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Articles by Dor Salomon in JoVE
JoVE General
성장 저해 Phenotypes의 확인은 효모에서 세균의 종류 III Effectors 표현에 의해 유도된
Department of Plant Sciences, Tel Aviv University
이 비디오에서는, 우리는 효모와 효과기 유발 성장 저해 phenotypes의 식별에 세균성 유형 III의 effectors의 표현을위한 절차를 설명합니다. 이러한 phenotypes는 이후 이펙터 기능과 목표를 명료하게하다에 악용될 수 있습니다.
Other articles by Dor Salomon on PubMed
토마토 작은 분자 Ligands와 Pto 저항 단백질 키 니 아 제 활동을 무시 합니다
토마토 (까 lycopersicum) 단백질 키 니 아 제 Pto 수 여 녹 syringae에 대 한 저항 pv. 토마토 박테리아 AvrPto 및 AvrPtoB effector 단백질을 표현. Pto는 특히 면역 반응의 활성화 트리거링 직접적인 물리적 상호 작용에 의해 두 이펙터를 인식 합니다. 여기, Pto PP1, ATP 경쟁 작은 분자 억제 물의 유사 체를 감광 성을 위해 화학 유전자 접근을 사용 했습니다. 민감하게 Pto와 함께에서 PP1 유사 체를 사용 하 여 (Pto(as)), 우리 검사 Pto 키 니 아 제 활동 이펙터 인식 및 신호 전달에서의 역할. 기 막히게, PP1 유사 체는 효율적으로 Pto(as) 체 외의 키 니 아 제 활동을 저해 하는 동안 그들은 AvrPto 및 Avrptob와 pto(as)의 상호 작용에서에서 향상 된 효 모 2 잡종 시스템. 또한, PP1 유사 체의 존재 Pto(as) 돌연변이 Pto-AvrPto 상호 작용에 대 한 중요 한 autophosphorylation 사이트 또는 catalytically 필수 잔류물에서 무시 하 고 두 이펙터와 상호 작용. 또한, PP1-PP1 아날로그 3MB, 존재 Pto(as) 키 니 아 제 불충분 한 형태의 planta에 AvrPto 종속 과민 반응 유발. 이러한 연구 결과, 것이 좋습니다 보다는 당, 구조적 변화 가능성이 Pto에 autophosphorylation에 의해 실행 하 고 pto(as)에서 리간드 바인딩에 의해 유사 인 산화 세균 이펙터의 인식에 대 한 전제 조건입니다. 인식에 따라 키 니 아 제 활동 Pto planta에 시그널링을 위한 불가결 것 인 듯하다. 여기 Pto의 특정 작은 분자 억제제 개발에 적용 하는 화학 유전 전략 다른 식물 단백질 kinases vivo에서의 생물학적 기능 연구를 위한 귀중 한 도구를 나타냅니다.
식물 단백질 Kinases의 기능 분석을 위한 화학 유전자 접근
식물 게놈 인코딩 수백 개의 단백질 kinases 아직 극히 일부에 그들 정확한 기능 및 인 산화에 대해서만 대상 확인 되었습니다. 최근에, 우리는 토마토 떠들고/트레오닌 니 Pto PP1, ATP 경쟁적이 고 세포 투과성 작은 분자 억제 물의 유사 체를 감광 성을 화학 유전자 접근 적용. Pto 니 세균성 이펙터의 특정 인식에 따라 면역 반응을 활성화 하 여 Pst 박테리아에 대 한 저항을 수 여. 아날로그 구분 Pto와 함께에서 PP1 유사 체를 사용 하 여 우리는 Pto 키 니 아 제 활동 이펙터 인식 및 신호 전달에서의 역할에 새로운 빛을 나타냈다. 여기 우리는 다른 방어 관련 식물 단백질 키 니 아, 지도 키 니 아 제 Lempk3이 화학 유전 방식 사용 하 여 확대. 또한, 우리는 아날로그 구분을 표시 하지만 되지 야생-타입 kinases 부자연 스러운 N (6)을 사용할 수 있습니다-ATP 유사 체 니 관심의 직접 인 산화 대상 태그에 대 한 악용 될 수 있는 phosphodonors로 수정. 따라서, kinases 작은 분자 억제 물 PP1 매우 유사에의 민감성과 ATP 수 단백질 kinases 세포 기능 검색 및 식물의 인 산화 기판에 대 한 효과적인 도구가 될.
Ssz1 Upregulating Cdc48에 의해 복잡 한 Cdc48-ufd1-npl4 결함을 표현 하는 셀에 Endoplasmic 그물 관련 단백질 저하를 복원 합니다
Endoplasmic 그물 (ER)-관련된 단백질 저하 (ERAD) 통로 응급실에서 탈 선 단백질 제거. Cdc48p-Ufd1p-npl4p의 중요 한 역할을 가리킨다 Saccharomyces 장애 ERAD에 의해이 복잡 한에 돌연변이와 cerevisiae의 유전자. 우리는 cdc48 10 진압에 대 한 유전자 화면에서 ssz1을 확인 하 고 그것이 보여 다 면 발현 성 약물 저항 (PDR) 네트워크를 통해 upregulates Cdc48p. SSZ1 삭제 효과가 없 었 하는 동안 복원 pSSZ1 플라스 미드 ERAD-M 6myc-Hmg2 cdc48-10, ufd1 2, npl4-1에의 장애인. Ssz1p Pdr1p, PDR 마스터 레 귤 레이 터를 활성화합니다. 실제로, plasmids PDR1 또는 그 대상 유전자 rpn4의 cdc48-10p 수준 증가 하 고 cdc48-10에서 ERAD M를 복원. Rpn4p 규제 프로테아좀 subunits 및 cdc48의 전사, RPN4 삭제 ERAD를 폐지 하는 따라서. 그러나, deltarpn4에 저하 프로테아좀 수준 장애 ERAD M 저하 cdc48p의 결과 고 Pcdc48의 식에 의해 복원 된 반면 cytosolic 기판 저하에 대 한 충분 한 했다. 수정 된 ERAD-M Cdc48 파트너 ufd1-2와 pCDC48 플라스 미드에 의해 npl4-1 hypomorphic 종자 및 pcdc48 10 플라스 미드에 의해 cdc48 10 셀 Pssz1도 pcdc48-10 ERAD-L CPY * 복원 찾는 함께-하, Ssz1p 억제 효과 upregulating cdc48p에 의해 초래 된 우리의 결론을 지원 합니다.
