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Articles by Haitang Li in JoVE
JoVE Immunology and Infection
siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발
1Department of Molecular and Cellular Biology, Beckman Research Institute of City of Hope, 2Graduate School of Biological Sciences, Beckman Research Institute of City of Hope, 3Shared Resource-DNA/RNA Peptide, Beckman Research Institute of City of Hope
nanomole 친화력과 HIV - 1Ba - L gp120에 대한 몇 가지 2' - 플루오로 RNA의 aptamers는 RNA 라이브러리에서에 의해 고립 아르
Other articles by Haitang Li on PubMed
인간의 세포에 있는 에이즈-1 레 브 성적 증명서에 대 한 대상으로 작은 방해 Rnas의 표현
RNA 간섭 (RNAi) 동물 및 식물 더블-좌초 (ds) 동종 입 막 음된 유전자는 RNA에 의해 시작 시퀀스 관련, posttranscriptional 유전자 침묵 하는 과정 이다. 이 기술은 일반적으로 사출 또는 transfection dsRNA 모델 nonvertebrate 유기 체에의 참여. 더 이상 dsRNAs 짧은로 처리 됩니다 (19 25 뉴클레오티드) RNAse III을 포함 하는 복잡 한 ribonucleotide 단백질에 의해 작은 방해 RNAs (siRNAs) 관련 nuclease (Dicer), helicase 가족 구성원, 그리고 가능 하 게는 키 니 아 제 및 RNA 종속 RNA 효소 (RdRP). 포유류 세포에서 그것은 알려져 그 dsRNA 30 쌍을 기본 또는 더 이상 특이 본질적으로 시퀀스-현상, 따라서 실험과 치료 요원으로 Rnai의 응용 프로그램을 제한 된 인터페론 응답을 실행할 수 있습니다. 그러나, 짧은 3' 돌출부와 21-뉴클레오티드 siRNAs duplexes 교양된 포유류 세포에 별로 시퀀스 Rnai을 중재할 수 있습니다. 척추 세포에서 치료 시 약으로 Sirna의 사용에 하나의 한계는, 높은 정의 된 짧은 RNAs 대상 셀-지금까지 합성, 이중 RNAs 전달 exogenously 셀을 사용 하 여 달성 위업에 전달 될 필요가. 이 보고서에서 우리는 포유류 Pol III 발기인 시스템 표현으로 인간의 세포 transfection에 따라 기능성 더블-좌초 siRNAs 설명. 에이즈-1 pNL4-3 proviral DNA와 Sirna를 생산 구조 cotransfected 293 셀의 경우 HIV 1 DNA에서 표현의 억제 최대 4 로그를 얻을 수 있었습니다.
Transfected PCR 제품에서 기능 SiRNA 식입니다
RNA 간섭 (RNAi) 이중 가닥 RNA (dsRNA) 동종 성적 증명서 postranscriptional 저하를 유도 하는 과정 이다. Rnai는 세포 transfection 또는 생 식 통해 dsRNA 노출 하 여 시작할 수 있습니다. 포유류 시스템에서 시퀀스 관련 RNAi 효과 관찰 되었습니다 21-23 기본 증명서의 식에 의해 형성 duplexes, 또는 짧은 머리 핀 Rnas의 식을 통해 가능. 여기 빠른 합성 siRNA 식 단위 및 포유류 세포에 있는 그들의 테스트에 대 한 손쉬운 PCR 기반 전략을 설명 합니다. PCR, 건설 하는 siRNA 식 구문 및 PCR 제품 Sirnas의 기능적 표현에서 발생 하는 포유류 세포에 직접 페는. 이 방법은 최적의 siRNA 대상 조합 식별 하 고 siRNA 식 포유류 세포에 멀티플렉싱 유용 하 게 증명 해야 합니다.
