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Articles by Brian J. Hawkins in JoVE
JoVE General
血管のCaの可視化 2 +パラクリン派生ROSをきっかけにシグナリング
1Department of Biochemistry, Temple University, 2Department of Anesthesiology and Pain Medicine, University of Washington
内皮のCa2 +シグナリングのパラクリン由来ROSの誘導を可視化についての洞察を得るために効率的な方法が記載されている。このメソッドは、共培養モデルにおける血管内皮細胞におけるCa 2 +の動員を引き起こしたパラクリン由来ROSを測定を利用しています。
JoVE General
単離ミトコンドリアマウス心臓における透水性遷移孔の開口部のマルチパラメータ測定
単離ミトコンドリアマウス心臓におけるミトコンドリア透過性遷移孔の開口部を測定するための分光蛍光プロトコルがここに提示されます。アッセイは、ミトコンドリアCaの同時測定を含む
Other articles by Brian J. Hawkins on PubMed
次の 6 週間運動トレーニングが上記と未熟な男性の乳酸閾値下肺酸素消費が遅いコンポーネントの適応。
6 週間乳酸閾値 (LT) の上下運動トレーニングが上記が遅いコンポーネント (SC) の肺の酸素消費量に与える影響を検討する （。VO(2))。
InsP3受容体を介したミトコンドリア機能障害と血管内皮アポトーシスにおける活性酸素の選択的役割
活性酸素種（ROS）は、虚血/再灌流（I / R）損傷と関連する炎症時の細胞の生存および細胞死の両方で発散役割を果たしています。本研究では、活性化マクロファージによるROS生成は、細胞内Ca2を誘発+（[Ca2 +の] i）のスーパーオキシドジスムターゼとアニオンチャネルブロッカーの組み合わせによりアブレーションされた内皮細胞の一過性。 [カルシウム+] iのストア枯渇ではなく、細胞外Ca2 +のキレート化は、O2 *に応じて、[カルシウム+] iの上昇を防止する - 1,4,5 - 三リン酸（InsP3）に依存しており、3 InsP3受容体（InsP3R）を欠く細胞イノシトールだったアイソフォームは、[Ca2 +の] iの一過性を表示するために失敗しました。重要なのは、O2 * - トリガーのCa2 +動員は、他の酸化剤とは無関係であったとミトコンドリアROS由来のミトコンドリア膜電位の損失を先行していた。アポトーシスの活性化はO2 *に応じて選択的に発生した - と[Ca2 +の] iがバッファリングすることによって防止することができます。 InsP3Rリンクされたアポトーシスカスケードを促進し、I / R傷害や炎症に重要な機能を果たすことができる - この研究では、O2 *があるという証拠を提供しています。
ユニークな心肺運動テスト応答中年太りすぎの大人閉塞性睡眠時無呼吸症候群では。
閉塞性睡眠時無呼吸 （OSA） は、覚醒、交感神経の活性化、炭酸ガス、低酸素血症を誘発する投稿の繰り返しの夜間障害上気道の特徴です。この疾患は心血管自律神経失調症を誘発して高血圧症の発展に貢献します。診断と予後の運動負荷試験のユーティリティは、循環器、運動の臨床的有用性に定評ですでテスト中 OSA のためのスクリーニングは慎重に調査されていません。この潜在的なアプリケーションを探索するには、最近 OSA と同様の物理のどうやら健康なカウンター パートと診断された患者でテストを行使する心肺反応と対照的不活動履歴や年齢、体型の。
クロライドチャネル3を仲介細胞内シグナリングで内皮細胞の活性酸素フラックス
