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- Preparación de una sola célula suspensiones de bazo de ratón con el disociador gentleMACS
- La preparación estandarizada de un solo suspensiones de células de tejido pulmonar de ratón con el disociador gentleMACS
- Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural
Other Publications (25)
- Carcinogenesis
- FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology
- Virchows Archiv : an International Journal of Pathology
- Matrix Biology : Journal of the International Society for Matrix Biology
- Carcinogenesis
- Molecular and Cellular Neurosciences
- Pathology, Research and Practice
- European Journal of Cancer (Oxford, England : 1990)
- The Journal of Investigative Dermatology. Symposium Proceedings / the Society for Investigative Dermatology, Inc. [and] European Society for Dermatological Research
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Articles by Andreas Bosio in JoVE
JoVE General
Preparación de una sola célula suspensiones de bazo de ratón con el disociador gentleMACS
Este video describe un simple ahorro de tiempo para la técnica de la disociación del tejido automatizado utilizando el disociador gentleMACS para preparar una sola célula suspensiones de esplenocitos de ratón.
JoVE General
La preparación estandarizada de un solo suspensiones de células de tejido pulmonar de ratón con el disociador gentleMACS
Disociar las células de tipos específicos de tejido requiere de parámetros específicos para la agitación del tejido para obtener un alto volumen de células viables, cultivables. El Miltenyi gentleMACS disociador optimiza esta tarea con un protocolo simple y práctico. En esta publicación, el uso de este aparato en el tejido pulmonar se explica.
JoVE General
Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural
Disociar las células de tipos específicos de tejido requiere de parámetros específicos para aggitation tejido para obtener un alto volumen de células viables, cultivables. El Miltenyi gentleMACS disociador optimiza esta tarea con un protocolo simple y práctico. En esta publicación, el uso de este aparato en el tejido nerual se explica.
Other articles by Andreas Bosio on PubMed
Cinética De Perfiles De Expresión Génica En Células Swiss 3T3 Expuestas a Extractos Acuosos Del Humo Del Cigarrillo
Estudios previos realizados en diferentes laboratorios han demostrado que el humo del cigarrillo (CS) alberga un gran potencial de estrés oxidativo, que en general afecta a las células expuestas. Muchos de estos estudios se han dedicado a la identificación de genes expresados diferencialmente en las células expuestas. Nuevas técnicas de ADN microarrays de proporcionar una herramienta sofisticada para caracterizar la expresión de genes en una base más amplia. En este sentido, informen sobre los estudios cinéticos realizados para caracterizar los perfiles de expresión génica en células Swiss 3T3 expuestas a los extractos acuosos de CS ("humo burbujas de buffer fosfato salino") hasta 24 horas a través de los chips de vidrio que contienen 513 sondas de ADNc diferentes. Los resultados obtenidos muestran un patrón de expresión de los genes a distintas reguladas y reprimidos, que fue más evidente después de 4-8 horas de exposición. La respuesta al estrés relacionado con CS incluye principalmente a los genes que codifican para la respuesta antioxidante, por ejemplo, hemo oxigenasa-1 (HO-1), metalotioneína 1/2 (MT1 / 2) y proteínas de choque térmico (HSP), genes que codifican factores de transcripción, por ejemplo, JunB y CAAT / potenciador de la proteína de unión (C / EBP), genes de la célula relacionados con el ciclo, por ejemplo, GADD34 y GADD45, y en particular los genes, se describe como mediadores de la respuesta inflamatoria / inmune reglamentarios, por ejemplo, ST2, KC y id3. Desde una perspectiva cinética, la respuesta al estrés se caracteriza por la regulación sincronizada de las vías antioxidantes, por ejemplo, como se refleja por la expresión coordinada de HO-1 y la ferritina. Este patrón de expresión es, obviamente, orquestado por los factores de transcripción de respuesta a estrés, como lo demuestra la expresión temprana y fuerte de junB y C / EBP. Curiosamente, entre los 10 genes más arriba regulados son cinco que son conocidos para contrarrestar el estrés causado por peroxinitrito. En conjunto, estos resultados demuestran que el CS induce una firma distinta de la expresión diferencial de genes en las células expuestas.
