Translate this page to:
Spanish
In JoVE (1)
Other Publications (5)
Automatic Translation
This translation into Spanish was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Diana Pauly in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Tecnología IgY: Extracción de anticuerpos de pollo de yema de huevo por el polietilenglicol (PEG) Precipitación
1Center for Biological Security, Robert Koch-Institute, 2CICVyA - INTA Castelar, Instituto de Virología, 3Center of Molecular Immunology, Ciudad de la Habana, Cuba, 4Department of Biology, Chemistry, Pharmacy, Institute of Biology-Neurobiology, Free University of Berlin, 5Institut of Pharmacology, Charité-University Medicine of Berlin
Este protocolo describe en particular la extracción de IgY total de yema de huevo por medio de precipitación con polietilenglicol y ofrece información general acerca de la tecnología IgY.
Other articles by Diana Pauly on PubMed
Cuantificación Simultánea De Cinco Toxinas Bacterianas Y La Planta De Matrices Complejas Usando Un Análisis De Suspensión Magnética Fluorescente Multiplexados
Proteotoxins como la ricina, abrina, neurotoxinas botulínica tipo unas y B (BoNT/A, BoNT/B) y la enterotoxina estafilocócica B (SEB) son considerados como potenciales agentes de guerra biológica que podrían ser utilizados para ataques de bioterrorismo de la cadena alimentaria. En este estudio se utilizó una estrategia de inmunización novela para generar anticuerpos monoclonales y policlonales de alta afinidad contra ricina nativa, BoNT/A y BoNT/B. Los anticuerpos fueron utilizados junto con anticuerpos contra SEB y abrina establecer una matriz de alta sensibilidad magnética y fluorescente grano múltiplex con excelente sensibilidad entre 2 ng/L y 546 ng/L de un volumen de muestra mínimo de 50 microL. El ensayo fue validado utilizando 20 analitos relacionados con diferentes y la precisión del ensayo se determinó. Avance de la tecnología existente de la matriz de grano, la novela microesferas magnéticas y fluorescente resultó favorable a los procedimientos de enriquecimiento, por más sensibilidad creciente a 0.3-85 ng/L, a partir de un volumen de muestra de 500 microL. Además, el método fue aplicado con éxito para la identificación simultánea de las toxinas de destino tacon en matrices complejas de alimentos como la leche, alimentos para bebés y yogur. En base a nuestros resultados, el ensayo parece ser una buena herramienta para la detección a gran escala de las muestras de la cadena alimentaria.
Detección De Microbianas De Múltiplex Y Planta Toxinas Por Enriquecimiento De Inmunoafinidad Y Espectrometría De Masas Desorción/ionización Láser Asistida Por Matriz
Planta y toxinas microbianas como ricina, enterotoxina estafilocócica B (SEB) y las neurotoxinas botulínica (NTBo) se consideran como potenciales agentes de guerra biológica. Métodos de proyección específica son, por lo tanto, requiere que permiten la identificación inequívoca y sensible de estos riesgos biológicos, particularmente para la ocurrencia de las toxinas en matrices complejas de la muestra. El presente estudio describe una combinación de un enfoque de purificación múltiplex-inmunoafinidad, seguido de desorción/ionización de láser asistida por matriz (MALDI)-basado en la detección de la identificación simultánea de ricina, SEB, BoNT/A y BoNT/B. El método comprende una etapa de enriquecimiento de afinidad, utilizando anticuerpos monoclonales específicos para cada una de las cuatro toxinas que han sido seleccionadas de un total de anticuerpos. Los anticuerpos seleccionados permiten captura específica y simultánea de ricina, SEB, BoNT/A, BoNT/B y los correspondientes complejos de BoNT. Estos fueron identificados posteriormente por MALDI tiempo de vuelo (TOF) espectrometría de masas (MS), digestión tríptica siguiente. La sensibilidad de la técnica fue de aproximadamente 500 fmol para cada una de las toxinas. Estas toxinas eran perceptibles dentro de 8 horas, incluso cuando se presenta en matrices complejas como la leche o jugo. Además, el ensayo múltiple basadas en MALDI permitido para la discriminación de BoNT estrechamente relacionados sero - y subtipos, incluyendo un caso real del botulismo de origen alimentario en Alemania.