Pol III 발기인에서 표현 하는 작은 방해 Rnas는 유 잉 육 종 셀 라인 EWS/Fli-1 성적 증명서를 표시 하지 않습니다
EWS/Fli-1 융합 유전자 금하는 융합 단백질을 인코딩합니다. 융합은 유 잉 육 종 및 기본 neuroectodermal 종양 세포의 85%에서 발견 되는 전 t(11;22) (q24; 질문 12) 제품. 21-23 뉴클레오티드 작은 방해 RNAs (siRNAs) 유 잉 육 종 셀 라인에서 EWS/Fli-1 퓨전 대 본을 대상으로 표현 침 활용 하 여, 우리는 큰 달성 EWS/Fli-1 대 본 80% 감소 보다. 대 본 수준에서 감소 Ewing 셀 라인의 성장 저해 동행 했다. 퓨전 대 본의 감소 quantitating 이외에 우리는 신중 하 게는 생 EWS와 Fli 1 mRNAs 뿐만의 감소 모니터링. 하나 두 siRNAs 대상으로 퓨전 대 본도 부분적으로 downregulated 추가 성장 저해 potentiating Fli 1 mRNA. 이러한 결과 Sirnas의 파워와 신중 하 게 모니터링 하는 데 필요한 잠재적인 측면 반응을 강조 표시 합니다. 또한, 이러한 결과 금하는 퓨전 대 본 표현된 siRNAs downregulating의 첫 번째 데모를 제공합니다. 결과 및 이러한 연구에서 관측 sarcomas 및 erythroleukemias의 다른 퓨전 성적 특성을 대상으로 하는 데 유용 증명 해야 합니다.
RNAi-HLA MRNAs 대상의 확대입니다
Posttranscriptional 억제 유전자 발현의 순서 특정 작은 간섭 (si) RNA duplexes의 소개와 짧은 시퀀스 관련 더블-좌초 Rnas의 드 노 보 세포내 합성에 의해 얻을 수 있습니다. 그러나, 최저의 원하는 수준의 달성 성공적인 분석 및 치료 적 응용 프로그램 장벽입니다. 도입된 된 짧은 헤어핀 RNA (shRNA)의 증가 식 현저 하 게 RNA 간섭 (RNAi)을 향상 시킬 수 있으며이 방법을 최적의 siRNA 바인딩 사이트의 선택은 제한 또는 때 여러 유전자가 동시에 대상으로 하 고 Sirna의 양을 제한 하 고 최대한 대상 다운 레 귤 레이 션, 달성 하기 위해 사용할 수 있습니다 보여 줍니다. 복용량-의존 RNAi 효과 DNA 벡터에 연동에서 shRNA Pol III의 U6 작은 핵 RNA 발기인의 통제의 복사본을 배치 하 여 달성 되었다. 이 시스템을 사용 하 여, 우리 고전 인간의 식의 동시 다운 규제 달성 백혈구 항 원 (HLA) 클래스 I 유전자 교양 및 기본 인간 T 세포에서 immunogenic 및 HLA 이질적인 allografts의 T 세포 중재 거부를 우회 하는 데 적용 될 수 있습니다.
HeLa 세포에서 RASSF1A 유전자 프로모터의 짧은 헤어핀 RNA 감독 시 (포장 소비재) 메 틸 화
메 틸 화 CpG 모티브에 cytosines의 포유류 세포에서 유전자 발현의 epigenetic 규제에 대 한 중요 한 메커니즘입니다. 암, 특히에 포유류 세포에 드 노 보 메 틸 화에 대 한 시작 이벤트 알 수 있다. 식물, 짧은 RNAs DNA 시퀀스를 동종 드 노 보 메 틸 화를 시작으로 알려져 있습니다. 짧은 머리 핀 RNAs (shRNAs) 인간의 세포에 드 노 보 메 틸 화에 대 한 초기자도도 사용할 수 있습니다 여부를 조사 하기 위해 우리는 짧은 머리 핀 Rnas를 발기인 등 초기 베낀된 영역 인간의 RASSF1A 유전자의 CpG 섬에 무료를 표현 했다. 헬러, 등 어떤 인간의 세포 라인 rassf1a는 unmethylated 및 transcriptionally 활성 RASSF1A 인간 암의 다양 한 hypermethylated은 상 종양 억제기를 인코딩합니다. ShRNAs RASSF1A 발기인 또는 초기 베낀된 지역에 무료 드 노 보 DNA 메 틸 화 및 부분 유전자 침묵 HeLa 세포에서 낮은 수준의 직접 수 보여 줍니다. 대조적으로, 대상으로 4 개의 중앙 불일치를 은닉 한 shRNA 이러한 메 틸 화를 직접 수 없습니다. 제시 결과 암 세포에서 DNA 메 틸 화를 통해 transcriptional 유전자 침묵에 대 한 도발적인 잠재적인 메커니즘을 제안 합니다.
인간의 조상 세포 CD34 + Shrnas의 안정적인 식 SiRNAs 체 외 인터페론 응답의 유도 피할 수 있습니다
RNA 간섭 발생 세포질 작은 방해 RNAs (siRNAs) 입력 RNA 유도 2 Argonaute 단백질에 의해 대상 RNA의 분열을 가이드 입을 복잡 하 고 한 가닥. Sirnas를 적용 하거나 표현 하는 작은 머리 핀 RNAs (shRNAs) 인간의 세포에는 인터페론 (IFN) 응답의 활성화 때 중요 한 관심사 특정 주제를 품고 합성 siRNAs 수지상 세포 (mDCs) 마우스 및 말 초 혈액 단 세포, monocytes, plasmacytoid 수지상 세포 (pDCs)와 nonplasmacytoid 등 인간의 면역 세포에 전달 하는 경우 면역 반응을 일으킬 수 있다. 현재의 연구에 기본 CD34 + 시 조 유래 조 혈 세포에 Pol III 발기인 표현 shRNAs 대 지질 배달 Sirnas의 immunostimulatory 효과 테스트 했습니다. 우리는이 시스템에서 지질 전달 siRNAs Ifnalpha의 강력한 inducers는 입력 나 IFN 유전자 발현, 동일한 시퀀스 endogenously 표현 하는 반면 nonimmunostimulatory는 보여줍니다.
RNAi Ribozyme 및 조 혈 세포 유전자 치료에 HIV 감염의 치료를 위해 타르 미끼와 함께
조합 요법 HIV 감염 치료에 대 한 항 바이러스 약물 조합을 쉽게 사용할 수 있습니다 개발 된 국가에서 에이즈 유행 병의 코스를 변경 했습니다. 이 진행에도 불구 하 고 독성 및 바이러스 성 돌연변이 약물 내성의 출현 등 에이즈에 대 한 화학 요법과 관련 된 많은 문제가 있습니다. 우리의 목표는 HIV 감염에 대 한 조 혈 유전자 치료 치료의 개발 이었습니다. 화학 요법, 처럼 combinatorially HIV 감염의 치료를 위해 유전자 치료를 사용 해야 합니다. 우리는 따라서 단일 lentiviral 벡터 백본으로 HIV 감염의 치료에 대 한 세 가지 다른 억제 유전자 결합. 금지 에이전트 RNAi HIV 문신/회전 mRNAs, 바인딩하고 HIV Tat 단백질 sequesters는 nucleolar 로컬라이제이션 미끼와 고대의 ribozyme downregulates CCR5 chemokine 수용 체 세포 항목에 대 한 HIV에 의해 사용 타겟팅 짧은 헤어핀 RNA 통해 참여. 이 트리플 조합과 HIV 복제 기본 조 혈 세포의 억제를 위한 매우 효과적인 것으로 입증 되었습니다 현재 인간의 임상 응용 프로그램에 대 한 트랙 이다.
작은 방해 Rnas의 조합 배달 선택 없이 RISC에 의해 RNAi 효능을 줄일 수 있습니다
Rnai의 중대 한 잠재력에도 불구 하 고 소성 shRNA 또는 Sirnas의 식이 따라서 일부 세포 Micrornas의 규정 하는 기능을 바꾸는 중요 한 RNAi 구성 요소에 대 한 경쟁의 고유한 위험. 또한, 특정 siRNA 시퀀스 조합 방법에서 사용 하는 경우 다른 Sirnas의 설립을 방해 잠재적으로 수 있습니다. 우리는 합성 siRNAs 및 표현된 shRNAs 서로 경쟁 하 고 생 microRNAs 전송 및 RNA에 결합 된 복잡 한 (RISC) 입을 유도 보여. 동일한 siRNA 시퀀스 경쟁 microRNA 중추에서 표현 하는 경우 표시 되지 않습니다. 우리는 또한 타르 RNA 의무적인 단백질 (TRBP) 선택과 방해 Rnas의 가이드 시퀀스의 센서 중 하나입니다 보여줍니다. 이러한 연구 결과 공개 조합 siRNA 접근 문제가 될 수 있습니다 및 표현과 치료 방해 Rnas의 사용의 방법론에 대 한 중요 한 의미를가지고 있습니다.