活性酸素種（ROS）は細胞シグナル伝達および病理学の両方に関与している。原形質膜の外側ではなく、細胞内シグナル伝達につながることができます - 内皮細胞におけるROSの主な原因は、（）O（2）（a）、スーパーオキシドを生成するNADPHオキシダーゼである。 （ - ）O（2）の可能な貫通フラックスを調べるために、肺微小血管内皮細胞は、O（2）がプリロードされました（ - 。）敏感なフルオロフォアhydroethidine（HE）。 （ - ）O（2）の細胞外ボーラスのアプリケーションでは、核のHEは、蛍光のプログレッシブと非可逆的に増加が続いた迅速かつ濃度依存HE一時的な酸化をもたらした。これらの蛍光変化は、スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）、アニオンチャネルブロッカーDIDS、およびsiRNAで処理することにより、クロライドチャネル3（CLC-3）の選択的サイレンシングによって抑制された。外O（2）（ - ）ミトコンドリアO（2）が続いたミトコンドリアの膜電位の変化を引き起こした順番にトリガーのCa（2 +）放出（ - ）の生産と細胞のアポトーシス。 （ - ）O（2）これらの "シグナリング"効果はタプシガルギンと、細胞内Caのキレート化（2 +）による細胞内Ca（2 +）店の枯渇により、DIDS処理によって阻止されました。 （ - ）内皮細胞の形質膜を横切るフラックスCLC-3チャネルを介して行われ、（2 +）ミトコンドリアのO（2）を活性化放出、細胞内Caを誘導する（ - ）の生成本研究では、O（2）があることを示している。
BaxおよびBakは、小胞体のCa（2 +）恒常性の制御を介してT細胞の増殖を制御するアポトーシス促進因子
Bcl-2の関連X蛋白質（バックス）とBcl-2-antagonist/killer（バク）は、リンパ球アポトーシスの重要な調節因子であるが、それらは実行可能なT細胞機能に重要な役割を果たすかどうかは不明である。ここでは、BaxおよびBakの両方を欠いているT細胞が原因の欠陥をシグナリングのCa（2 +）の抗原特異的増殖の欠陥を表示することを報告している。ためにとイノシトール-1,4,5 - 三リン酸（IP 3）依存性のCa（2 +）の動員 - バックス（ - / - ）、朴（ - / - ）T細胞に欠陥がT細胞受容体（TCR）を表示小胞体（ER）のCa（2 +）バックスの再導入によって逆転された規則を変更しました。 ATP合成に利用その過剰にミトコンドリアNADH産生を刺激するTCR依存性Ca（2 +）シグナルの能力は、Bax及びBakに依存していた。 （2 +）Caから鈍化BaxおよびBakの非存在下で誘導されるミトコンドリアのNADHの標高は、T細胞の増殖に必要であった減少した反応性酸素種産生になりました。一緒に、データはBaxおよびBakの変調ERのCa（2 +）放出によるT細胞増殖の制御において重要な役割を果たしていることを確立します。
+リンクされたミトコンドリア活性酸素種が内皮/白血球付着に必須であるGタンパク質共役型受容体カルシウム
受容体を介するシグナル伝達は、一般に活性酸素種の産生を含む複数の機能に関連付けられています。しかし、ミトコンドリア由来のスーパーオキシドかどうか（mROS）物議を醸している生理的なシグナル伝達に直接貢献しています。ここでは、生理的なCa（2 +）の誘発mROSの生産は内皮細胞（EC）の活性化と白血球強固な接着に重要な役割を果たしている未知のメカニズムを示しています。 Gタンパク質共役型受容体（GPCR）とチロシンキナーゼを介したイノシトール1,4,5 - 三リン酸依存性のミトコンドリアのCa（2 +）の取り込みは、NADPHオキシダーゼ依存しないmROSの生産をもたらした。しかし、GPCRにリンクされたmROS生産はミトコンドリア機能やトリガの細胞死を変更することはなく、NF-κBの活性化と細胞間接着分子1のECの誘導を介して白血球の接着に寄与していませんでした。 GPCR - しかし、サイトカイン誘導しないアクティベーション後にマンガンスーパーオキシドジスムターゼの過剰発現と細胞permeativeスーパーオキシドジスムターゼ模倣アブレーションNF-κBの転写活性とシミュレートされた循環下の内皮細胞から容易に白血球分離によってmROSの不均化。これらの結果はmROSは、炎症性シグナリングおよび白血球/ EC強固な接着に受容体を介したCa（2 +）の信号を変換する下流のエフェクター分子であることを示している。
フローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡による生細胞のアポトーシスとミトコンドリアの活性酸素産生能の同時検出
アネキシンVとSYTOXグリーンは広く、フローサイトメトリーや蛍光顕微鏡を用いて様々な種類の細胞にアポトーシスを評価するためにマーカーを使用しています。最近、小説fluoroprobe MitoSOXレッドは生細胞のミトコンドリアの活性酸素を選択的に検出するために導入され、共焦点顕微鏡とフローサイトメトリーのために検証されました。このプロトコルはフローサイトメトリーおよび内皮細胞株における共焦点顕微鏡の両方によるアポトーシスマーカー（アネキシンVとSYTOXグリーン）とミトコンドリアのスーパーオキシド生成の同時測定について説明します。他のセル·ベースの手法に比べて説明したフローサイトメトリー法の利点は、最大の保全と、驚異的なスピード（1-2時間）、絶妙な精度とミトコンドリアのスーパーオキシドの生成とアポトーシス（およびその他）のマーカーの同時定量的測定の可能性あり細胞機能。蛍光顕微鏡と組み合わせて、このメソッドは、事実上すべての細胞型におけるプログラム細胞死のミトコンドリアスーパーオキシドの生産と実行に重要な空間的·時間的変化を明らかにするために非常に有用である可能性があります。
酵素治療のための半透性高分子ナノキャリアの内皮ターゲティング
タンパク質、例えば、治療酵素の医療ユーティリティが大幅に彼らの不安定な性質と不十分な配信によって制限されます。ほとんどの治療酵素は、その標的に蓄積されていないとプロテアーゼによって不活化される。基質透過性の高分子ナノキャリア（PNC）にカプセル化酵素の標的プロテアーゼの不浸透性は、これらの限界を克服するかもしれません。この仮説を検証するために、我々は設計された内皮このアプローチは、血管の酸化ストレスに対する虚血再灌流や他の疾患状態に関与する病理学的過程を保護する場合、PNCは、カタラーゼ、H（2）O（2） - 解毒酵素でロードされ、テスト対象とし。約300nmの直径PNCにカタラーゼのカプセル（MW 247 kD）の、ペルオキシダーゼ（MW 42 kD）のキサンチンオキシダーゼ（XO、MW 300 KD）をポリエチレングリコールとpoly-lactic/poly-glycolic酸の共重合体（PEGから成る-PLGA）範囲内のすべての酵素の約10％であった。 PNC /カタラーゼとPNC /ペルオキシダーゼは、外部のタンパク質分解から保護し、それらのPNC拡散性基板上に酵素活性を発揮し、Hした（2）O（2）とオルトフェニレンジアミンは、カプセル化されたXOの活動に対しによる基板へのポリマーの透過性にごくわずかであった。 PNCは、血小板内皮細胞（EC）接着分子-1届けアクティブECSにカタラーゼカプセル化され、細胞培養や動物実験における酸化ストレスに対する内皮を保護されています。を対象としたPNC-ロードされた解毒酵素の標的血管の酸化ストレスや他の毒性の管理を含む幅広い医療への応用を見つけることができます。
カベオラは、せん断応力の急激な減少と関連して内皮細胞シグナリングのための経路の必須コンポーネントです。