Control Del Desarrollo Del Folículo Del Pelo Y Pelaje Ciclismo Por Interacciones Complejas Entre Folistatina Y Activina
Los miembros de la proteína factor de crecimiento transformante beta / morfogenética ósea (TGF-beta/BMP) de la familia están involucrados en el control del folículo del pelo (IC) y el ciclo de la morfogénesis. Las actividades de varios miembros de esta familia activinas y BMP-2, -4, -7 y -11) son controlados por los antagonistas como follistatina. Debido a que follistatina ratones deficientes muestran anormalidades en el desarrollo de vibrisas, hemos explorado el papel de follistatina y activina en el pelaje de desarrollo de la IC y el ciclismo. Mostramos aquí que durante el ARNm HF follistatina el desarrollo se expresó un lugar destacado por la matriz del pelo y los queratinocitos de la vaina externa de raíz, así como por las células epidérmicas interfoliculares, mientras que la activina ARNm bA se expresó principalmente en las células de la papila dérmica. En comparación con emparejados por edad controles de tipo salvaje, tanto en ratones knock-out folistatina y activina ratones transgénicos mostraron una betaa un retardo significativo de la morfogénesis de la IC. El tratamiento de tipo salvaje explantes de piel de embriones con proteínas follistatina estimulado el desarrollo de insuficiencia cardiaca. Este efecto fue inhibida por la adición de activina recombinante Una proteína. Activina betaa ratones transgénicos demostró el retraso de la entrada catágena, la baja regulación de BMP-2, y la regulación de la expresión de la proteína antagonista de la matriz de GLA. Estas observaciones sugieren que la interacción follistatina y la activina juega un papel importante tanto en el desarrollo de la IC y el ciclismo, posiblemente en parte por la regulación de la expresión de BMP-2 y su antagonista.
Expresión Diferencial De Genes En La Membrana Periprotésica: Lubricina Como Factor Patogénico Nueva Posible En El Aflojamiento De Prótesis
Aproximadamente el 10% de la cadera endoprótesis se afloja después de 10 años. Aflojamiento de prótesis es causada por dos mecanismos patogénicos diferentes: el aflojamiento aséptico (AL) y el aflojamiento séptico (SL). Este estudio evaluó las diferencias en la expresión génica en AL y el SL. Ocho hibridaciones se realizaron en PIQOR cDNA arrays. Objetos del estudio fueron periprotésicas muestras de tejido de la interfaz a partir de dos pacientes con SL y tres pacientes con AL. Piezas de tejidos directamente adyacentes al sitio de aislamiento de ARN se analizaron inmuno / histopatológicamente con el fin de superar el problema de la heterogeneidad del tejido. Treinta y tres genes que se encontraron constantemente expresados diferencialmente, entre los que se CD11b, CD18, CD68, osteopontina y la cadena pesada de la ferritina aumentada en AL y el colágeno tipo 1 alfa-1, 3alpha-1, la integrina alfa-1, y thrombospondin2 nidogen upregulated en SL . El hallazgo más sorprendente fue la regulación al alza fuerte (de 20 veces a 323 veces) del factor estimulante de megacariocitos (MSF) en todos los casos asépticos y uno de los dos casos sépticos, lo cual fue confirmado por el tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción . En este estudio, MSF está vinculada al aflojamiento prótesis por primera vez. La regulación al alza en AL sugiere un papel patogénico importante: el empalme de MSF producto lubricina es responsable de la lubricación de las articulaciones saludables, pero su capacidad de lubricación excelente puede perturbar la interacción estrecha entre el hueso y la prótesis y así contribuir al aflojamiento de la prótesis.
Una Matriz Extracelular Específica De Microarrays Permitió La Identificación De Genes Diana Aguas Abajo De Los Receptores Del Dominio Discoidina
Los dos receptores discoidina de dominio, DDR1 y DDR2, son tirosina quinasas que se activan por el colágeno y son reguladores esenciales de la comunicación célula-matriz. Sin embargo, los genes diana corriente abajo de DDR activados y su importancia fisiológica son en gran parte desconocido. A continuación, describimos un nuevo método para analizar las vías de señalización inducidas por la matriz extracelular (ECM) de los receptores. Usando el sistema de represión doxiciclina-inducible (tet-off), que generó el fibrosarcoma humano y del ratón sobre líneas celulares de fibroblastos que expresan DDR1 o DDR2. Estas líneas celulares se emplearon para el análisis de expresión génica mediante microarrays de genes específicos para humanos y de ratón que codifican para las proteínas ECM ECM o factores interactúan entre sí. Hemos encontrado que aproximadamente el 10% de los genes estudiados fueron arriba o hacia abajo-regulada en más del doble en respuesta a las señales generadas por sobre-expresión de DDR. A aguas abajo de eventos comunes de la DDR1 y DDR2 en las células humanas y de ratón fue la regulación de ligando glicoproteína P-selectina. Los genes diana reprimidos tras la activación de DDR fueron agrina, sindecano-1 y la integrina a3. ECM específicos de microarrays se han encontrado una valiosa herramienta para diseccionar los cambios de expresión génica inducidos por las vías de señalización del receptor de colágeno.
Perfiles De Expresión Génica En Los Tejidos Respiratorios De Ratas Expuestas Al Humo Del Cigarrillo Mainstream
El humo del cigarrillo (CS) es conocido por causar cáncer y otras enfermedades, pero poco se sabe acerca de los cambios globales moleculares y celulares que se producen antes de la aparición de los síntomas clínicamente detectables. El uso de microarrays de ADN que cubren 2031 sondas de ADNc, se investigó la expresión diferencial de genes en los tejidos del tracto respiratorio de las ratas, es decir, el epitelio respiratorio nasal (RNE) y los pulmones de las ratas expuestas ya sea aguda (3 h) o subchronically (3 h / día, 5 días semana, 3 semanas) a la corriente principal de CS con la muerte de forma inmediata o en 20 h después de la exposición. La expresión diferencial de genes fue más evidente en RNE de ratas expuestas una vez y se caracterizó por una fuerte regulación de los genes que codifican las enzimas oxidativas de respuesta al estrés y la Fase II que metabolizan fármacos, como la hemo oxigenasa-1 y NAD (P) H: quinona oxidorreductasa , que son todos, al menos en parte, regulado transcripcionalmente por NF-E2 relacionadas con el factor 2 (Nrf2). Después de 3 semanas de exposición, la fuerza de expresión de esta clase de genes se redujo notablemente, apuntando a una respuesta adaptativa. La respuesta generalmente menor en los pulmones de ratas expuestas es indicativa de un gradiente de deposición de los componentes del humo activos de la parte superior del tracto respiratorio inferior. En agudo contraste con la expresión inducida por CS de estrés oxidativo y los genes de fase II que responden, la inducción de los genes que codifican la Fase I metabolizadoras de drogas, enzimas del citocromo P450 (CYP) 1A1 y aldehído deshidrogenasa-3 no se redujo después de 3 semanas de exposición y fue igualmente alta en los pulmones y RNE. Patrones de expresión génica en ratas permitieron recuperar durante 20 horas mostraron que los cambios inducidos CS-transcripcional observó inmediatamente después de la exposición volvió casi por completo a la normalidad, incluso después de 3 semanas de la exposición repetida CS. En general, estos resultados demuestran que el CS induce un gen específico diferencial patrón de expresión in vivo, que puede ser decisivo en la identificación de los mecanismos moleculares que conducen a la aparición de cambios inflamatorios y / o morfológicas.
La Purificación De Los Precursores Neuronales Del Cerebro Del Ratón Adulto: Análisis Integral De La Expresión Génica Ofrece Nuevas Perspectivas En El Control De La Migración Celular, La Diferenciación Y La Homeostasis
La progenie de células madre neurales en la zona subventricular (SVZ) del cerebro adulto de mamíferos consiste en polysialylated NCAM-que expresan las neuronas inmaduras (PSA (+) las células), que migran al bulbo olfatorio (OB) que se diferencian en interneuronas GABAérgicas. Nos purifica murino PSA (+) las células directamente desde el cerebro adulto por FACS y se analiza su perfil de expresión génica por SAGE. Análisis comparativos condujo a la identificación de enriquecidos precursor-genes, incluyendo survivina, Medias 4-, Meis2, Dishevelled 2-, C3aR1 y 3110003A17 Riken, y muchas transcripciones hasta ahora no caracterizados. El análisis de conglomerados mostró que los grupos de genes implicados en la guía de axones y grupos de genes implicados en la quimiotaxis son fuertemente upregulated, lo que indica un papel de ambas señales en el control de la migración celular en el cerebro adulto. Además, los genes implicados en la apoptosis y proliferación celular son co-expresados, lo que sugiere que la cantidad de precursores que está presente en el cerebro adulto es un resultado de un equilibrio de estos procesos.
El HOPE-técnica Permite Northern Blot Y Análisis De Microarrays En Tejidos Embebidos En Parafina
Hay una demanda creciente de muestras de tejidos que, después de haber sido utilizado para el examen histológico convencional, también son apropiados para análisis moleculares. En cuanto al fijado en formol e incluido en parafina (FFPE) los tejidos, las últimas aplicaciones son muy limitadas. La ESPERANZA (Hepes-glutámico tampón de ácido mediada Efecto Orgánica de Protección disolvente) comprende una nueva técnica de protección-solución con un tampón orgánico, con acetona como el único agente deshidratante, y parafina pura de 52-54 grados C de temperatura de fusión, permitiendo todas patológica las investigaciones de rutina. En contraste con FFPE tejido, el HOPE-técnica permite la aplicación de métodos moleculares, tales como el ADN de alto peso molecular y el aislamiento de ARN, que pueden ser utilizados para la PCR y PCR con transcripción inversa (RT-PCR). En este estudio, se investigó si el ARN de muestras de tejidos fijados con HOPE-es adecuado para la transferencia de Northern y el análisis de microarrays. ARN de dos fijos HOPE-muestras de cáncer de mama de grado histológico se utilizaron diferentes para llevar a cabo un experimento matriz. Resultó que el ARN de los tejidos HOPE-fijo es de alta calidad y puede utilizarse con éxito para la serie de experimentos. Además, mediante la detección de GAPDH y grupo de alta movilidad de proteína B1 gen (HMGB1)-transcritos específicos, que fueron capaces de demostrar que el ARN de HOPE tejido fijado también puede ser utilizado para la hibridación de Northern blot.
Identificación De CD70 Como Marcador Biológico De Diagnóstico De Carcinoma Renal De Células Claras De Perfiles De Expresión Génica, En Tiempo Real RT-PCR E Inmunohistoquímica
Los mecanismos moleculares subyacentes de carcinoma de células renales (CCR), son poco conocidos y de los marcadores más fiables para el diagnóstico precoz son necesarios. Por lo tanto, las estrategias alternativas para el descubrimiento de biomarcadores con las tecnologías de validación apropiadas tienen que ser realizadas. Para dilucidar la génesis y progresión de la RCC se utilizaron chips de alta en paralelo basado en la comparación de perfiles de expresión génica tejidos normales y tumorales. Se comparó el control correspondiente y muestras de tejido tumoral de 10 pacientes con CCR de células claras. Se aisló el ARN de las secciones de tejido histológicamente bien diferenciados y realizó la transcripción inversa, el etiquetado y la amplificación lineal de RNA. Las muestras se hibridó en microarrays que contienen 642 cDNAs humanos. De los 352 genes expresados diferencialmente se encuentran, CD70 y FRA2 fueron seleccionados para una posterior evaluación en tiempo real RT-PCR. El análisis mostraron un alto potencial para discriminar entre normal y tejido tumoral. Además, el aumento de la expresión del ARNm CD70 en las células tumorales puede ser correlacionada con su expresión a nivel de proteínas. La inmunohistoquímica (IHC) mostraron una expresión muy fuerte de CD70 en todas las muestras tumorales, pero sin expresión en el tejido adyacente normal del riñón. Con nuestro método combinado hemos sido capaces de identificar CD70 como un nuevo marcador para el CCR, que puede ser útil en el futuro para el diagnóstico inmunohistoquímico mejorada.
Sexo Importantes Que Dependen De Diferencias En La Respuesta De Las Folículos Del Cuero Cabelludo a La Estimulación Estrogénica in Vitro Abogado De Género a Medida Gestión De Patrón De Calvicie Femenino Versus Masculino
En este estudio, se investigó cómo los estrógenos (17-beta-estradiol, E2) afectan a los receptores de estrógenos (ER) de expresión y regulación de los genes de hombre contra mujer folículos del cuero cabelludo humanos in vitro. Folículos en fase anágena VI de la piel del cuero cabelludo se microdissected frontotemporal y el órgano culta-de hasta 9 d en presencia de E2 (1-100 nm). Se realizó inmunohistoquímica para ERbeta expresión, sabe que es predominante en humanos folículos del cuero cabelludo, y los genes de expresión de TGF-beta-2 (como negativo modulador clave de crecimiento del cabello), y E2-respuesta en el órgano-cultivos de folículos humanos del cuero cabelludo (48 h , 10 nM) fueron exploradas por cDNA microarray, usando un chip de la piel enfoque comercial (Memorec, Colonia, Alemania). El patrón de distribución de ERbeta y TGF-beta2-inmunoreactividad difirió entre los folículos del pelo hombres y mujeres después de 48 h de cultivo. De 1300 genes probados, varios genes estaban regulados sexo dependiente de manera diferente. El estudio revela importantes diferencias por sexo que dependen de la respuesta de los folículos humanos frontotemporal del cuero cabelludo a E2. El reconocimiento y la disección sistemática de la regulación de los genes E2-dependiente será crucial para el desarrollo de estrategias más efectivas a medida, gestión de las cuestiones de género para el patrón de calvicie femenino en comparación con hombres.
RECOGIDOS: Toxicogenómica Aplicadas a La Toxicología in Vitro: Una Expresión De Genes De ADNc-Array Y Estudio Basado En Actividad De La Proteína En Cultivos De Hepatocitos Humanos Durante El Tratamiento Con Aroclor 1254
Este artículo ha sido retractado conformidad con los artículos de prensa en la política. Por favor, consulte. Editorial se disculpa por cualquier inconveniente que esto pueda causar.
La Conversión De La SVZ-glial Precursores Neuronales Derivados Cometidos Después Del Injerto Ectópico En El Cerebro Adulto
En el cerebro anterior ratón adulto, una gran cantidad de precursores neuronales, destinado a convertirse en las interneuronas GABA y dopamina-productora del bulbo olfatorio (OB), se generan en la zona subventricular (SVZ). Aunque este sistema neurogénica representa un reservorio potencial de las células madre y progenitoras de los enfoques de reparación del cerebro, la información sobre la supervivencia y la diferenciación de las células derivadas de SVZ en las regiones del cerebro ectópicos sigue siendo fragmentaria. Mostramos aquí que el injerto de tejido ectópico SVZ dio lugar a dos tipos de células morfológicamente distinguibles que muestran características oligodendrocíticos o de los astrocitos. Dado que el tejido contiene SVZ progenitores neuronales y gliales, se utilizó la clasificación de células magnética para agotar A2B5 + gliales progenitores de la SVZ disociadas y para seleccionar de manera positiva las células que expresan PSA-NCAM. Este procedimiento permite la purificación de los precursores neuronales que expresan Tuj1, DCX y GAD65/67. El trasplante de estas células llevó de nuevo a la generación de los mismos dos tipos de células gliales, mostrando que los precursores comprometidos interneuron someterse a la diferenciación glial fuera de su entorno normal.
Mejorar El Nivel De Expresión De IL-31 Se Correlacionan Con La IL-4 E IL-13 En La Dermatitis De Contacto Alérgica Y Atópica
IL-31 es producida por los linfocitos T activados, preferentemente por las células Th2. Ratones transgénicos que sobreexpresan IL-31 tienen un fenotipo semejante a la dermatitis alérgica en sujetos humanos.
Un MicroARN Mamíferos Atlas De Expresión Basado En Pequeños RNA Secuencia Biblioteca
Los microARN (miRNA) son pequeños ARN no codificantes reguladoras que reducen la estabilidad y / o traducción de total o parcialmente la meta mRNAs complementarios secuencia. Con el fin de identificar miRNAs y evaluar sus patrones de expresión, la secuencia de más de 250 pequeñas bibliotecas de ARN de 26 diferentes órganos y sistemas y tipos de células de humanos y roedores que fueron enriquecidos en neuronas, así como las células hematopoyéticas normales y malignas y tejidos. Se presentan los perfiles de expresión derivados de los datos de recuento de clones y proporcionar herramientas computacionales para su análisis. Inesperadamente, un conjunto relativamente pequeño de miRNAs, muchos de los cuales se expresa de forma ubicua, representan la mayor parte de las diferencias en los perfiles de miARN entre los linajes de células y tejidos. Este amplio estudio también proporciona información detallada y precisa acerca de las secuencias maduras, precursores, los lugares del genoma, los procesos de maduración, inferidos unidades transcripcionales, y los patrones de conservación. También proponemos un esquema de la subclasificación de miRNAs para ayudar a los futuros análisis funcionales experimentales y computacionales.
Perfiles De Expresión Genética De Las Sensible Humanos Subconjuntos De Células T Revela Paralelo Post-tímica Diferenciación De Células CD4 + Y CD8 + Linajes
La diferenciación de las células CD4 (+) o CD8 (+) las células T después de cebado de las células ingenuas es central en el establecimiento de la respuesta inmune contra patógenos o tumores. Sin embargo, nuestra comprensión de este complejo proceso y la importancia de los varios subconjuntos de diferenciación sigue siendo controvertido. Perfiles de expresión génica ha abierto nuevas líneas de investigación en inmunología. No obstante, la necesidad de cantidad sustancial de material biológico a menudo limita su campo de aplicación. En este estudio, hemos desarrollado procedimientos para llevar a cabo el análisis de microarrays de ADNc amplificado a partir de un bajo número de células, incluyendo los linfocitos T primarios, y se aplica esta tecnología para el estudio de la diferenciación de células CD4 y CD8 linaje. Perfiles de expresión génica se realizó en muestras de 1.000 células procedentes de 10 diferentes subgrupos de población, la definición de las grandes etapas de post-timo CD4 (+) o CD8 (+) la diferenciación de células T. Sorprendentemente, los datos revelaron que, si bien CD4 (+) y CD8 (+) de células T programas de expresión génica divergen en las primeras etapas de la diferenciación, se vuelven cada vez más similar a las células llegan a una etapa de diferenciación tarde. Esto sugiere que la heterogeneidad funcional entre CD4 Ag experimentados (+) y CD8 (+) las células T es más probable que se encuentra temprano durante el post-tímico diferenciación, y que las etapas finales de la diferenciación puede representar un extremo común en el desarrollo de los linfocitos T .
Análisis De Expresión Génica Define Diferencias Entre Cada Región En Las Neuronas GABAérgicas
Ácido gamma-aminobutírico (GABA), las neuronas érgicas son un grupo diverso de las neuronas inhibitorias a jugar un papel crucial en el procesamiento de información. Se analizó la expresión génica de las neuronas GABAérgicas definidos regionalmente a partir de la corteza cerebral, bulbo olfatorio, el cuerpo estriado y el cerebelo de la glutamato decarboxilasa 67-proteína de fluorescencia verde (GFP-GAD67) knock-en ratones. Se introduce un método de aplicación general para la singularización de las células cerebrales, el enriquecimiento de citometría de flujo, y amplificación de ARNm para el mundial de perfiles de expresión de los genes sensibles. Cuantificación sistemática provocó un alto rango dinámico del número de células GABAérgicas en diferentes regiones cerebrales. La agrupación de los resultados de expresión génica revelaron grandes diferencias entre las neuronas GABAérgicas del cerebro anterior y posteriores que indican que el desarrollo de las neuronas GABAérgicas depende de su ubicación regional. Mientras que las neuronas GABAérgicas del cerebro anterior se caracterizan por tres grandes grupos de factores de transcripción del Distal-less de la familia, la familia POU, y ETS / de la familia Fox, los miembros específicos de la ZIC-y LHX de la familia de factores de transcripción parecen definir hindbrain neuronas inhibidoras.