복제 하 고 서명 MicroRNAs 포유류 세포에서 감지 합니다
MicroRNAs (miRNAs) 타겟된 유전자의 긴 noncoding 규제 작은 RNAs 기본 3' 맞이 지역 (3'UTR)에서 상호 보완적인 시퀀스에 연결을 통해 대상 유전자 발현을 침묵 수 있는 대해 19-를 24-뉴클레오티드는. 그들은 보존 evolutionally 및 embryogenesis, 세포 분화 및 증식에 중요 한 규제 역할을 합니다. 그들은 또한 pathogenesis 및 일부 인간 질병의 진행에 관여 합니다. 약 1000 인간의 miRNAs 오늘, 예측 이며 모든 인간의 성적 증명서의 약 30%를 대상 수 추정 된다. 프로 파일링 실험 셀에 표현 된 miRNAs 다른 셀 익스프레스 다른 서명 miRNAs 또는 익스프레스 다른 수준에서 같은 miRNAs 중요 한 문제가 되었다. 작은 RNA 복제 그 조직 또는 세포 관련 서명 Mirnas의 특성을 신뢰할 수 있는 방법입니다. 이 장에서 상대적으로 nonlaborious polyadenylation 중재 보완 DNA를 (cDNA) 복제 관심의 셀에 표시 되는 작은 Rnas의 대부분을 식별 하는 방법에 설명 합니다. MiRNAs/작은 방해 RNAs (siRNAs) 뿐만 아니라 새로운 miRNAs/Sirnas를 식별에 관해서는 bioinformatic 예측을 확인 하려면이 절차를 사용할 수도 있습니다.
여러 Sirnas의 세대에 대 한 머리 핀 오래 항 Hiv-1 Rnas의 표현: 장점 및 제한 사항
발기인 표현 긴 머리 핀 RNAs (lhRNAs) 여러 작은 간섭 RNA (siRNAs)으로 처리할 수 있는 빠른 속도로 돌연변이 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV)와 같은 바이러스 치료를 위한 효과적인 에이전트로 간주 되고있다. 현재의 연구에서 에이즈-1의 유전자를 레 브와 셀에서의 처리로이 Lhrnas의 효능 평가 인간의 U6 모터 구동 lhRNAs 50, 53, 80 자료 쌍 (bp)의 문신 내에서 연속 된 시퀀스를 대상으로 생성 한 우리. 줄기에 여러 개의 G:U 불일치를 사용 하 여 우리 lentiviral 벡터 변환 시스템으로 긴 머리 핀 구조를 쉽게 통합할 수 있다. 여기 우리는 같은 긴 헤어핀 안정적으로 그리고 기능적으로 표현할 수 긴 기간에 대 한 그들은 h i V-1의 비 돌연변이 돌연변이 변종 으로부터 HIV 복제의 강력한 저해를 제공 에이즈-1 감염 T 셀에 표시 합니다. 우리의 연구는 G:U 사용 하 여 단일 자막에서 여러 Sirnas를 생성 하는 Lhrnas를 포함 하는 쌍 동요 하지만 우리 또한 그 lhRNAs 80의 표시에 대 한 강력한 지원을 제공 혈압 효과적으로 여러 생산의 위쪽 크기 제한 될 수 있습니다 기능 siRNAs.
포함 한 U16 SnoRNA-하의 사용 Ribozyme 대상 V-1에 식별 하기 위해 Ribozyme 라이브러리
귀상어 ribozymes 인간 면역 결핍 바이러스 1 (hiv-1) 유전자 발현을 침묵 바이러스 Mrna의 사이트별 분열에 의해 표시 되었습니다. Ribozymes post-transcriptional 유전자 침묵에 대 한 적용 됩니다 여부를 결정 하는 두 가지 주요 요소는 ribozyme 대상 Rnas의 colocalization 및 적절 한 대상 사이트는 Mrna에 선택 됩니다. 바이러스 성 게놈에 잠재적인 공격 대상에 대 한 효과적인 차단 전략은 세포 배양에서 ribozyme 라이브러리 사용 합니다. 에이즈-1 및 ribozymes는 핵소체에서 colocalized 수 있습니다, 우리가 완전히 무작위 줄기 1와 2와 귀상어 ribozymes U16 작은 nucleolar RNA (snoRNA)의 본문에 삽입 하 여 만든 소설 귀상어 ribozyme 라이브러리 이전 연구 결과에 대문자로. Cotransfection V 1과의 3 라운드 proviral DNA 헤 르 페 스의 단순 바이러스 티 미 딘 키 니 아 제 (HSV-TK) 유전자를 품고 우리 gancyclovir 방지 셀 선택를 잠재적으로 이러한 목표와 에이즈-1 영역 부분 homologies 통해 HIV 1 게놈의 u5와 개 그 유전자를 대상 수 ribozyme 시퀀스를 식별. Ribozymes를 대상으로 전체 complementarity 변환 했다, 그들은 세포 배양에서 hiv-1 복제의 강력한 저해 제공. 이 결과 ribozyme 대상 V-1에 식별 하기 위한 새로운 접근 방식을 제공 합니다.