フローに適応した肺微小血管内皮細胞にせん断応力の急性損失（シミュレートされた虚血）（PMVEC）を表すフローの突然の停止は、反応性酸素種につながる（ROS）の生成、そのECの増殖のための信号。我々は、フローの停止（ "虚血"）に続いて5 DYN / CM（2）で層流に72時間コンディショニングされたマウスPMVECこの細胞応答にカベオリン-1の役割を評価した。前処理は、K（ATP）（K（IR）6.2）チャネルの細胞発現の2.7倍に増加しますが、カベオリン-1、gp91（phoxの）、またはMAPキナーゼの発現レベルの変化なしとなりました。野生型細胞の虚血への初期応答は、K（IR）6.2の標的遺伝子によって廃止された細胞膜の脱分極であった。その後の応答は、NADPHオキシダーゼ（NOX2）し、MAPキナーゼのリン酸化（ERK、JNK）の活性化に関連付けられたROS産生を増加させた。野生型細胞の虚血24時間後、細胞増殖指数は2.5倍増加し、S + G（2）/ M期の細胞の％が6倍に増加した。このシグナル伝達カスケード（細胞膜の脱分極、ROS生産、MAPキナーゼの活性化と細胞増殖）がカベオリン-1ヌルPMVECやfilipinと野生型細胞の処理によって抑制された。これらの研究は、ROS介在細胞シグナル伝達および流れの急激な減少に続く内皮細胞増殖の結果、フローに適応したECのせん断センサとしてのカベオリン-1機能していることを示しています。
吸入麻酔薬は様々な効力を持つ細胞内カルシウムの恒常性の崩壊による細胞損傷を誘発
著者らは、吸入麻酔薬はイソフルランはセボフルランまたはデスフルラン以上の効力を持つとイノシトール1,4,5 - 三リン酸（IP3）受容体の過剰な活性化を介して小胞体から異常なカルシウム放出を引き起こすことにより細胞の損傷を誘発するという仮説を立てた。
アポトーシスのBcl-2関連タンパク質の入札およびBakによるスーパーオキシド誘発性細胞死の実行
エタノール中毒では、炎症性サイトカインの産生を刺激する活性酸素種の形成を増加させ、ミトコンドリアの機能障害を誘発する。ただし、情報はエタノールによって誘発される肝毒性に関与して正確なシーケンスおよびコンポーネントとして制限されています。生産を損なうミトコンドリアのCa（2 +）処理 - 急性エタノール曝露はミトコンドリアスーパーオキシド（）をO（2）（*）が強化されます。ターンでは、O（2）（* - ）シトクロムcの放出とH（2）O（2）と二価の陽イオンに依存しないとBax依存しない方法でバクを必要とするミトコンドリアの膜電位損失を容易にします。さらに、朴のアポトーシス促進活動の引き金となるのは入札の細胞質が存在すると、イニシエータカスパーゼ-2で処理されBH3のみのタンパク質を必要とします。ドリブンの選択Bcl-2ファミリータンパク質の入札およびBakを含む、カスパーゼ開始アポトーシス経路 - 一緒に、これらの研究は、O（2）（*）を識別する。この経路は、O（2）の重要なメディエーターとしての高齢動物における慢性エタノールの消費量の間に現れるとカスパーゼ-2を識別し、入札、およびBak（* - ）治療薬の開発のための効果的なターゲットは、アルコール性肝を治療するために証明されるかもしれない誘導性アポトーシスを病気。
心臓と肺静脈のメラニン細胞様細胞は心房性不整脈のトリガーに貢献
心房細動は、最も一般的な臨床不整脈です。それはしばしば肺静脈と心房から発生する異所性拍によって開始されたが、これらのビートのソースとメカニズムは不明のままです。メラニン合成酵素ドパクロムのtautomerase（DCT）は、細胞内カルシウムとメラノサイトの反応種の調節に関与している。細胞内のカルシウムと反応種の調節不全は心房細動患者に記載されていることを考えると、我々はこのプロセスではDCTの役割を調べた。ここでは、肺静脈、心房、房室管を装着すること、マウスおよびヒトの心の中でユニークなDCTを発現する細胞集団を特徴付ける。発現プロファイリングは、この人口は真皮メラノサイトとは異なるアドレナリンおよびムスカリン受容体と表示された転写プロファイルを表明したことを明らかにした。 DCTを欠いた成体マウスでは、心房性不整脈を正常な心臓の開発が増加した感受性が表示されます。培養された原発性心臓メラニン細胞様細胞は興奮したし、それらの欠けているDCTは、早期afterdepolarizationsとの長期の再分極が表示されました。さらに、チロシンキナーゼ受容体キットの変異を持つマウスは、心臓のメラニン細胞様細胞を欠いていたとDCTの不在下で心房性不整脈を開発していませんでした。これらのデータは、心房と肺静脈のメラニン細胞様細胞の機能不全は心房性不整脈に寄与することを示唆している。