Perfil Transcripcional Identifica Una Respuesta Del Huésped Asociada a Interferón Inmune En El Carcinoma Invasor De Células Escamosas De La Piel
Carcinoma de células escamosas (SCC) y el carcinoma de células basales (BCC) representan los 2 tipos más comunes de cáncer de piel no melanoma. Ambos se derivan de los queratinocitos, pero muestran un comportamiento biológico diferente. A continuación les presentamos la transcripción de datos de perfiles de una gran cohorte de pacientes con tumores (CEC, n = 42; BCC, n = 114). Los genes expresados diferencialmente reflejar las características conocidas de SCC y BCC como el patrón de citoqueratinas típica, así como la regulación positiva de genes característicos de proliferación celular. Además, se encontró una mayor expresión de interferón (IFN) de los genes regulados (incluyendo IFI27, IFI30, MX1, IRF1 y CXCL9) en SCC, y en menor medida en el BCC. La expresión de IFN-genes regulados correlacionado con el grado de la lesional células inmunes infiltrarse. Exámenes inmunohistoquímico confirmó la expresión de genes regulados por IFN-en asociación con un CXCR3 + inflamatoria citotóxica infiltrado en el nivel de proteínas. Es de destacar que un pequeño subconjunto de las muestras de SCC con una baja expresión de IFN-genes regulados incluyen los receptores de trasplantes de órganos más que reciben medicación inmunosupresora. Colectivamente, nuestros resultados apoyan la idea de que el IFN-asociadas respuestas del huésped juegan un papel importante en la inmunovigilancia tumor en la piel.
Perfiles De Expresión Génica De Liquen Plano Refleja CXCL9 + Mediada Por La Inflamación Y La Diferencia Esta Enfermedad De La Dermatitis Atópica Y La Psoriasis
A continuación, presentamos los datos de un enfoque de perfiles de expresión génica para aplicar el valor diagnóstico y significación patológica de este método en diferentes enfermedades inflamatorias de la piel, utilizando biopsias de toda la piel. Inicialmente, el SAGE se realizó para identificar las etiquetas frecuentes expresados diferencialmente en diversas enfermedades de la piel. Sobre la base de estos resultados, una piel nueva patología orientada microarrays PIQOR fue diseñado. Liquen plano (LP) fue elegido como un modelo para evaluar la enfermedad de este sistema. Los controles incluyeron la piel sana, la dermatitis atópica (DA), y la psoriasis (PSO). Los análisis de expresión génica con el tema definido por microarrays seguido por la agrupación clasificada fue capaz de discriminar LP de AD y Pso. Los genes expresados de manera significativa en el LP de tipo I incluye los genes inducibles por IFN y un patrón de expresión de quimioquinas específico. El ligando CXCR3, CXCL9, fue el marcador más importante para el LP. La hibridación in situ e inmunohistoquímica confirmó los resultados y reveló que los queratinocitos son el tipo I productores de IFN en lesiones de la piel LP. Nuestros resultados muestran que los perfiles de expresión génica mediante un microarray específico para la piel es un método fiable para identificar a los pacientes con LP en el contexto elegido y reflexionar los modelos más recientes acerca de la patogénesis de esta enfermedad. Perfiles de expresión génica podría complementar el espectro diagnóstico en dermatología y puede proporcionar nuevos conocimientos patogénicos.
La Interrupción De La Latente Factor De Crecimiento Transformante-beta-1 Proteína Vinculante Gene Alteración Provoca En La Estructura Facial E Influye En La Biodisponibilidad De TGF-beta
Latentes de crecimiento transformante beta del factor de proteínas de unión son una familia de proteínas de matriz extracelular, constituido por cuatro isoformas (LTBP-1, -2, -3, -4) con diferentes estructuras, los patrones de expresión de tejido y la afinidad por el TGF-beta. Hasta ahora, los modelos respectivos knockout han puesto de manifiesto algunas funciones esenciales para LTBP-2, LTBP-3 y LTBP 4-, mientras que la importancia fisiológica de LTBP-1 es sólo superficialmente conocido. Aquí mostramos por primera vez, la generación y caracterización de un modelo de ratón que carecía tanto a largo como a corto LTBP-1 isoforma. Sorprendentemente, los ratones respectivos son viables y fértiles. Sin embargo, detallado análisis de rayos X del cráneo reveló un perfil modificado facial. Además, la interrupción del gen induce una actividad reducida biológica del TGF-beta, que se hizo evidente en un modelo experimental de fibrogénesis hepática en el que los animales knockout LTBP-1 eran menos propensos a la fibrogénesis hepática. Por otra parte, comparativa gen cDNA microarrays de perfiles de expresión de los cultivos de células estrelladas hepáticas confirmó que los nulos fueron, respectivamente, menos receptivo a la activación celular y la transdiferenciación en miofibroblastos. Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que LTBP-1 tiene funciones esenciales en el control de la activación del TGF-beta.
