Interview: HIV-1 proviraal DNA Excisie Met behulp van een Evolved recombinase

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

De huidige HIV-1-strategieën handelen om de virale levenscyclus te onderdrukken, maar niet werkelijk uit te roeien infectie. Hier tonen we aan dat een aangelegde recombinase efficiënt kunnen accijnzen geïntegreerd HIV-1 proviraal DNA van het genoom van de geïnfecteerde cellen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

HIV-1 integreert in het gastheer-chromosoom van geïnfecteerde cellen en blijft als een provirus geflankeerd door lange terminal repeats. De huidige behandeling van strategieën in de eerste plaats richten virus enzymen of virus-cel fusie, het onderdrukken van de virale levenscyclus zonder uitroeien van de infectie. Omdat de geïntegreerde provirus is niet het doelwit van deze benaderingen, nieuwe resistente stammen van HIV-1 kunnen voordoen. Hier melden wij dat de gemanipuleerde recombinase Tre (zie Moleculaire evolutie van de Tre recombinase, Buchholz, F., Max Planck Instituut voor Celbiologie en Genetica, Dresden) efficiënt geïntegreerd HIV-1 proviraal DNA accijnzen uit het genoom van de geïnfecteerde cellen. Produceerden we loxLTR die virale pseudotypes en geïnfecteerde cellen HeLa om te onderzoeken of Tre recombinase kan accijnzen de provirus van het genoom van HIV-1 geïnfecteerde menselijke cellen. Een virusdeeltje-releasing cellijn werd gekloond en getransfecteerd met een plasmide dat Tre of met een ouderlijk toezicht vector. Recombinase activiteit en virus productie werden gevolgd. Alle testen aangetoond dat de efficiënte verwijdering van de provirus uit de geïnfecteerde cellen zonder zichtbare cytotoxische effecten. Deze resultaten dienen als bewijs van het principe dat het mogelijk is om een ​​recombinase evolueren naar specifiek zijn gericht op een HIV-1-LTR en dat dit recombinase in staat is om weg te snijden van de HIV-1 provirus van het genoom van HIV-1-geïnfecteerde menselijke cellen.

Voordat een aangelegde recombinase kan de therapeutische arena betreden, maar belangrijke obstakels moeten worden overwonnen. Een van de meest kritieke problemen, waarvoor we staan, zijn een efficiënte en veilige levering gerichte cellen en de afwezigheid van bijwerkingen.

Protocol

Kijk dan op gerelateerde video's recht Principes van site-specifieke recombinase (SSR) Technologie en Molecular Evolution van de Tre recombinase voor meer informatie over locatie-specifieke recombinatie en engineering van de site-specificiteit van recombinase enzymen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Comments

10 Comments

  1. Please this must be in clinical trials asap..  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 24, 2008 - 7:26 PM
  2. Moving faster with recombinase. To tell the truth i don' t trust completely in the results of the research, any kind of research, humans trial included. Kp-1461 has been halted almost at the end of phase ² humans trial.. and now seems that kp-1461 can not work in vitro too.. The koronispharma managers have to pay for this.. A LOT OF MONEY.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2008 - 8:56 AM
  3. how can I download a video protocol in my flash disc?  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 20, 2008 - 4:36 PM
  4. Dear Anonymous, please feel free to contact us at support@jove.com and we could discuss your problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 6, 2008 - 6:34 PM
  5. How can I get in touch with doctor Joachim Hauber? I am HIV positive, there isn´t a single day ever since I was diagnosed this disease that I don´t feel like my life just ended. I would do anything to get cured.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2008 - 1:37 PM
  6. Reply
    Posted by: Anonymous
    November 3, 2008 - 8:41 AM
  7. Interesting presentation on remarkable research. Worthy of further discussion

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 23, 2009 - 1:48 PM
  8. Have you sequenced the host cell genome in the wild type control vs. the HIV-1 infected vs Tre recombinase cells to
    definitively show where the HIV-1 genome is inserting, and that it is removed?

    Reply
    Posted by: Douglas C.
    October 21, 2009 - 9:41 AM
  9. why can't i get an update on this work?? i have looked everywhere. it has gotten so little publicity..i dont get it

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2010 - 1:04 AM
  10. hi
    i need full text this article
    plz
    tanx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2010 - 4:23 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics