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基于芯片的三维细胞培养,在灌注微生物反应器


JoVE 564 5/21/2008

Institute for Biological Interfaces, Forschungszentrum Karlsruhe

我们描述了一个在微型生物反应器培养细胞的三维芯片为基础的平台。一个芯片上可以容纳10百万。无菌,封闭的循环回路中流体流动,氧张力等方面的准确界定条件下,可以培养细胞。

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热休克蛋白 70 表达与不协调调节的 Cochaperone HspBP1 的表达。

热应激蛋白热休克蛋白 70 的胞内水平都被升高后暴露于高温。Cochaperone HspBP1 是细胞内的蛋白,众所周知,绑定到和规管热休克蛋白 70 的活动。这项研究的目的是确定是否 HspBP1 级别更改时热休克蛋白 70 水平发生了改变。热应激导致增加热休克蛋白 70 级,但 HspBP1 水平没有变化。细胞的凋亡诱导药物喜树碱治疗降低热休克蛋白 70 水平却再次对 HspBP1 水平没有影响。细胞治疗喜树碱,再加上热应激也没有呈现热休克蛋白 70 水平的增加。在稳定转染 HspBP1 基因细胞中的表达升高导致 HspBP1 级别不热休克蛋白 70 水平的类似变化的情况下增加了 290%。这些结果表明热休克蛋白 70 和 HspBP1 协调不受规管,但提供 HspBP1 的热休克蛋白 70 的比例增加关联的证据与细胞凋亡,以类似方式对减少热休克蛋白 70 的量。

HSP72 的三个单元格的行中的极低频电磁场暴露后的表达式。

据报磁场中的磁通密度从 microT 到山者能够诱导热休克因子,HSP72 mRNA 或热休克蛋白在不同的单元格。在这项研究中我们调查后治疗计划使用带有 flux density 的 2 到 4 mT microT,频率为 50 赫兹和曝光时间从 15 到 30 分钟的电磁场 HSP72 mRNA 转录水平在三单元格行 (HL 60、 H9c2 和吉拉尔迪心脏细胞) 和两种细胞株 (HL-60 和吉拉尔迪心脏细胞) 细胞内的 HSP72 蛋白质含量的变化。没有任何治疗方法或方式显示 HSP72 蛋白质水平,任何重大影响虽然 HSP72 mRNA 可以被诱导,至少在某种程度上,其中一个参数的组合中所有的单元格行测试。很明显,HSP72 mRNA 转录和翻译都不一定耦合中的某些单元格。这导致对 HSP72 mRNA 水平电磁场影响不指示对下游的影响,除非增加的 mRNA 水平可以与增加 HSP72 的蛋白质水平相关的结论。

三维组织组织的体外生成基于芯片的平台。

我们描述组织的三维培养的多功能平台。该设备是芯片组成的聚合物具有 1-2 cm(2) 微结构领域。芯片构造为网格的微型容器测量 120 300 x 300 x 300 microm (h x l x w),或作为数组的圆形凹槽 300 microm 深 300 microm 直径)。微容器可能单独配备可寻址 3D-微电极,其中允许可兴奋性细胞电刺激和电化学访问参数的现场测量。系统是适用于高细胞密度达 8 x 10(6) 细胞的培养,并由于矩形网格布局,因此允许耕地细胞自动显微分析。超过 1000年微容器启用并行分析 superfusion/灌注条件下不同的参数。我们与各种类型的生物反应器组合使用不同的聚合物芯片证明组培应用程序基于芯片的生物反应器主要适合。小学和既定的单元格行成功栽培和分析的功能特性。当细胞培养中非灌流芯片时,随着时间的推移有相当程度的细胞凋亡可以观察到指示需要积极的灌注。这里介绍的系统还申请多胚胎干细胞的分化分析和可能适合干细胞巢的分析。

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