El Aislamiento De Las Mitocondrias, Puramente Funcional Microperlas Superparamagnéticos
El aislamiento de las mitocondrias por los métodos actuales se basa principalmente en sus propiedades fisicoquímicas. A continuación se describe un método alternativo para obtener funcional de las mitocondrias de las células humanas en un procedimiento rápido, reproducible y normalizado. El nuevo enfoque se basa en microesferas superparamagnéticas conjugadas con anticuerpos anti-TOM22. Los conjugados de talón etiquetar la parte citoplásmica de la proteína mitocondrial humano TOM22 membrana y, por tanto, permitir un aislamiento suave de las mitocondrias en un gradiente de campo magnético de alta. Al comparar el MACS (separación magnética de células) con el enfoque de los métodos de aislamiento mitocondrias por centrifugación diferencial y ultracentrifugación se demuestra que el enfoque de MACS ofrece el mayor rendimiento de las mitocondrias aisladas. La calidad, el enriquecimiento, y la pureza de las mitocondrias aisladas con este protocolo son comparables a las mitocondrias obtenidos utilizando el método de ultracentrifugación, y un procedimiento de separación típica tiene sólo aproximadamente 1 a 2 horas de homogeneización inicial de la célula. Las mitocondrias aisladas con el nuevo enfoque son suficientes para la importación de proteínas, electroforesis en gel de color azul nativo, y otros ensayos mitocondriales.
El Aislamiento Y Enriquecimiento De Las Células Madre
Las células madre tienen el potencial de revolucionar la regeneración de tejidos y la ingeniería. Ambos tipos generales de las células madre, aquellas con potencial de diferenciación pluripotentes, así como aquellos con potencial de diferenciación multipotentes, son de igual interés. Son herramientas importantes para una mayor comprensión de los procesos generales de celulares, para perfeccionar las aplicaciones industriales para el descubrimiento de fármacos y toxicología predictiva y para ganar más conocimientos sobre su potencial para la regeneración de tejidos. En este capítulo se ofrece una visión general de las tecnologías de clasificación y protocolos existentes, se describen las características fenotípicas de un número de células madre diferentes, y un resumen de sus posibles aplicaciones clínicas.
Cuantificación Absoluta De MicroARNs Mediante Una Referencia Universal
Los microARN (miRNA) son una especie de pequeños ARN de aproximadamente 21-23-nucleótidos de longitud que se ha demostrado jugar un papel importante en diversos procesos celulares, de desarrollo, y fisiológicas. En consecuencia, numerosos métodos de PCR, secuenciación, o basadas en la hibridación, se han establecido para identificar y cuantificar los miRNAs. Los resultados de longitud corta en un alto rango dinámico de temperaturas de fusión, lo que impide una adecuada selección de sondas de detección o cebadores de PCR optimizado. Mientras que los microarrays miARN permitir la medición relativa masiva en paralelo y precisa de todos los miRNAs conocidos, que hasta ahora han sido menos útil como un ensayo para la cuantificación absoluta. A continuación, presentamos un enfoque basado en microarrays para la cuantificación global y absoluta de miRNAs. El método se basa en la hibridación en paralelo de la muestra de interés marcado con Cy5 y una referencia universal de 954 miRNAs sintéticos en concentraciones equimolares que están etiquetados con Cy3 sobre un portaobjetos de microarray que contiene sondas para todos los humanos, de ratón, rata, y miRNAs virales (miRBase 12,0). Cada miARN solo se cuantifica con respecto a la cancelación de los prejuicios universales de referencia relacionados con la secuencia, el etiquetado, o la hibridación. Se demuestra la exactitud del método por varios picos-en los experimentos. Además, se cuantificó el número de copias miARN en muestras de hígado y CD34 (+) / CD133 (-) las células progenitoras hematopoyéticas.
NeuroD1 Induce La Diferenciación Neuronal De Terminales En La Neurogénesis Olfatoria
Después de su generación y las especificaciones en las regiones periventriculares, precursores neuronales mantener un estado inmaduro y migratorias hasta su llegada a las estructuras de destino respectivos. Sólo que aquí son la diferenciación terminal y la integración sináptica inducida. Aunque el control molecular de la especificación neuronal ha comenzado a ser dilucidado, se sabe poco sobre los factores que controlan los pasos más recientes de maduración. El objetivo fue identificar los factores que inducen la diferenciación terminal durante la neurogénesis postnatal y adulta, con lo que se centra en la generación de las interneuronas periglomerulares en el bulbo olfatorio. Se aislaron los precursores neuronales y neuronas maduras a partir del linaje neuronal periglomerular y se analiza su expresión génica mediante microarrays. Hemos encontrado que la expresión del factor de transcripción bHLH NeuroD1 sorprendentemente coincide con la diferenciación terminal. Utilizando la electroporación del cerebro, nos muestran que la sobreexpresión de NeuroD1 en la región periventricular en las derivaciones in vivo para la rápida aparición de células con características morfológicas y moleculares de las neuronas maduras en la zona subventricular y la corriente migratoria rostral. A la inversa, ARNhc inducida desmontables de NeuroD1 inhibe la diferenciación neuronal de terminales. Así, la expresión de un solo factor de transcripción es suficiente para inducir la diferenciación neuronal de células progenitoras neuronales en regiones que normalmente no muestran la adición de nuevas neuronas. Estos resultados sugieren un potencial considerable de NeuroD1 para su uso en células terapéuticas enfoques en el sistema nervioso.
