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Articles by Brenda L.K. Coles in JoVE
JoVE General
마우스 아이의 망막 줄기 세포의 분리
Molecular Genetics, University of Toronto
이 비디오에서는, 우리는 마우스 눈 ciliary 상피에서 망막 줄기 세포를 분리하고 clonal 망막 분야를 형성하는 문화에서 그들을 성장하는 방법을 보여줍니다 것입니다. 절연되는 분야는 줄기 세포의 추기경 속성을 가지고 : 자기 갱신과 multipotentiality.
Other articles by Brenda L.K. Coles on PubMed
손쉬운 격리와 인간의 망막 줄기 세포의 특성 분석
이 연구를 식별 하 고 초기에 망막 줄기 세포 (RSCs) 특징 생 후 7-10 년 동안 인간의 눈에. 인간의 눈의 서로 다른 구역은 연결 되었고 클론 구 형성 분석 결과 사용 하 여 양식. 줄기 세포만 갈 거 예요 plicata 갈 거 예요 플 래 나 약 1: 500의 주파수에서 망막 속눈썹 여백에서 파생 되었다. 장기 자기 갱신에 대 한 테스트 영역 분석 결과 단층 passaging 사용 되었다. Passaging 분석 결과 단일 영역을 사용 하 여 기본 영역 연결 되었고 replated, 그리고 개인 단일 분야 각 후속 통로에 하나 이상의 새로운 분야를 야 기한으로 검증 된 100% 자기 갱신, 등. 클론 망막 분야 시험의 그들의 자손의 분화 가능성을 분화 조건에서 도금 했다. 분야 생산 되었다 다른 망막의 모든 종류, multipotentiality를 보여주는 셀. 따라서, 인간의 눈 망막 줄기 세포 특성 (증식, 자기 갱신 및 multipotentiality)을가지고 (약 눈 당 10, 000 셀 크거나) 세포의 작은 인구를 포함 합니다. 줄기 세포 및 그들의 자손의 in vivo 잠재력을 테스트 하려면 우리 줄기 세포 및 progenitors 산 후 하루에 1 개를 끄 덕/SCID 쥐의 눈과 배아 병아리 눈에 들어 있는 천연된 인간의 망막 영역 셀 이식. 자손은 Rscs의 생존, 마이그레이션, 통합, 및 대뇌로 특히 신경 망막에 차별화 수 있었다. 그들의 손쉬운 격리, 통합과 분화 인간의 RSCs 결국 것은 인간의 망막 질환 치료에 귀중 한 하는 것이 좋습니다.
망막 조상 세포의 손실 Vivo에서 망막 줄기 세포 인구에 있는 증가로 이끌어 낸다
인생을 통해, 포유류 눈에 있는 망막 줄기 세포 망막 신경 progenitors 또는 망막 색소 상피 (RPE) progenitors를 생산할 가능성이]로 존재 하 고 실제로 줄기 인구에서 가장 큰 절대 증가 postnatally 발생 합니다. 줄기 세포 증식 embryonically 및 따라서 처음에, 망막을 구축 도움이 될 수 있지만 출생 후 포유 동물에 그들은 명확 하 게 할 하지 확산 부상에 대 한 응답에서 망막을 다시 생성 하. Chx10(orJ/orJ) 및 Mitf(mi/mi) 마우스를 사용 하 여, 망막 신경 뿌리의 감소로 인해 작은 눈 phenotypes과 인구와는 망막 색소 상피 조상 인구 각각, 우리는 이제 속눈썹 여백에서 분석 망막 줄기 세포 인구 증가 3-8-배 두 돌연변이에 보고. 이 발견은 포유류 망막 줄기 세포 인구 조상 인구에서 유전자 유도 신호에 응답할 수 있을 수 있습니다 것이 좋습니다.
