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Articles by Diana Pauly in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Technologie IgY: Extraction d'anticorps de jaune d'œuf de poulet par polyéthylène glycol (PEG) Précipitations
1Center for Biological Security, Robert Koch-Institute, 2CICVyA - INTA Castelar, Instituto de Virología, 3Center of Molecular Immunology, Ciudad de la Habana, Cuba, 4Department of Biology, Chemistry, Pharmacy, Institute of Biology-Neurobiology, Free University of Berlin, 5Institut of Pharmacology, Charité-University Medicine of Berlin
Ce protocole décrit notamment l'extraction de IgY totales du jaune d'oeuf par précipitation de polyéthylène glycol et donne des informations générales sur la technologie IgY.
Other articles by Diana Pauly on PubMed
Quantification Simultanée Des Cinq Des Toxines Bactériennes Et Végétales De Matrices Complexes En Utilisant Un Test Multiplexé Suspension Magnétique Fluorescent
Proteotoxins comme la ricine, abrin, neurotoxines botulinique type A et B (BoNT/A, BoNT/B) et de l'entérotoxine staphylococcique B (SEB) sont considérés comme des agents de guerre biologiques potentiels qui pourraient être utilisés pour des attaques bioterroristes sur la chaîne alimentaire. Dans cette étude, nous avons utilisé une stratégie de vaccination roman pour générer de haute affinité des anticorps monoclonaux ou polyclonaux contre la ricine native, BoNT/A et BoNT/B. Les anticorps ont été utilisés ainsi que des anticorps anti-SEB et abrin d'établir un tableau très sensible perle multiplex magnétiques et fluorescent ayant une excellente sensibilité entre 2 ng/L et 546 ng/L dans un volume d'échantillon minimale de 50 microL. Le test a été validé à l'aide de 20 différents analytes de connexes et la précision de dosage a été déterminée. Faire progresser la technologie actuelle du tableau de perle, le roman microbilles magnétiques et fluorescent prouvé se prêtent à des procédures d'enrichissement, par tout autre sensibilité croissante à 0,3-85 ng/L, à partir d'un volume d'échantillon de 500 microL. En outre, la méthode a été appliquée avec succès pour l'identification simultanée des toxines cible dopés dans les matrices alimentaires complexes comme les aliments pour bébés, lait et l'yaourt. Sur la base de nos résultats, le test semble être un bon outil pour un dépistage à grande échelle des échantillons provenant de la chaîne d'approvisionnement alimentaire.
Multiplex Detection of Microbial Et Planter Les Toxines Par Enrichissement D'immunoaffinité Et Spectrométrie De Masse De Désorption-ionisation Laser Assistée Par Matrice
Plante et toxines microbiennes comme la ricine, entérotoxine staphylococcique B (SEB) et les neurotoxines botuliniques (BoNT) sont considérés comme des agents de guerre biologiques potentiels. Méthodes de dépistage spécifiques sont donc nécessaires permettant l'identification non ambiguë et sensible de ces risques biologiques, notamment pour la présence de toxines dans des matrices complexes d'échantillon. La présente étude décrit une combinaison d'une approche de purification multiplex-immunoaffinité, suivie de désorption-ionisation de laser assistée par matrice (MALDI)-base de détection pour l'identification simultanée de la ricine, SEB, BoNT/A et BoNT/B. La méthode comprend une étape d'enrichissement affinité, en utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques pour chacun des quatre toxines qui ont été sélectionnés à partir d'un pool d'anticorps. Les anticorps sélectionnés permettent une capture spécifique et simultanée de la ricine, SEB, BoNT/A, BoNT/B et les complexes de BoNT. Ceux-ci ont été par la suite identifiés par MALDI temps de vol (TOF) spectrométrie de masse (MS), digestion trypsique suivante. La sensibilité de la technique était environ 500 fmol pour chacun des toxines. Ces toxines sont décelables dans les 8 h, même lorsqu'ils sont présents dans les matrices complexes tels que le lait ou le jus. Par ailleurs, le dosage multiplex à base de MALDI autorisé pour la discrimination des parentes BoNT sero - et sous-types, y compris un véritable cas de botulisme d'origine alimentaire en Allemagne.