私はNDUFB8をサブユニットミトコンドリア複合体のニトロ化は、RIP1およびRIP3媒介壊死を誘発する
一酸化窒素（NO）と他の反応性窒素種は、細胞の生体エネルギーや生存に影響を与えるためにミトコンドリア内の複数のサイトを対象としています。運動イメージング研究は、活性化マクロファージやドナー化合物のいずれかからNOが急速に最終的につながった細胞の生体エネルギーでミトコンドリアの膜電位損失および開始の変化に対応したNO-依存DAF蛍光における用量依存性の漸進的増加を引き起こし、ミトコンドリアに拡散していることを明らかにしない壊死性細胞死。細胞機能障害は、siRNAを介した選択的なノックダウンによって証明されるように正常なミトコンドリアの機能に不可欠である私はNDUFB8をサブユニットミトコンドリア複合体の上昇3-ニトロチロシンの署名によって媒介される。ミトコンドリアのスーパーオキシドジスムターゼの過剰発現は、実質的にNDUFB8ニトロ化を減少させ、ミトコンドリアの恒常性を回復した。さらに、RIP1およびRIP3のいずれかnecrostatin-1またはsiRNAのノックダウンによる細胞の処理は、NO-媒介壊死を防いだ。この作品は、NOおよびミトコンドリア由来のスーパーオキシドとの間の相互作用はこのようにミトコンドリア恒常性における活性酸素と窒素種を介した変化の分子メカニズムを提供し、ミトコンドリアの生体エネルギーと細胞機能を変化させることを示しています。
ミトコンドリア複合体IIは、低酸素ではなくカルシウムとアポトーシスBcl-2タンパク質によって誘導されるミトコンドリア膜電位の損失を防ぎ、
ミトコンドリア膜電位の損失は深刻な生体エネルギーの影響を持っており、心筋梗塞、脳卒中、癌、神経変性を含む多くのヒト疾患に寄与しています。しかし、その隆起と細胞のエネルギー生産の重要性にもかかわらず、ミトコンドリア膜電位が確立されることにより基本的なメカニズムは不明なままである。我々の研究は、複雑なII-ドリブン電子の流れはミトコンドリア膜は、低酸素条件下での偏光となる主要な手段とコハク酸補充によって急速に回復することができ可逆膜の潜在的な損失をもたらした複合体IIの基質コハク酸の不足であることを明らかにする。ミトコンドリア複合体IとF（0）F（1）-ATPのミトコンドリア透過性遷移孔、Bcl-2の（B-細胞リンパ腫2）ファミリータンパク質、または腫れ高振幅とは独立していた酵素誘導されるミトコンドリアの脱分極を阻害するとできませんでしたコハク酸によって逆転することができます。重要なのは、低酸素条件下でのコハク酸代謝は膜電位とATPレベルを復元します。さらに、複合体II媒介電子フローに依拠することは、ミトコンドリア病患者からの細胞は機能的な複合体の欠けている私は、ミトコンドリアの構造と正常細胞のそれに類似し、アゴニストによって誘発されるカルシウムを隔離する機能の両方を伝えるミトコンドリア膜電位を維持することができます。それは低酸素状態の間にミトコンドリア機能を維持するために、魅力的な療法としての複合体IIの機能保全のための段階を設定するので、この知見は重要である。
メタンフェタミン機能障害につながるヒト T リンパ球における Mitrochondrial 酸化的損傷を引き起こします。
