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Articles by Ching Wen Tseng in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Sottocutaneo infezione di Staphylococcus aureus meticillino resistente (MRSA)
Department of Pediatrics, Cedars-Sinai Medical Center
Murino e morbida pelle modello di infezione dei tessuti viene utilizzato per valutare la funzione di virulenza di S. aureus meticillino-resistente (MRSA) e le risposte immunologiche ospite. Qui, abbiamo presentato un modello di infezione per via sottocutanea per la pelle e le infezioni dei tessuti molli.
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Controllo Regolatore Gene Accessorio Dell'enterotossina Staphyloccoccal Espressione Genica D
Il sistema di quorum sensing di Staphylococcus aureus, il sistema accessorio gene regolatore (Agr), è responsabile dell'aumentata trascrizione di alcuni geni exoprotein e diminuito la trascrizione di alcune proteine associate a parete delle cellule durante la fase di crescita postexponential. Questo regolamento è importante per la virulenza, come evidenziato da una riduzione della virulenza associato a una perdita del sistema Agr. Il determinante D (sed) dell'enterotossina è sovraregolati dal sistema Agr. Per definire gli elementi cis Agr-regolata all'interno della regione del promotore di sed, abbiamo utilizzato i promotori non regolamentate da Agr per creare promotori ibrido. Promotori di ibridi sono stati creati utilizzando sed sequenze combinate con l'enterotossina un promotore (mare) o le sequenze promotore di S. aureus lac operon. I risultati ottenuti ha indicato che l'elemento di controllo Agr del promotore sed risiede all'interno dell'elemento-35 promotore e presso il Pribnow box al sito + 1 del promotore. A queste posizioni del promotore della sed, è stata trovata una sequenza 6-bp ripetuta direttamente. Questa ripetizione è importante per l'attività di promotore generale e regolamento di massima dell'attività di promotore richiede che entrambi ripetere gli elementi. Inoltre, Agr controllo dell'attività di promotore di sed è stato trovato per essere dipendente della presenza di una proteina funzionale di Rot. Pertanto, l'aumento nella trascrizione sed postexponential risultati dalla riduzione Agr-mediata in putrefazione attività piuttosto che come un effetto diretto del sistema Agr.
Putrefazione Della Repressione Dell'espressione Di Enterotossina B in Staphylococcus Aureus
Il sistema regolatore (Agr) gene accessorio è un sistema di quorum sensing di Staphylococcus aureus responsabile upregulation di alcuni geni exoprotein e downregulation di talune proteine della parete cellulare connesso durante la fase di crescita post-exponential. Il determinante di enterotossina B (seb) è sovraregolati dal sistema Agr. Elementi cis AGR-regolata all'interno della regione del promotore di seb sono stati esaminati mediante analisi di eliminazione del promotore della seb da un approccio di promotore ibrido utilizzando il promotore operone lac stafilococcica. Per identificare il percorso normativo per l'espressione dell'enterotossina B, il promotore di seb fuso per il gene reporter cloramfenicolo acetiltransferasi fu introdotto in mutanti di S. aureus privo di diversi membri della famiglia di regolatori trascrizionali Sar o agr. AGR controllo dell'attività di promotore di seb è stato trovato per essere dipendente della presenza di una proteina funzionale di putrefazione, e Rot ha dimostrato di essere in grado di legarsi al promotore seb. Pertanto, l'incremento di fase di exponential-Agr-mediata nella trascrizione seb deriva dall'inattivazione del sistema Agr di attività repressor Rot.