Hiv-1 치료를 위한 새로운 듀얼 억제 기능 Aptamer SiRNA 전달 시스템
치료 목적을 위해 작은 방해 RNAs (siRNAs)의 성공적인 사용 특정 세포와 조직에 안전 하 고 효율적인 배달을 해야 합니다. 이 연구에서는 셀 유형별 배달을 안티 gp120 aptamer 퓨전을 통해 안티 면역 결핍 바이러스 (anti-HIV) Sirnas의 보여 줍니다. 봉투 당단백질은 허용 바인딩 및 aptamer Sirna의 국제화 chimeric 분자 에이즈-1 감염 된 세포의 표면에 표시 됩니다. 우리는 안티 gp120 aptamer siRNA 키메라 셀 HIV 1 gp120, 그리고 추가 된 siRNA Dicer;에 의해 처리 되는 표현에 의해 촬영 구체적으로 입증 이, 차례로, HIV 복제를 억제 하는 tat/회전 Sirna를 해제 합니다. 우리 모두에서 고 aptamer와 siRNA 부분가지고 강력한 anti-HIV 활동 듀얼 기능 aptamer siRNA 키메라를 처음으로 보여줍니다. 우리는 또한 에이즈에 감염 된 세포의 표면에는 gp120 anti-HIV Sirnas의 배달 aptamer 중재에 사용할 수 보여줍니다.
기능 및 세포내 지역화 속성의 U6 발기인 표현 SiRNAs, ShRNAs, 그리고 포유류 세포에 Chimeric VA1 ShRNAs
Rna 중 합 효소 (Pol III) 세 식 시스템을 위한 짧은 머리 핀 RNAs (U6 shRNAs 또는 chimeric VA1 shRNAs) 또는 개별적으로 표현된 감각/antisense 작은 간섭 RNA (siRNA) 가닥 포유류 세포에 있는 RNA 간섭 (RNAi)를 실행 하는 데 사용 되었습니다. 여기에 우리가 개별적으로 표현된 siRNA 식 강력 하 게 인간 세포의 핵으로 이중 siRNAs 누적 생산 21 뉴클레오티드 siRNAs 구문을 표시, 전조 U6 또는 머리 핀 VA1 표현에서 파생 된 힘쓰고 시퀀스 관련 silencing 활동 세포질 siRNAs 비슷합니다. 반면, 29-메 르 siRNAs 별도로 감각/antisense 가닥으로 표현 핵에서 이러한 Rnas의 축적에도 불구 하 고 RNAi 활동 유도 되지 않습니다. 우리의 연구 결과 세 식 전략에 대 한 다른 세포내 축적 패턴의 윤곽을 그리 다 및 21 메 르 duplexes 필요한 핵 RNAi 통로의 가능성을 제안 합니다.
선택, 특성화 및 HIV에 Dicer 기판 Sirnas의 손쉬운 배포에 대 한 새로운 RNA HIV Gp 120 Aptamers 적용 세포를 감염
인간 면역 결핍 바이러스 (HIV)의 봉투 당단백질 외부 당단백질 (gp120)와 횡단 막 도메인 (gp41) 구성 되어 있으며 세포에 바이러스 성 항목에서 중요 한 역할이. 에이즈-1 항목 약물 발견에 대 한 임상 관련 안티 바이러스 전략 검증 된. 현재 작업에서 몇 가지 2'-F 대신 RNA aptamers HIV-1(BaL) gp120 단백질 nanomole 선호도 바인딩하는 고립 되었다 RNA 라이브러리에서 SELEX (체계적인 진화의 Ligands 지 수 농축 하 여) 절차에 의해. 2 이러한 aptamers 안티 gp120 aptamer siRNA 키메라 일련의 새로운 듀얼 억제 기능을 만들었습니다. Aptamers 및 aptamer siRNA 키메라 특별히에 바인딩하고 셀 HIV gp160 표현으로 내 면 됩니다. Aptamers에 의해 전달 Dicer 기판 siRNA Dicer, hiv-1 복제 및 infectivity 교양된 CEM T-세포와 기본 혈액 단 세포 (PBMCs)의 특정 저해에 따른 기능적으로 처리 됩니다. 또한, 우리는 잠재적인 다중화 Dicer 기판 Sirnas의 부착을 용이 하 게 하는 화학적으로 합성 된 aptamer에 '끈 적' 시퀀스를 도입 했습니다. 우리의 결과 HIV 복제를 차단 하기 위한 소설 금지 에이전트 집합을 제공 하 고 더욱 Dicer 기판 Sirnas의 배달에 대 한 aptamers의 사용을 확인.
인간의 MiRNA 유전자에 Snp 속 및 기능에 영향을 줍니다
MicroRNAs (miRNAs)는 25 21 뉴클레오티드 긴 noncoding RNAs 변환 규제에 관련 된. 2 단계 순차 처리에서 파생 되는 대부분의 miRNAs: Drosha/DGCR8 핵에 의해 pri-미르에서 pre-Mirna의 생성 및 pre-miRNAs Dicer/TRBP 복잡 한 세포질에 의해에서 성숙한 Mirnas의 생성. 처리 사이트 주위에 유사 시퀀스 및 성숙한 미르, 특히 씨앗 시퀀스에에서 시퀀스 유사 miRNA 속 및 기능에 심대한 영향 있을 수 있습니다. 정신 분열 증과 자폐증의 Mirnas의 역할 분석의 맥락에서 최소 24 인간의 X 연결 된 miRNA 변형이 되어 있습니다. 기능 분석 실험 개발 되었고 이러한 변종에 수행 합니다. 이 연구에서 우리가 성숙한 Mirnas와 그들의 기능, 세대에 단일 뉴클레오티드 polymorphisms (Snp)의 영향을 조사 하 고 Snp 수 손상 또는 miRNA 처리 향상으로 변경 처리 사이트를 자연스럽 게 발생 하는 보고. MiRNAs 작은 기능 단위 이기 때문에로 전조 요소와 성숙한 miRNA 시퀀스에서 단일 기본 변경 그들의 생물 학적 기능을 변경 하 여 새로운 Micrornas의 진화를 드라이브 수 있습니다. 마지막으로,이 연구에서 검사 하는 Mirnas는 X 연결 된 돌연변이 체 대립 질병의 병 인에 결정 될 수 있는 제안.
대상 지역 밖에 서 시퀀스 컨텍스트 RhoB 3' UTR에서에서 미르-223 대상 사이트의 효율성을 영향을 줍니다
MicroRNAs (miRNAs)는 21 ~ 22 뉴클레오티드의 3' 맞이 지역 (3'UTR) 보완 시퀀스 자료 연결을 통해 메시지 번역을 참다 규제 작은 RNAs 대상 성적 증명서. 까지, 그것은 여전히 miRNAs 효율적인 억압에 대 한 그들의 타겟된 성적 상호 기능적으로 작용 하는 방법에 대해 분명히 이해의 부족으로 인해 진정한 miRNA 대상을 찾기 어렵다. 이전 연구 뉴클레오티드 2 ~ 7의 성숙한 미르, '시드 순서', 5'-끝 미르/대상 상호 작용을 nucleate 수 있습니다 것으로 나타났습니다. 현재 연구에 우리 RhoB Mrna는 타고 난 미르-223 대상 유효성을 검사 했습니다. 우리는 RhoB 3'UTR 내의 두 miR223 바인딩 사이트의 기능적 활동을 분석 했다. 우리 두 미르-223 대상 사이트 RhoB 3' UTR에에서 차동 RhoB 번역의 총 억압에 기여를 찾을. 또한, 누구나 풍부한 모티브 일부 상류에 위치한 시연 원심 miRNA 바인딩 사이트의 miRNA 기능, 테스트 중인 미르 대상 시퀀스의 독립을 강화. 또한 누구나 풍부한 시퀀스 요소 극 이며 누구의 사이트 거짓말 이러한 요소의 업스트림 Mirnas의 활동에 영향을 미치지 않습니다 보여 줍니다. 이러한 연구 결과 miRNA 대상 지역 Mirna의 기능에 영향을 미치는 외부 시퀀스의 역할에 대 한 추가 지원을 제공 합니다.
