. O sistema Cre / lox foi descrita pela primeira vez em bacteriófagos durante a década de 1980. Cre recombinase é uma topoisomerase tipo I que catalisa site-specific recombinação de DNA entre dois loxP (locus de X-over P1) sites. O sistema Cre / lox não requer cofatores. Seqüências distintas LoxP contêm sítios de ligação para recombinases Cre que envolvem uma seqüência núcleo direcional onde a recombinação e rearranjo ocorre. Quando as células contêm sites loxP e expressar a recombinase Cre, um evento de recombinação ocorre. Dupla fita de DNA é cortada em ambos os locais loxP pelo Cre recombinase, reorganizados, e ligados ("tesoura e cola"). Produtos do evento de recombinação depende da orientação relativa das seqüências assimétrica.

Tecnologia SSR é freqüentemente usado como uma ferramenta para explorar a função do gene. Aqui, o gene de interesse é flanqueado com Cre-alvo locais loxP ("floxed"). Os animais são então cruzados com animais expressando a recombinase Cre sob o controle de um promotor de tecidos específicos. Nos tecidos que expressam a recombinase Cre se liga a seqüências alvo e extirpa o gene floxed. Deleção do gene controlado permite a investigação da função dos genes em tecidos específicos e em momentos distintos. Análise da função do gene empregando tecnologia SSR --- mutagênese condicional - tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock-outs onde deleção do gene é freqüentemente letal.

Comments

3 Comments

  1. Hi. The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included. Thank you. Cheers, Lopez Gilsinia Gilroy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 31, 2008 - 5:54 AM
  2. request for article

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 13, 2010 - 7:59 AM
  3. request for the articel

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 8, 2010 - 4:52 PM

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