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Articles by Irma Sanchez-Vargas in JoVE
JoVE Immunology and Infection
甲病毒转导系统：可视化，以免蚊虫感染的工具
Microbiology, Immunology, and Pathology, Colorado State University
使用甲病毒转导系统，以表达荧光记者在体外和成蚊的方法进行了阐述。这种技术可适应任何利益代替或除了向记者表达的蛋白质。
Other articles by Irma Sanchez-Vargas on PubMed
发展中国家虫媒病毒抵抗的蚊子。
由节肢动物传播病毒引起的疾病是日益严重的公共卫生问题和新方法，以控制病原体传播。此处所述的研究的基本假设是基因操纵的埃及伊蚊的蚊子可以深刻地、 永久地降低其职权范围，以传播登革热病毒给人类的主机。最近的关键结果现在允许我们测试的遗传控制假说。我们已确定病毒源性基因组 RNA 片段可以表示在蚊子肠和唾液腺，ablate 同源病毒复制和传播。我们已经表明 RNAs 在体外培养的蚊子细胞源性病毒效应的瞬态和遗传表达可抑制病毒复制，和有特点的 RNA 介导的抗性机制。我们现在正在抗病毒蚊子行与表达从蚊子活动宣传员效应 RNAs 的转座因子的转型。
从病毒基因组 RNA 沉默的登革热病毒 2 型转化 C6/36 蚊细胞转录倒立重复 RNA 复制派生。
双链 RNA （dsRNA） 启动集体称为 RNA 沉默在许多不同的生物，包括植物、 线虫、 果蝇的细胞转录后水平应答。在植物里，RNA 沉默已受病毒感染的保护与相关联。在此研究中，我们证明 dsRNA 介导的干扰也可以充当在蚊子细胞中的病毒防御机制。单元格 C6/36 (白纹伊蚊) 稳定被改造与设计转录所得的登革热病毒 2 型 (DEN-2） 能够形成 dsRNA 基因组倒立重复 RNA (irRNA) 的质粒。克隆细胞株是用抗生素耐药标记选择，同登 2 受到质疑。细胞系被归类易感或抗病毒复制，基于细胞表达 DEN 2 信封 (E) 抗原的挑战后的 7 天的百分比。从设计到快递 irRNA 18 (44%) 细胞系八个抗性 DEN 2 的挑战，单元格显示没有登 2 抗原积累的 95%以上。DEN 2 耐药细胞株，FB 9.1 之一是进一步的特点。DEN 2 基因组 RNA 失败后面临的挑战在 FB 9.1 细胞内积聚。北方斑点杂交技术检测到含有转基因序列的意识和反义的极性，暗示 DEN 2-特定 dsRNA 存在于单元格的成绩单。此外，一类专门杂交标记意义上的小 RNAs 21 到 25 长度中的核苷酸被检测到或登-2 反义 RNA 来自基因组的目标区域。这些意见符合 RNA 沉默作为 DEN-2 转换的蚊子细胞耐药机制。
RNA 干扰、 节肢动物传播的病毒和蚊子。
RNA 干扰 (RNAi) 可能作为大多数真核生物体内的抗病毒机制的作用。部分，在活动中蚊子这抗病毒途径的变化可以解释为什么一些蚊子是医学上的重要、 节肢动物传染病毒 (虫媒病毒） 的主管媒介和其他人不是。有证据表明 RNAi 通路传输虫媒病毒的白纹伊蚊种群中存在三个行。第一个是表示从基因无关的登革热 2 病毒 (DENV-2） 的 RNA 片段的重组辛德毕斯病毒干扰 DENV-2 复制白纹伊蚊在埃及蚊子的机制类似于病毒诱导的基因沉默在植物中所述。第二个是这转染 C6/36 (白纹伊蚊) 细胞与任一双链 RNA 或源自一种虫媒病毒基因组合成小干扰 Rna 干扰同源病毒的复制。第三是发夹 DENV-2-特定 RNA 转录从质粒可以生成单元格 C6/36 抗病毒。我们推测可以生成转基因的蚊子的转录黄病毒特定 dsRNA，触发 RNAi 反应的血粉消化后不久。这可以诱使 RNAi 通路中肠病毒感染的建立之前，深刻地改变矢量能力。为实现这一目标，我们正在开发通过利用 RNAi 通路是 DENV 对难治性的转基因 A.埃及行。
RNA 干扰技术作为天然抗病毒响应 O'nyong Nyong 病毒 (甲 ；披） 感染的冈比亚疟蚊。