HIV와 에이즈 Coreceptor CCR5 대상으로 하는 마이크로 RNA 같은 Bifunctional Sirnas의 합리적인 디자인
작은 방해 RNAs (siRNAs)와 마이크로 RNAs (miRNAs) 행동의 그들의 모드에 의해 구분 됩니다. SiRNAs 보완 Mrnas의 시퀀스 관련 분열에 대 한 가이드로 봉사 하 고 대상 코딩 될 수 있습니다 또는 대상 성적 증명서 noncoding 영역. MiRNAs 사본의 코딩 영역을 대상으로 3' untranslated 영역 (Utr)는 일반적으로 비 효과를 부분적으로 보완 자료 페어링를 통해 번역을 억제. 이 연구에서 우리는 고의적으로 동시에 직접 분열 및 HIV Rnas의 변환 억제 또는 인코딩 HIV coreceptor CCR5 및 HIV의 번역의 Mrna의 분열 siRNAs 설계. 이러한 bifunctional siRNAs HIV 감염과 복제 세포 배양에서의 저해를 트리거합니다. 디자인 원칙 bifunctional Sirnas의 디자인을 가능 하 게 하는 유전자 하버 사이트의 약 90%로 전체 게놈, 다양 한 응용 프로그램을가지고.
Lentiviral 벡터 수정 CD34(+) 셀 에이즈 관련 림프 종에 대 한 이식 환자에서 Hiv RNA 기반 유전자 치료
림프 종 개발 에이즈 환자가 종종 이식된 hematopoietic 조상 세포로 처리 됩니다. Hematopoietic 세포 기반 유전자 요법 치료 개발의 첫 번째 단계로, 4 명의 환자 들이 이식된 세포로 치료를 받고 또한 받았다 유전자 수정 주변 혈액 유래 (CD34(+)) hematopoietic 조상 세포 3 RNA 기반 anti-HIV moieties (문신/회전 짧은 헤어핀 RNA, 타르 미끼 및 CCR5 ribozyme)을 표현. 이러한 유전자 수정 세포의 생체 외 분석 nontransduced 셀에 비해 조 혈 가능성에 차이가 나타났다. Anti-HIV moieties의 성공적인 식의 체 외 견적 처음 22%로 높은 했지만 문화 4 주 동안 약 1%로 감소. 윤리적인 연구 디자인 성분에 의해 환자 로부터 얻은 두 유전자를 수정 하 고 unmanipulated hematopoietic 조상 세포와 환자 이식 될 필요 합니다. Transfected 세포 하루 11, 성공적으로 모든 4 명의 생긴된 환자에 engrafted 했다 그리고 전혀 예상치 못한 주입 관련 독성 했다. 여러 셀 계보에 영구 벡터 식 도입된 된 작은 간섭 RNA ribozyme 표현 했다 낮은 수준에서 최대 24 개월까지 관찰 되었다. 따라서, 우리 헌 진 수정 hematopoietic 조상 세포의 이식 후 인간의 혈액 세포에 안정적인 벡터 식을 설명 했다. 이러한 결과 hiv RNA 기반 셀 치료 플랫폼의 개발을 지원합니다.
