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Articles by Anke Scholz in JoVE
JoVE General
공촛점 이미징에 대한 분리 및 성인 심장 Myocytes의 유전자 조작
Institute for Molecular Cell Biology, Universty of Saarland
성인 심장 myocytes 동물 마음으로부터 격리하고 며칠 동안 교양 수있는 기본 세포입니다. 이 문화가 기간 내에 adenoviral 유전자 전송은 유전자 인코딩 biosensors (GEBs) 또는 형광 융합 단백질을 표현하는 데 사용할 수 있습니다. 두 접근 방법 공촛점 현미경에 의해 세포 조사를 허용합니다.
Other articles by Anke Scholz on PubMed
떠들고 170에서 자당 Synthase의 인 산화: 베이스의 신호 발생 및 가능한 역할
시퀀스 분석 식별 떠들고 170 (S170) 옥수수 (Zea 메이 스 L.)의 SUS1 자당 synthase (SUS) 단백질을 가능한 두 번째 인 산화 사이트. 옥수수 잎 두 칼슘 의존형 단백질 키 니 아 제 활동 하 고 있는 자당의 특성을 가진 칼슘 독립적인 키 니 아 제 활동에 포함 된 비 발효 1 (SNF1)-관련 단백질 키 니 아 제. 소설 S170 고 이러한 단백질 kinases에 의해 알려진된 떠들고 15 (S15) 사이트의 인 산화 펩타이드 기판에서 결정 되었고 시퀀스 및 인 산화 특정 항 체를 이용 하는 SUS1 단백질 기판에서 발견. 인 산화의 생체 외 및 생체 조건 S170 보여 줍니다. 칼슘 의존형 단백질 kinases phosphorylated s170와 S15, 반면 SNF1 관련 단백질 키 니 아 제 활동 s 15로 제한 했다. 칼슘 의존형 단백질 키 니 아 제 중재 s170와 S15 인 산화 속도 야생 형 및 돌연변이 SUS1 기판에서 결정 했다. 이들이 분석 S170 S15, 보다 낮은 삼 배는 그리고 s170의 그 인 산화 S15 사이트에서 사전 인 산화에 의해 자극 되었다 하 니 특이성을 공개 했다. 특히 초기 nodulin 40 (ENOD40)으로 인코딩된 SUS 바인딩 펩 티 드 반감 S170 인 산화는 생체 외에서. 어떤 점에서 S170 인 산화 기능 SUS 프로테아좀 중재 저하에 대 한 대상 지정 메커니즘의 일부 관측에 의해 지원 모델 SUS 단백질 조각을 그: (i) 했다 감지 및 보유 상대적으로 높은 phosphorylated-S170 (pS170) stoichiometry; (ii)은 공간적 일치 프로테아좀 활동 개발 잎; 그리고 (iii) 공동 sedimented의 프로테아좀 활동. 또한, 전체 길이 pS170-SUS 단백질 S170-SUS에 리프 세그먼트 교양 프로테아좀 억제 하 여 안정는 보다 덜 안정 이었다. PS170 프로 모션 베이스를 통해 SUS 단백질 수준의 닢 제어 옥수수 잎을 개발 싱크 소스 변환에 포함 된 SUS 풍부의 구체적이 고 중요 한 감소를 설명할 수 있습니다.