Le Cas De La Toxine Botulique Dans Le Lait : Des Données Expérimentales
Neurotoxine botulique (BoNT) est la substance plus toxique connue pour l'homme et l'agent causal du botulisme. En raison de sa haute toxicité et la disponibilité de la productrice botulinum de Clostridium organisme, BoNT est considéré comme un agent de guerre biologique potentiel. En raison du processus de pasteurisation doux, ainsi que la rapide produit distribution et la consommation, la chaîne d'approvisionnement de lait a longtemps été considéré comme une cible potentielle d'une attaque bioterroriste. Car, à notre connaissance, aucune donnée empirique sur l'inactivation de BoNT dans le lait pendant la pasteurisation n'est disponibles en ce moment, nous avons étudié les activités de BoNT type A (BoNT/A) et BoNT/B, ainsi que leurs complexes respectifs, lors d'un processus de pasteurisation de laboratoire. Lorsque nous avons mesuré l'activité phosphatase alcaline lait, qui est un paramètre reconnues de pasteurisation complété avec succès, notre méthode s'est avérée comparable au processus industriel. Après chauffage lait cru additionné d'une quantité déterminée de BoNT/A ou BoNT/B ou l'un de leurs complexes respectifs, l'intégrité structurale de la toxine a été déterminé par dosage immunoenzymatique (ELISA) et son activité fonctionnelle par des tests biologiques de la souris. Nous avons démontré que la pasteurisation standard à 72 degrés C pendant 15 s inactive au moins 99,99 % de BoNT/A et BoNT/B et au moins 99,5 % de leurs complexes respectifs. Nos résultats suggèrent que si BoNTs ou leurs complexes ont été délibérément relâchés dans la chaîne d'approvisionnement de lait, conditions de pasteurisation standard réduirait leur activité beaucoup plus spectaculaire que prévu et donc baisser le niveau de menace du scénario largement discuté « BoNT dans le lait ».
Pentaplexed Quantitative PCR En Temps Réel Pour La Détection Simultanée Et La Quantification Des Clostridia De Productrices De Neurotoxine Botulique Dans Les Aliments Et Les échantillons Cliniques
Les neurotoxines botulique sont produites par la bactérie anaérobie Clostridium botulinum et sont divisés en sept sérotypes distincts (A à G) connus pour causer le botulisme chez les animaux et les humains. Dans cette étude, un multiplex quantitative Real-time PCR assay pour la détection simultanée des sérotypes humains pathogène de Clostridium botulinum A, B, E et F a été développé. Basée sur la chimie TaqMan, nous avons utilisé cinq sets individuels amorce-sonde dans un PCR, combinant les deux mineur rainure liant - et verrouillé sondes contenant de l'acide nucléique. Chaque sonde d'hydrolyse a été étiqueté individuellement avec des fluorochromes distinguables, permettant ainsi la discrimination entre les sérotypes A, B, E et F. Afin d'éviter les résultats faussement négatifs, nous avons conçu un témoin d'amplification interne, qui a été amplifié simultanément avec les gènes quatre cibles, produisant ainsi une approche PCR pentaplexed avec une probabilité de détection de 95 % entre 7 et 287 génomes par PCR. En outre, nous avons développé six individuels singleplex tests de PCR en temps réel basés sur la chimie TaqMan pour la détection de c. botulinum sérotypes A, B, C, D, E et F. Après une analyse de 42 C. botulinum et 57 non-C. souches botulique, la singleplex et des tests de PCR multiplexes a montré une excellente spécificité. À l'aide de pointes échantillons alimentaires, que nous avons pu détecter entre 10, 3 et 10 5 UFC/ml, respectivement. En outre, nous avons pu détecter de c. botulinum dans les échantillons provenant de plusieurs cas de botulisme en Allemagne. Dans l'ensemble, le test de pentaplexed ont montré la spécificité et la sensibilité élevée et autorisés pour la projection simultanée et la différenciation des spécimens de c. botulinum A, B, E et F.
Ricinus Communis Intoxications Humaines Et Veterinary Medicine-A Résumé Des Cas Réels
Accidentelles et prévues Ricinus communis intoxications humaines et animales sont connues depuis des siècles, mais l'agent causal est resté insaisissable jusqu'en 1888 quand Stillmark attribuables à la toxicité de la ricine de la lectine. Ricinus communis est cultivé dans le monde entier à l'échelle industrielle pour la production d'huile de ricin. Comme sous-produit de la production de l'huile de ricin ricine est produit en masse au-dessus de 1 million de tonnes par an. Sur la base de sa disponibilité, toxicité, facilité de préparation et de l'absence actuelle de contre-mesures médicales, ricine a gagné l'attention comme agent de guerre biologique potentiel. Les graines contiennent également le moins toxique, mais très homologue agglutinine de Ricinus communis et la ricinine alcaloïde, et surtout celui-ci peut être utilisé pour effectuer le suivi des intoxications. Après extraction de l'huile et la désintoxication, le tourteau dégraissé est utilisé comme engrais organique et comme aliments de faible valeur. Dans ce contexte, on a des rapports sporadiques de différents pays, décrivant des intoxications animales après absorption d'engrais évidemment insuffisamment détoxifiée. Observations en Allemagne depuis plusieurs années, toutefois, nous ont amenés à spéculer que le processus de désintoxication n'est pas toujours effectué soigneusement et contrôlé, appelant à des réglementations internationales qui stipulent clairement un seuil de ricine dans les engrais. Dans cette revue, nous résumons les connaissances sur l'empoisonnement avec des graines de ricin ou de ricin tant chez les humains et les animaux, avec un accent particulier sur les intoxications en raison des repas mal détoxifiés ricin et analyse médico-légale intentionnels et non intentionnels.
