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Articles by Christopher Pohlmeyer in JoVE
JoVE Bioengineering
Manipolazione spazio-temporale di attività GTPasi Piccolo a livello subcellulare e su scala temporale di secondi nelle cellule viventi
1Department of Cell Biology, Center for Cell Dynamics, Johns Hopkins University, 2Graduate School of Pharmaceutical Sciences, University of Tokyo, 3Biomedical Engineering, Johns Hopkins University
Un metodo per spazio-temporale controllo delle attività di piccola GTPasi dalla luce viene descritta. Questo metodo si basa sulla rapamicina indotta FKBP-FRB eterodimerizzazione e foto-gabbie sistemi. Ottimizzazione di irradiazione di luce permette l'attivazione spazio-temporalmente controllato delle piccole GTPasi a livello subcellulare.
Other articles by Christopher Pohlmeyer on PubMed
Un Photocleavable Rapamicina Coniugato Per Controllo Spatiotemporal Di Piccole Attività GTPasi
Abbiamo sviluppato un nuovo metodo per spatiotemporally di controllo dell'attività delle molecole di segnalazione. Un derivato di rapamicina photocaged recentemente sintetizzati indotta rapida dimerizzazione di FKBP (FK-506 binding protein) e FRB (FKBP-rapamicina binding protein) dopo irradiazione UV. Con questo sistema e l'irradiazione UV spazialmente confinata, abbiamo raggiunto subcellularly localizzata attivazione di Rac, un membro del piccolo GTPases. La nostra tecnica offre un potente approccio agli studi di eventi dinamici di segnalazione intracellulari.
Innescando Le Comete Di Actina Versus Membrana Volant: Effetti Caratteristici Dei Phosphoinositides Sulla Riorganizzazione Dell'actina
Un insieme limitato di lipidi di membrana phosphoinositide regolano diverse funzioni cellulari tra cui proliferazione, differenziazione e migrazione. Abbiamo sviluppato due tecniche basate su dimerizzazione della proteina indotta da rapamicina per modificare rapidamente la concentrazione del plasma membrana fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato [PI(4,5)P(2)]. In primo luogo, utilizzando una membrana-reclutabile forma di PI (4) P. 5-chinasi, aumentata sintesi PI(4,5)P(2) dal fosfatidilinositolo 4-fosfato [PI (4) P] e trovato che COS-7, HeLa e le cellule renali embrionali umane 293 formano fasci di filamenti di actina motili conosciuti come comete di actina. Al contrario, una seconda tecnica che aumenta la concentrazione di PI(4,5)P(2) senza consumare PI (4) P indotta membrana volant. Questi fenotipi distinti erano mediati dalla dynamin-mediata del traffico vescicolare e reciprocamente inibitoria diafonia tra il piccolo guanosina triphosphatases Rac e RhoA. I nostri risultati indicano che l'effetto di PI(4,5)P(2) sulla riorganizzazione dell'actina dipende dall'abbondanza di altri phosphoinositides, come PI (4) P. Quindi, regolazione combinatoria di phosphoinositide concentrazioni possa contribuire alla diversità delle funzioni di phosphoinositide.