Aptamer SiRNA 키메라 Hiv-1 바이러스 부하를 억제 하 고 도우미 CD4(+) T 세포 감소 Humanized 쥐에서에서 보호 합니다
항 바이러스 약물의 조합으로 HIV 감염을 치료 하기 위한 치료 전략 에이즈의 진행을 둔화에 대 한 가장 좋은 접근을 입증 했다. 이 진행에도 불구 하 고 바이러스 성 약물 저항 및 독성, 에이즈-1 감염 퇴치에 새로운 접근을 필요로 문제가 있다. 따라서 HIV 1 봉투 (gp120) 단백질과 바이러스 중화 속성에 높은 바인딩 선호도 RNA aptamer 연결할 및 제공 하는 작은 간섭 RNA (siRNA) 에이즈 Rnas의 시퀀스 관련 성능 저하를 유발 하는 HIV 감염 치료에 대 한 다른 조합을 접근 방식을 개발 했습니다. 우리 multilineage 인간의 조 humanized Rag2(-/-)γc(-/-) (걸 레 후) 마우스 모델에서 이러한 chimeric Rnas의 항 바이러스 활동을 시험 했다. 이 동물 모델에서 hiv-1 복제 및 CD4(+) T 셀 고갈 모방 인간의 에이즈에 감염 된 환자에서 본 상황. 우리의 결과 안티 gp120 aptamer 또는 aptamer siRNA 키메라 치료 진도 여러 명령에 의해 HIV 1 복제를 억압 하 고 바이러스 성 유도 도우미 CD4(+) T 세포 감소를 막을 수 보여 줍니다. 혼자 aptamer 비해 aptamer siRNA 조합 더 광범위 한 저해, 몇 주 동안 마지막으로 삽입 된 복용량을 넘어 확장 항 바이러스 더 이상 크게 효과 제공 합니다. Aptamer는 따라서 스펙트럼 HIV 중화 에이전트와 siRNA 배달 차량으로 역할을 합니다. 결합 된 aptamer siRNA 에이전트 HIV 감염의 치료에 대 한 매력, 비 독성 치료 접근을 제공합니다.
나노 입자를 통해 조합 Dsirnas의 체계적 관리는 효율적으로 Humanized 쥐에 있는 에이즈-1 감염을 억제합니다
우리는 rag2에 작은 간섭 RNA (siRNA) 배달 시스템으로 구조적으로 유연 하 고, 양이온 PAMAM dendrimers의 in vivo 효능 평가 (-) /-γc-/-에이즈-1 감염에 대 한 (걸 레 후) humanized 마우스 모델. HIV에 감염 된 humanized Rag2-/-γc-/-생쥐 (걸 레 후) 정 맥 주입 했다 (i.v.) dicer 기판 siRNAs (dsiRNAs) 바이러스 성 및 셀룰러 성적 대상으로 칵테일으로 이루어진 dendrimer siRNA 나노 입자와 함께. 우리가이 연구에서 보고 dendrimer dsiRNA 치료 진도 여러 명령에 의해 에이즈-1 감염을 억제 하 고 바이러스 성 유발된 CD4(+) T-셀 고갈 로부터 보호. 우리는 또한 다음과 같은 바이러스 성 리바운드 dendrimer cocktailed Dsirnas의 후속 주사 titers 에이즈-1의 완전 한 억제 귀착되 시연 했다. Biodistribution 연구는 dendrimer dsiRNAs 우선적으로 말 초 혈액 단 세포 (PBMCs)와 간장에 축적 하 고 어떤 뚜렷한 독성을 전시 하지 않는 보여 줍니다. 이러한 데이터는 에이즈-1 치료 생체 조건에 대 한 anti-host 및-바이러스 성 Sirnas의 처음 시간 효능 조합 배달에 대 한 보여 줍니다. Dendrimer 배달 접근 따라서 에이즈-1 감염의 치료를 위해 Sirnas의 조합의 조직 배달 유망한 메서드를 나타냅니다.
Interplay 에이즈-1 감염 호스트 MicroRNAs 사이
체 외 HIV 1 감염 된 CD4(+) 셀의 microRNA 배열 분석을 사용 하 여, 우리는 여러 호스트 Micrornas는 크게 업 또는 에이즈-1 감염 체 외 봉우리 무렵 downregulated 찾을. MicroRNA 223 레벨 CD4(+)CD8(-) PBMCs 에이즈-1 감염에 크게 풍성 하 게 했다, 그러나 microRNA-29a/b, microRNA-155와 microRNA 21 수준은 크게 감소 되었다. MicroRNA 바인딩 사이트는 Nef-3'-LTR 보존된 시퀀스에 대 한 잠재력을 바탕으로, 여러 호스트 microRNAs 수 미칠 HIV-1 유전자 발현. 그 microRNAs 가운데 HIV에 씨앗 complementarity는 microRNA 29 가족-1 3'-UTR, h i V-1에 microRNA 29의 잠재적인 진압 효과 하지만 심각 대상 지역의 2 차 구조에 의해 차단 되었습니다. 우리의 데이터는 microRNA 29 downregulation, Nef의 표현, 호스트 CD4 세포의 apoptosis와 microRNA-223의 upregulation 포함 하는 최대의 에이즈-1 복제 가능한 규제 회로 지원 합니다.