メタンフェタミン （メタ） 虐待は感染症の率が法外と関連する知られています。協会 METH の露出や免疫抑制療法の多くの研究がありますが、これまでのところ、基になるメカニズムはまだとらえどころのないまま。本研究では, METH 曝露はミトコンドリアの酸化的損傷に起因したし、プライマリ ヒト T 細胞の機能不全の原因の証拠を提示します。METH 治療 T リンパ球の活性酸素種の生成を強化細胞内カルシウム濃度の上昇につながった。TCR CD28 リンク カルシウム動員とミトコンドリア由来活性酸素の増加と相関 T METH 処理細胞内のミトコンドリアによる後続の取り込み。METH 誘導ミトコンドリア機能不全ミトコンドリア膜電位のマーク付きの減少の形での露出は、ミトコンドリア質量を増加、タンパク質ニトロシルを強化および I、III、および IV 電子輸送チェーンの蛋白質蛋白質複合体のレベルを減少します。TCR CD28 刺激を示す T 細胞機能障害後これらの変更を並列 IL-2 分泌と T 細胞の増殖反応が減少。さらに、抗酸化物質弱毒 METH によるミトコンドリアの損傷ミトコンドリア蛋白質のレベルを維持することで I、III、および IV。完全に、我々 のデータ METH 酸化ストレスおよびミトコンドリアの傷害への覚醒剤乱用二次免疫の減損の基になるメカニズムとしての誘導を介しての T 細胞の機能不全を引き起こすことができることを示しています。
S-グルタチオン化をアクティブにSTIM1と変化させるミトコンドリア恒常性
酸化ストレスは、細胞増殖、分化、細胞死を含む多くの細胞プロセスを、影響を与えます。これらのプロセスと酸化ストレスの間でよく知らリンクは、Ca（2 +）シグナル伝達の変化を経由します。しかし、正確に酸化剤がどのように影響するかのCa（2 +）シグナル伝達は依然として不明である。 - CAの表現型のシフト（2 +）の振動からのカルシウム放出活性化カルシウム（CRAC）を介した容量性Ca（2 +）のエントリ、および間質相互作用の分子1（STIM1）を介して持続的な上昇パターンに動員につながった酸化ストレスとOrai1欠損細胞は酸化ストレスへの耐性があります。機能的には、酸化剤誘発Ca（2 +）のエントリを変化させるミトコンドリアのCa（2 +）処理とバイオエナジェティックスと細胞死をトリガーします。 STIM1は、酸化ストレスに応答して、システイン56でS-glutathionylatedと細胞内Ca（2 +）店舗の独立した構成のCa（2 +）のエントリを呼び起こすされています。これらの実験は、システイン56がSTIM1の酸化依存性活性化するためのセンサであり、酸化ストレスとCRACチャネルを介してシグナル伝達のCa（2 +）の間の分子のリンクを実証することを明らかにした。
SODのPECAM-ターゲットを絞った配信が内皮細胞の炎症反応を抑制する
NADPH-オキシダーゼを含む内皮の酵素による活性酸素種（ROS）の上昇世代は、血管の酸化ストレスと血管細胞接着分子-1（VCAM-1）の露出を含む内皮細胞炎症性活性化に関与している。 /内皮血小板細胞接着分子1（PECAM-1）内皮細胞に特異的に結合すると、対応するROS、H（2）O（2）、スーパーオキシドアニオンの効果を阻害する抗体を結合させたカタラーゼとスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）。本研究では、ポリエチレングリコール（PEG）-SODを含むanti-PECAM/SODではなく、anti-PECAM/catalaseまたは非標的酵素は、2を阻害する - 3倍VCAM発現に腫瘍壊死因子（TNF）によって引き起こされる、インターロイキン1β、およびリポポリサッカライド。抗PECAM / SODではなく、内皮細胞に局在して静脈内注射後に血管内皮に蓄積された非標的の対応は、エンドソーム、およびマウスにおけるリポ多糖に起因するVCAM-1発現を70％阻害した。 Anti-PECAM/SODは、TNFに応答して産生さEEA-1陽性内皮細胞の小胞と急冷ROSと共局在。