장기적인 문화 중 성인 쥐 심 실 Myocytes에서 Ca2 + 처리 Organelles의 개장
그것은 잘 알려져 있는 cardiomyocytes에 대 한 분리 및 배양 유도 크게 알려지지 않은 개장 프로세스입니다. 우리 confocal 현미경 및 형광 재배포 photobleaching 타겟 형광 단백질과 작은 분자 염료의 변환 adenoviral 중재 채용 후 같은 광학 기술로 셀 구획의 구조 분석. 특징적인 개장 프로세스 식별: T 관 멤브레인 시스템 "순차 곤란 떨어져", 라고 하는 프로세스에 의해 점차적으로 잃 었 바깥쪽 방향으로. 미토 콘 드리 아 3 아주 작은 클래스 (0.9 microm 길이), 보통 긴 (1.8 microm) 또는 확장된 모양 (3.6 microm) organelles 중 하나에 빠졌다. 배양을 통해 미토 콘 드리 아를 점차적으로 시간 융합. 개별 미토 콘 드리 아의 표백 sub-resolution 트는 튜브를 통해 "터널링" 하 여 분명히 구분 된 미토 콘 드리 아 사이 협회를 밝혔다. 이 터널링 과정 자란 시간에 따라 증가 하 고 있었다. Endoplasmic sarcoplasmic 그물에 십자가-줄무늬 배열의 점진적 상실 visualised 했다. Ca(2+)의 대규모 인구의 분석 비디오 속도 confocal 2D 검사 계시 나 마 작은 상당한 변화에 의해 SR-Ca(2+) Ca(2+) 농도 휴식 하는 대신 콘텐츠 변경 관련이 있을 수 있는 성인 cardiomyocytes에 이러한 초등 SR-Ca(2+) 출시 이벤트의 불꽃. 끝으로, 성인 마음에서 기본 격리 cardiomyocytes는 잘 정의 된, 하지만 재현 subcellular 개장 최적화 된 장기 문화 중 받 다.
광학 활동 전위 대체 QT 화면으로 성인 심 실 Myocytes에서 심사
QT 간격 스크린은 모든 새로운 약품에 심장 안전에 대 한 점점 더 중요 합니다. 지금까지 조사 동물 실험 또는 세포 기반 화면 hERG-채널, 높은 수준의 자동화를 허용 하는 셀 라인에 표현 전적으로 heterologously에 전도도 변경에 대 한 프로 빙에 의존. 성인 cardiomyocytes 자동된 패치 클램프 설치 프로그램에 의해 처리 되지 않을 수 있습니다. 따라서 심 실 myocytes 기본 절연된의 광학 심사 대 안으로 간주 됩니다. 비율 환산 측정에 대 한 여러 광 전압 센서를 보고 하지만 그들은 모두 naï ve 활동 전위의 영향을. 현재의 연구의 목표는 녹음 조건 탐구 및 광학 QT 간격 스크린을 허용 하는 설정을 정의 했다.
성인 심 실 Myocytes 문화 하위 Micromolar Cytochalasin D의 기능적 및 형태학 보존 보완
심장 myocytes에서 cytochalasin D (CytoD) 말라 방해와 기계적 uncoupler 역할을 것으로 알려졌다. 공초점 레이저를 사용 하 고 슈퍼 고해상도 STED 현미경 검사 법, 우리 CytoD 문화에 심 실 myocytes 성인 쥐의 말라 필 라 멘 트 구조 유지 됨을 보여줍니다. 5 백 nanomolar Cytod는 3 일의 문화 기간 및 액션 잠재력, 칼슘 과도 같은 주요 기능 특성의 보존 및 중요 한 것은, 단일 myocytes의 수축 성의 속성 중 T 관 구조의 두 보존을 달성 하기 위해 최적 농도. 따라서, 우리는 Cytod의 성인 심장 myocytes 문화 뿐만 아니라 형태와 갓 격리 된 세포의 기능을 유지 하는 단단한 단일 셀 모델을 생성 하 사용할 수 있습니다 실제로 결론 지었다. 또한, cytoskeletal 및 T 관 리 모델링 사이 상 링크를 공개합니다. 중요 한 dyssynchronous Ca(2+) 이용한 Ca(2+) 출시 (CICR), 0.5 μ M 앞에 T tubules 손실을 관찰 Cytod의 부재, CytoD, T tubules 그리고 균질 CICR majorly 보존 했다. 이러한 데이터 T tubules 그리고 동기, 안정적인 전원 공급-수축-커플링 말라 cytoskeleton 사이 가능한 연결을 제안 했다. 따라서, T 관 다시 조직 세포 배양에 많은 심장 질환 중에 발견 된 유사한 프로세스에 몇 가지 추가 빛이 나 고 pathophysiological 같은 조건 하에서 밝혀 subcellular Ca(2+) 신호 변화 cytoskeletal 변경 연결할 수도 있습니다.