Regolazione Dell'espressione Del Marciume in Staphylococcus Aureus
Repressor di tossine (Rot) è conosciuto per essere un regolatore globale di espressione genica virulenza in Staphylococcus aureus. La funzione di putrefazione, ma non la trascrizione di marciume, è regolata dal sistema di quorum sensing stafilococciche accessorio gene regolatore (Agr). In aggiunta, il fattore sigma alternativo (sigma(B)) ha un effetto repressivo sull'espressione marciume postexponential in fase di crescita. I profili di transcriptional del marciume nel sigma (B) - positivo e sigma (B) - negativo ceppi in postexponential e stazionari fasi di crescita sono stati confrontati. Un upregulation dell'espressione rot è stata osservata durante la fase stazionaria di crescita, e questo upregulation si è verificato in un sigma (B)-modo dipendente. Inoltre sono stati studiati gli effetti di altri fattori trascrizionali stafilococciche. Mobilità elettroforetica MAIUSC dosaggi ha rivelato che le proteine presenti nei lisati stafilococciche ritardato la mobilità del frammento rot promotore e che l'effetto è stato ridotto, ma non eliminata, con lisati da ceppi manca una proteina funzionale di SarS. Un modesto upregulation dell'espressione marciume è stato osservato anche in ceppi di sarS-negativo. Purificazione di affinità di binding del frammento di promotore di marciume, seguita da sequenziamento di N-terminale della proteina, proteine identificate le proteine di SarA e SarR. Analisi di estensione dell'iniettore del promotore della putrefazione ha rivelato un certo numero di prodotti discreti. Tuttavia, queste specie di RNA non erano associate con attività identificabili promotore e probabilmente rappresentati prodotti di degradazione di RNA. Perdita della funzione Rot durante la fase di crescita probabile postexponential comporta la degradazione di rot mRNA ma non l'inibizione della putrefazione della trascrizione.
Staphylococcus Aureus Leucocidina Di Panton-Valentine Contribuisce All'infiammazione E Muscolare Lesioni Tessutali
Comunità-associati-Staphylococcus aureus meticillino resistente (CA-MRSA) minaccia la salute pubblica in tutto il mondo, e dati epidemiologici suggeriscono che la leucocidina Panton-Valentine (PVL) espresso dalla maggior parte dei ceppi di CA-MRSA potrebbe contribuire a gravi infezioni nell'uomo, specialmente negli ospiti giovani e immunitarie. PVL è proposto per indurre citolisi o apoptosi dei fagociti. Tuttavia, recenti confronti di ceppi di CA-MRSA isogeni con o senza PVL hanno rivelato differenze nella attività citolitica PMN umana. Inoltre, molti studi del mouse eseguiti fino ad oggi sono riusciti a dimostrare un ruolo di virulenza per PVL, provocando la questione: PVL ha un ruolo meccanicistico di infezione umana? In questa relazione, abbiamo valutato il contributo di PVL gravi della pelle e infezioni dei tessuti molli. Abbiamo generato mutanti PVL in ceppi CA-MRSA isolati da pazienti con necrotizzante fascite e utilizzato questi strumenti per valutare il ruolo patogeno di PVL in vivo. In un modello di necrotizzante infezione dei tessuti molli, abbiamo trovato che PVL causato significativi danni del muscolo, ma non la pelle. Infortunio muscolare era legato all'induzione di chemochine pro-infiammatorie KC, MIP-2 e RANTES e il reclutamento dei neutrofili. Danni ai tessuti erano più prominenti nei topi giovani e di quei ceppi di topi che più efficacemente eliminato S. aureus e non era significativo in topi anziani e ceppi di topo che ha avuto una risposta immunitaria più limitata al patogeno. PVL mediata infortunio potrebbe essere bloccato dal pretrattamento con anticorpi anti-PVL. I nostri dati forniscono nuove intuizioni CA-MRSA patogenesi, epidemiologia e terapie. PVL potrebbe contribuire all'aumentata incidenza di miosite in infezione da CA-MRSA, e la tossina potrebbe mediare lesioni tessutali da meccanismi diversi da uccisione diretta dei fagociti.
Staphylococcus Aureus Obiettivi Leucocidina Panton-Valentine Muscolare Dei Tessuti in Un Bambino Con Miosite E Necrotizzante Fascite
L'incidenza di miosite è aumentata dopo l'avvento dell'epidemia di comunità associate all'infezione da meticillino-resistenti Staphylococcus aureus, e leucocidina di Panton-Valentine è stato implicato come un fattore che contribuisce a lesioni muscolari più gravi. Riportiamo un caso di miosite grave osteomielite settica di accompagnamento e necrotizzante fascite causata da un ceppo di Panton-Valentine leucocidina-positivi S. aureus. Immunostaining ha mostrato forte legame della tossina leucocidina Panton-Valentine ai tessuti muscolo necrotico.