El MicroARN MiR-182 Es Inducida Por IL-2 Y Promueve La Expansión Clonal De Linfocitos T Activados
Después de ser activado por el antígeno, los linfocitos T cooperadores cambiar de un estado de reposo a la expansión clonal. Este cambio requiere la inactivación de los FoxO1 factor de transcripción, un supresor de la proliferación se expresa en los linfocitos T en reposo. A principios de los antígeno dependiente de la fase de expansión, FoxO1 se inactiva por antígenos mediados por receptores modificaciones post-traduccionales. Aquí nos muestran que en la fase tardía de expansión, FoxO1 ya no era post-traduccionalmente regulada, pero se inhibió post-transcripcional por la interleucina 2 (IL-2)-inducida microARN MIR-182. La inhibición específica de MIR-182 en linfocitos T cooperadores limitado su expansión de la población in vitro e in vivo. Nuestros resultados demuestran un papel central para miR-182 en la regulación fisiológica de la IL-2-impulsados por T helper mediada por células respuesta inmune y abrir nuevas posibilidades terapéuticas.
Caracterización Combinado De MicroARN Y Los Perfiles De MRNA De Delinea Vías De Diferenciación Temprana De CD133 + CD34 + Madre Hematopoyéticas Y Células Progenitoras
MicroRNAs (miRNAs) se ha demostrado que juegan un papel importante en la hematopoyesis. Para dilucidar el papel de los miRNAs en las primeras etapas de la hematopoyesis, que comparó directamente por los donantes corresponde CD133 (+) las células más diferenciadas con el CD34 (+) CD133 (-) y CD34 (-) CD133 (-) las células de la médula ósea en el nivel de miRNA y del mRNA. Usando cuantitativa de microarrays toda miARN perfiles de secuenciación del genoma y la base, se encontró que entre los 109 (CD133 (+)) y 216 (CD34 (-) CD133 (-)) miRNAs se expresaron. La cuantificación reveló que los 25 miRNAs expresados más alto el 73% de la cartera total de miRNA. MIR-142-3P fue el más alto miARN expresado con un máximo de 2.000 copias por célula de CD34 (+) CD133 (-) las células. Dieciocho fueron significativamente miRNAs expresados diferencialmente entre CD133 (+) y CD34 (+) CD133 (-) de las células. Se analizó su función biológica mediante el examen de la co-expresión de miRNAs y sus metas previstos bioinformatically mRNA de luciferasa y basados en ensayos de reportero. Nos proporcionan la primera evidencia de una regulación directa de CD133 por el MIR-142-3p, así como la tropomiosina 1 y 5 homólogo rizado por el MIR-29a. La sobre-expresión de miRNAs en CD133 (+) células demostrado que el miR-142-3P tiene una influencia negativa en el total de la capacidad de formación de colonias. En conclusión, los miRNAs expresados diferencialmente entre el CD133 (+) y CD34 (+) CD133 (-) las células están involucradas en la inhibición de la diferenciación, la prevención de la apoptosis, y la remodelación del citoesqueleto. Estos resultados son de gran relevancia para madre terapias basadas en células con CD133 (+) las células y delinear por primera vez cómo el personaje de células madre de CD133 (+) las células se define por la expresión de miRNAs específicos.
Los MicroARNs Están Construyendo El Escenario Hematopoyéticas
La hematopoyesis es regulado por los microARN (miRNA). Estos ARN pequeños servicios de reglamentación son reguladores maestros de los procesos de desarrollo que modulan la expresión de varios genes diana transcriptionally post. Varios miRNAs están reguladas en etapas específicas durante el desarrollo hematopoyético y la relevancia funcional de miRNAs se ha demostrado en muchas etapas diferentes de la especificación de linaje. Golpe de gracia de miRNAs específicos pueden producir fenotipos dramáticos que conducen a graves defectos hematopoyéticos. Además, varios estudios demostraron que los miRNAs específicos se expresan diferencialmente en las células madre hematopoyéticas. Sin embargo, el panorama resultante es muy complejo debido a las diferencias entre las especies, la variación depende del tipo de células en la expresión de miRNA y la expresión diferencial de genes diana diversas que están involucrados en diversas redes de regulación. También hay pruebas de que los miRNAs juegan un papel en el envejecimiento celular o en la interferencia inter-celular entre las células hematopoyéticas y su microentorno. El campo está evolucionando rápidamente debido a las nuevas herramientas de perfilado y la tecnología de secuenciación profunda. Los perfiles de expresión de miRNAs son de relevancia para la clasificación de diagnóstico de diferentes enfermedades. Los recientes informes sobre la generación de células madre pluripotentes inducidas con miRNAs han alimentado la esperanza de que los miRNAs específicos y condiciones de cultivo facilitan la expansión de la diferenciación dirigida o la cultura de la piscina de células madre hematopoyéticas. Esta revisión resume el conocimiento actual acerca de la expresión de miARN en células madre hematopoyéticas y las células progenitoras, y su papel en el nicho de células madre hematopoyéticas.