El Caso De La Toxina Botulínica En Leche: Datos Experimentales
Neurotoxina botulínica (NTBo) es la sustancia más tóxica conocida por el hombre y el agente causante del botulismo. Debido a su alta toxicidad y la disponibilidad de la producción Clostridium botulinum de organismo, BoNT es considerado como un agente potencial de guerra biológica. Debido al proceso de pasteurización suave, así como distribución de productos rápido y consumo, la cadena de suministro de leche durante mucho tiempo se ha considerado un potencial blanco de un ataque bioterrorista. Puesto que, a nuestro conocimiento, no hay datos empíricos sobre la inactivación de la NTBo en la leche durante la pasteurización están disponibles en este momento, hemos investigado las actividades de la NTBo tipo A (BoNT/A) y BoNT/B, así como sus respectivos complejos, durante un proceso de pasteurización a escala de laboratorio. Cuando supervisamos la actividad de la fosfatasa alcalina de leche, que es un parámetro aceptados en el sector de pasterización completada con éxito, nuestro método resultó comparable al proceso industrial. Después de calentar la leche enriquecida con una cantidad fija de BoNT/A o BoNT/B o uno de sus respectivos complejos, la integridad estructural de la toxina se determinó por enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) y su actividad funcional por bioensayo de ratón. Demostramos que pasteurización estándar a 72 grados C para 15 s hace inactivo por lo menos el 99.99% de BoNT/A y BoNT/B y al menos un 99.5% de sus respectivos complejos. Nuestros resultados sugieren que si BoNTs o sus complejos fueron liberados deliberadamente en la cadena de suministro de leche, las condiciones de pasteurización estándar reduciría su actividad mucho más espectacular de lo previsto originalmente y así bajar el nivel de amenaza del escenario "BoNT ampliamente discutido en la leche".
Pentaplexed Cuantitativa En Tiempo Real Análisis De PCR Para La Detección Simultánea Y Cuantificación De Clostridios De Productoras De La Neurotoxina Botulínica En Alimentos Y Muestras Clínicas
Botulínica neurotoxinas son producidas por la bacteria anaeróbica Clostridium botulinum y se dividen en siete distintos serotipos (A G) conocidos por causar botulismo en animales y seres humanos. En este estudio, una PCR en tiempo real cuantitativa multiplexado análisis para la detección simultánea de los serotipos de botulínica C. patógenos humanos se desarrollaron A, B, E y F. Basado en la química TaqMan, utilizamos cinco conjuntos de cartilla-sonda individuales dentro de una PCR, combinando ambas carpeta surco menor - y bloqueado las sondas de ácido nucleico que contienen. Cada sonda hidrólisis fue etiquetada individualmente con fluorocromos distinguibles, permitiendo la discriminación entre los serotipos A, B, E y f el. Para evitar resultados falsos negativos, diseñamos un control de amplificación interno, que simultáneamente se amplificó con los genes de cuatro objetivos, dando así un enfoque PCR de pentaplexed con probabilidades de detección del 95% entre 7 y 287 equivalentes de genoma por PCR. Además, hemos desarrollado el análisis PCR en tiempo real singleplex individuales de seis, que basada en la química TaqMan para la detección de los serotipos de C. botulinum A, B, C, D, E y f el. En el análisis de 42 C. botulinum y 57 no-C. cepas botulínica, singleplex y análisis PCR múltiplexes demostraron una excelente especificidad. Usando tacon muestras alimentarias, que hemos sido capaces de detectar entre 10 y 5 10 UFC/ml, respectivamente. Además, hemos sido capaces de detectar C. botulinum en muestras de varios casos de botulismo en Alemania. En general, el ensayo de pentaplexed demostró la alta sensibilidad y especificidad y permitió la proyección simultánea y diferenciación de especímenes para C. botulinum A, B, E y f el.
Ricinus Communis Intoxicaciones En Humanos Y Veterinary Medicine-A Resumen De Casos Reales
Accidentales e intencionados Ricinus communis intoxicaciones en humanos y animales son conocidas desde hace siglos pero el agente causativo seguía siendo esquivo hasta 1888 cuando Stillmark atribuyó la toxicidad a la ricina lectinas. Ricinus communis crece en todo el mundo a escala industrial para la producción de aceite de ricino. Como subproducto en la producción de aceite de ricino ricina masa se produce por encima de 1 millón de toneladas por año. Sobre la base de su disponibilidad, toxicidad, facilidad de preparación y la actual falta de contramedidas médicas, ricina ha ganado atención como potencial agente de guerra biológica. Las semillas contienen también el menos tóxico, pero altamente homóloga Ricinus communis aglutinina y el alcaloide ricinine, y especialmente este último puede usarse para rastrear intoxicaciones. Después de la extracción de petróleo y la desintoxicación, la torta de prensa desengrasada se utiliza como abono orgánico y como alimento de bajo valor. En este contexto, ha habido informes esporádicos de diferentes países que describen intoxicaciones animales después de la absorción de fertilizante obviamente escaso desintoxicado. Observaciones en Alemania durante varios años, sin embargo, nos han llevado a especular que el proceso de desintoxicación no siempre es bien realizado y controlado, pidiendo regulaciones internacionales que indican claramente un umbral de ricina en fertilizante. En esta revisión se resumieron conocimientos sobre previsto y no intencional, envenenamiento con semillas de ricino o castor tanto en los seres humanos y animales, con un énfasis particular en intoxicaciones debido a mal desintoxicados ricino comida y análisis forense.