확산 및 망막 줄기 세포의 확장 기능 Pax6 필요합니다
망막 줄기 세포 (RSCs) 성인 포유류 눈에 있는 희귀 안료 속눈썹 상피 세포로 존재. RSCs 망막 세포 계보의 상단에는 가설을 세웠다. 유전자 개 neuroectoderm에서 망막 필드를 설정 하는 배아 발달 초기에 표현 된 RSCs. Pax6, 쌍을 이루는 도메인 및 homeodomain를 포함 하는 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다 따라서, 전사 인자, 아이 필드 단위로 초기 유전자 중 하나 이며 망막 눈의 개발을 위한 마스터 컨트롤 유전자로 간주 됩니다. 여기에, 우리는 Pax6 RSCs. 비활성화의 pax6에서 비보는 손실 실패 클론 RSC 분야 기존의 Pax6 녹아웃 배아의 광학 vesicles와 성인 Pax6 조건부 녹아웃 생쥐의 속눈썹 상피 세포를 형성 하 여 assayed으로 유능한 Rscs에 풍부 하 게 보여 줍니다. Pax6 확산 및 Rscs의 확장에 필요한 제안 심각한 확산 결함에 성인 RSCs 결과에 pax6의 생체 외에서 클론 비활성화.
신경 망막에서 속눈썹 여백 Transdifferentiation 제어 정식 Wnt 신호에 의해
속눈썹 본문 (CB)와 홍 채 상피 층은 아이피, 속눈썹 여백 (CM)의 앞쪽에 영역에서 차별화-신경 구조. 우리가 보여 여기 정식 Wnt 활성화 하는 통로 충분 하 고 앞쪽에 눈 구조의 정상적인 발전을 위해 필요한 신호. 베타-catenin 신호 리튬과의 약리 활성화 (망막 explants 체 외에서 Li(+)) 치료 유도 CM 마커 Otx1 및 Msx1. vivo에서 주변 망막에 있는 베타-catenin 식의 안정화 Cre 중재의 신경 망막 (NR) 마커 비용 CM 마커 셀 자치 upregulation 유도 및 저해 성체의 소성 식. 주변 눈 운명 셀 자치 변환할 일치, 안정된 베타-catenin 표현 된 망막 영역에 확산 인덱스는 야생 형 CM와 동일 하 고 후기에서 CB와 같은 구조의 확장 했다. 반대로, 베타-catenin의 비활성화 Cre 중재 CM 마커 식으로 CM 및 CB/홍 채의 크기 감소. 두 마우스 모델에서 탈 선 CB 개발 또한 시험관에서 망막 줄기 세포 수의 감소와 관련이 있었다. 요약, 정식 Wnt 신호 활성화 주변 아이피 운명 NR의 비용으로 발전을 촉진 하기에 충분 하 고 앞쪽에 아이피 구조체의 정상적인 발전을 위해 필요.
인간의 망막 줄기 세포에서 기능 포토 리셉터 차별화를 극대화
망막 줄기 세포 (RSCs) 성인 인간의 눈의 속눈썹 여백에 존재 하 고 모든 망막 세포 유형을 야기할 수 있습니다. 여기 우리 인간의 Rscs에 망막 전사 인자 유전자 발현의 변조 크게 포토 리셉터 자손을 풍요롭게 하 고 강한 농축 chx10의 변조와 otx2와 CRX 결합된 변환으로 얻은 보여줍니다. 이러한 유전자 변형된 인간 RSC 자손은 마우스 눈에 이식, 망막 통합과 분화의 수정 되지 않은 RSC 자손에 게 우수한입니다. 또한, electrophysiologic 및 행동 테스트 이러한 이식된 세포 돌연변이 생쥐를 transducin에 기능 회복을 촉진 하는 보여 줍니다. 이 연구는 인간의 Rscs에 유전자 변조 포토 리셉터 질병 치료를 위한 포토 리셉터 세포의 소스를 제공할 수 있습니다 제안 합니다.