それぞれ、これらのタンパク質によって生成され、運ばれているスーパーオキシドを肯定、TNF誘導VCAMの発現をブロックNADPHオキシダーゼとアニオンチャネルClC3、仲介炎症性シグナル伝達の阻害剤。誘導される細胞内小胞に局在してToll様受容体3の活性化：Anti-PECAM/SODは、ポリ（I：C）によって引き起こされるVCAMの発現を廃止した。これらの結果は、直接内皮細胞炎症反応におけるスーパーオキシドのエンドソーム流入を巻き込むと内皮にanti-PECAM/SODの標的化送達によって達成この信号は、そのサイト固有の傍受を示唆していると、エンドソームは、抗炎症作用を持つことができます。
マイクロ Rna による HIV 1 Vpr 蛋白の規制緩和神経認知障害の開発に します。
研究は、HIV 感染患者神経機能障害によって特徴づけられる神経認知障害を開発することを示しています。生産的な感染の HIV によるニューロンの欠如は、ウイルスおよび細胞蛋白質ターゲットの HIV-1 感染細胞から放出された神経毒性の活動とこの神経細胞の規制緩和引き起こすことができます示唆しています。R （Vpr） HIV-1 によってエンコードされたタンパク質のウイルスの蛋白質は、様々 な重要なサイトカインと感染し、感染していないセルの炎症性蛋白質の表現を変更するに示されている;しかし関与するメカニズムは不明します。ひと神経細胞ラインを使用して、我々 Vpr を引き起こしてニューロンで撮影できることが見つかりました: (i) カルシウム恒常性、(ii) 小胞体カルシウム放出、（iii） 酸化ストレス経路、（iv） ミトコンドリア機能障害と v - シナプス撤回の活性化の規制緩和。検索に関与する細胞因子、遺伝子組換えの Vpr 蛋白と私たちが扱う人間のニューロン (プライマリ カルチャまたはセル行、SH SY5Y) を使用して microRNAs と遺伝子の配列アッセイを実行しました。興味深いことに、Vpr いくつかのマイクロ Rna (例えばミール 34a) と神経機能障害につながる可能性がその標的遺伝子 (例えば CREB) のレベルに欠けます。したがって、Vpr 神経機能障害の神経認知障害の開発につながる可能性がある現象をマイクロ Rna とそのターゲット遺伝子を緩和を通じての主要な役割を果たしていることを締結します。
Hiv-1 Tat タンパク質神経機能不全を通じて MicroRNAs の中断を促進します。
最後のディケイド マイクロ Rna （Mirna） などの小さな非コード RNA 分子発現と機能真核生物ゲノムにおける重要なレギュレータとして浮上しています。ウイルス感染症と神経疾患の結果も小さい RNAs の影響によって形作られるかもしれないことが示唆されています。これは HIV 感染貢献する神経細胞の規制緩和とエイズ痴呆に内因性の miRNA の発現パターンを変えることを提案する私たちを求めています。したがって、初代培養神経細胞のセルラインを使用して、我々 はウイルスの蛋白質 (hiv-1 Tat） の影響 miRNAs その感染細胞からの放出など特徴的な機能のための表現に関する検討していない細胞によって取り上げ。マイクロ Rna 配列の試金を使用して、Tat いくつか miRNAs のレベルに欠けることを示した。興味深いことに、ミール 34a Tat 扱わニューロンにおける最も高い誘導の miRNAs の間であった。Tat はまたリアルタイム PCR を示すよう CREB タンパク質などのミール 34a 標的遺伝子のレベルを減少させます。Tat の効果は抗 miR 34a 存在下で中和した.そのままの交配の試金を使用して、ミール 34a のレベルが親のマウスと比較して Tat トランスジェニック マウスにおける増加が見つかりました。したがって、我々 の神経機能の規制緩和を締結による hiv-1 Tat タンパク質 miRNA に依存しています。