Xanthomonas Campestris의 식 태양광 발전. 효 모에 Vesicatoria 유형 III 이펙터 세포 성장 및 생존에 영향을 줍니다
그람 음성 박테리아 Xanthomonas campestris pv. vesicatoria는 토마토와 후추에 자리 질병의 인과 대리인. X. campestris pv입니다. vesicatoria pathogenicity 호스트 셀으로 effector 단백질 제공 유형 III 분 비 시스템에 따라 달라 집니다. 우리는 가설 일부 X. campestris pv. vesicatoria 이펙터 대상 진 핵 세포 프로세스를 보존 하 고 검사 하는 그들의 식 효 모에 의해 유도 된 고기. 21 이펙터 테스트, 중 14 정상에서 효 모 성장 또는 스트레스 조건 저해. 생존 능력 분석 결과 공개는 XopB 및 XopF2 감쇠 셀 확산, AvrRxo1, XopX, 및 XopE1 cytotoxic 했다 동안. 형태학 기능 점검 및 효 모 세포의 DNA 콘텐츠 표시 Xopx와 Avrrxo1에 의해 발생 하는 세포 독성 세포 주기 체포 G0/1에 관련 되었다. 흥미롭게도, XopB, XopE1, XopF2, XopX, 및 AvrRxo1 효 모에는 성장을 저해 하는 또한 고기, chlorosis 및 세포 죽음과 같은 때 발생 호스트 또는 nonhost 식물으로 표현. 마지막으로, 효 모와 식물에서 고기를 여러 이펙터의 능력 상 촉매 잔류물 또는 지역화 모티브에 의존 했다. 이 연구에서는 X. campestris pv의 기능 분석에 대 한 분리 시스템으로 효를 사용 하 여. vesicatoria는 III 이펙터를 입력 하 고 그들의 진 핵 분자 표적 식별 및 행동의 모드를 위한 무대를 설정 합니다.
간단한 효 모 기반 전략 세균 Effector 단백질의 대상 호스트 세포 프로세스를 확인 하
유형 III 분 비 시스템을 통해 호스트 셀으로 배달 세균성 effector 단백질 병원 체의 혜택을 다양 한 호스트 세포 프로세스를 변조 하 여 그람 음성 박테리아 pathogenicity에서 핵심적인 역할을 담당할. 세균성 이펙터의 대상 세포 프로세스를 식별, 단일 96-잘 플레이트에 장착 하는 효 모 삭제 종자의 배열을 사용 하는 간단한 전략을 개발. 배열이입니다 독특한 삭제 종자의 작은 숫자에도 불구 하 고 효 모 합성 치명적인 상호 작용 네트워크에 유전자의 대다수 포함 되도록 계산 최적화 되었다. 배열에서 삭제 변종 세균 이펙터 관심의 표현에 대 한 과민 증에 대 한 상영 됩니다. 과민 삭제 변종 세균 이펙터의 잠재적인 대상을 식별 하 합성 치명적인 상호 작용을 그들의 다음 분석 됩니다. 우리는이 방법을 사용 하 여 식별, 설명, 세포질 프로세스는 Xanthomonas의 대상의 campestris III 이펙터 Xope2를 입력 합니다. 흥미롭게도, 우리는 Xope2에 효 모 세포 벽 그리고 endoplasmic 그물 스트레스 반응에 영향을 발견. 일반적으로, 단일 96-잘 플레이트의 사용 하면 심사 과정 모든 실험실에 액세스할 수와 시간의 짧은 기간에 많은 세균성 이펙터의 분석을 용이 하 게. 따라서 기능 및 세균 이펙터와 기타 독성 단백질의 세포 대상 공부를 위한 유망한 플랫폼을 제공 합니다.
Sensitizing 식물 단백질 Kinases ATP 경쟁력 있는 분자에 의해 특정 저해 하
단백질 키 니 아 제 촉매 도메인의 높은 보존 자연과 식물 세포 막의 낮은 침투성 대상으로 개별 단백질 kinases vivo에서 특정 억제제 개발에 도전 포즈. 여기, 우리는 구체적으로 개별 공장 kinases 야생-타입 kinases 억제 하지 않는 세포 투과성 작은 분자를 감광 화학 유전자 접근 설명. 이 방식에서는 단일 아미노 산 대체 경쟁 ATP 분자의 특정 바인딩을 사용 하는 효소의 ATP 바인딩 사이트에 도입 되었습니다. 구체적으로 니 야생-타입 형태를 표현 하지 않는 유전자 변형 Arabidopsis thaliana 식물에서 민감하게 대립 유전자를 대상 세포 투과성 분자 사용할 수 있습니다. 이 전략을 그들이 관여 하는 신호 통로 해 부 planta에 단백질 kinases의 기능적 특성 분석을 위한 유용한 도구를 제공 합니다.