RNA 干扰 (RNAi) 触发在真核生物的双链 RNA （dsRNA），并可能会破坏任何具有序列标识与 dsRNA 触发器的 mRNA。在冈比亚疟蚊 RNAi 通路可以保持沉默染细胞与外显子序列的 A.冈比亚 Argonaute2 (AgAgo2) 从派生的 dsRNA 基因。我们假设: RNAi 也可能作为拮抗剂对甲复制在 A.冈比亚由于 RNA 病毒在复制期间形成 dsRNA。沉默 AgAgo2 表达式将使 A.冈比亚蚊子更宽容受病毒感染。若要确定是否 RNAi 条件 A.冈比亚 O'nyong nyong 病毒 (ONNV) 的矢量职权，我们制造出转基因的 ONNV 表示增强型绿色荧光蛋白 (eGFP) 作为标记。胸腔内注射后 ONNV 与绿色荧光蛋白慢慢扩散至其他 A.冈比亚组织在为期 9 天的潜伏期。蚊子然后被病毒和控制 β-半乳糖苷酶 dsRNA (dsbetagal ； 注"ds"用于一个前缀，以指示从给定的基因在整个派生的 dsRNA) 或 ONNV dsnsP3 与 coinjected。DsnsP3 治疗抑制病毒蔓延显著，所确定的绿色荧光蛋白的表达模式。从蚊子 coinjected 与 dsnsP3 ONNV 与绿色荧光蛋白效价低得比蚊子 coinjected 与 dsbetagal 在注射后 3 和 6 天。蚊子是然后 coinjected 与 ONNV 与绿色荧光蛋白和 dsAgAgo2。Coinjected 病毒与 AgAgo2 dsRNA 的蚊子后 3 天或 6 天注射后显示广泛的绿色荧光蛋白表达和病毒效价数量高于 dsbetagal 控件。这些意见提供了直接证据 RNAi 在 A.冈比亚，是拮抗剂 ONNV 复制，他们建议的非特异性免疫反应条件矢量能力。
工程 RNA 干扰根据抗登革热病毒转基因埃及伊蚊中键入 2。
蚊子 (埃及伊蚊) 这些转基因展出受损的矢量能力为登革 2 型病毒 (DENV-2）。我们通过构建一个表示编码区的 DENV 2 RNA 基因组的 premembrane 蛋白来自倒立重复 (IR) RNA 的效应基因利用天然抗病毒 RNA 干扰 (RNAi) 通路蚊中肠。A.埃及羧肽酶 A 启动子用来表达 bloodmeal 消化后的 IR RNA 中肠上皮细胞。启动子和效应器基因插入到绿绣眼，波多黎各 Rexville D (希格斯玻色子的白眼球） 菌株的基因组通过使用非自治水手钼转化体系。转基因的家庭，Carb77，bloodmeal 后中肠表示红外 RNA。摄入含 DENV-2 人工 bloodmeal Carb77 蚊子展出在肠和涎腺病毒性信封抗原在感染后的显著的下降。DENV-2 滴定法个别蚊子显示大多数 Carb77 蚊子很差支持病毒复制。从 Carb77 行病毒体外传染是大大减弱时相比，控制蚊子。从 Carb77 肠提取 RNA 在 DENV-2 派生的 siRNAs 的存在和耐药表型的 RNAi 途径被中断时的损失证明 DENV-2 耐药由 RNAi 反应引起。显示高水平的 DENV 2 抵抗的转基因 A.埃及工程提供了有力的工具，为发展中国家人口替代策略以控制登革热病毒传播。
登革病毒类型 2： 复制和取向在口头感染埃及伊蚊的蚊子。
要通过其蚊传播，登革病毒 (DENV) 必须感染肠上皮细胞、 复制和传播到体腔，和最后感染唾液腺，是重要的传播。外在潜伏期 (EIP) 流行病学是非常有意义，直到它可以传输到下一个脊椎动物主机从病毒的摄取所需的时间。EIP 被受到制约的动力学和取向及其载体病毒复制。在这里我们以更好地理解对登革热传播载体病毒相互作用的影响文档中新殖民统治埃及蚊从切图马尔，墨西哥的 DENV-2 virogenesis。
La 带锁 Bunyavirus 非结构性蛋白 NSs 用来压制类型我干扰素的哺乳动物的主机系统。
La 带锁病毒 (LACV) 是蚊子传播严重脑炎导致儿童的 Bunyaviridae 家庭的成员。LACV 非结构性蛋白 NSs，以前与哺乳动物细胞的表达研究曾建议两个不同的功能，即诱导细胞凋亡和 RNA 干扰 (RNAi) 的抑制作用。在这里，我们表现出持续感染 LACV 蚊细胞不经过细胞凋亡并装入特定的 RNAi 反应。快递 (rLACV) 或同样缺乏 (rLACVdelNSs) NSs 基因的重组病毒依然存在，容易出现二重感染 RNAi 介导抗性。此外，在蚊子细胞外源的 LACV NSs 无法抑制 RNAi 抗 Semliki 森林病毒。在哺乳动物细胞，然而，rLACVdelNSs 突变病毒强烈激活抗病毒 ⅰ 型干扰素 （干扰素） 系统，而 rLACV 作为外源的 NSs 抑制干扰素诱导。因此，rLACVdelNSs 衰减干扰素主管小鼠胚胎成纤维细胞和动物中但不是在缺乏类型的系统我干扰素受体。老鼠的大脑的原位分析表明野生型和突变体 LACV 主要感染神经细胞的细胞，并且能够抑制中枢神经系统中的干扰素诱导 NSs。因此，我们的数据表明小相关性的 NSs 诱导凋亡或增长的 RNAi 抑制或 LACV 哺乳动物宿主中的发病并说明 NSs 昆虫向量中已无功能。由于病毒性 NSs 基因可以完全辅灭活的宿主的干扰素系统，我们建议 NSs 的主要生物学功能是哺乳动物的非特异性免疫反应的抑制。
登革病毒 2 型感染的埃及伊蚊被调制而成蚊的 RNA 干扰途径。
大量的研究表明固有的、 自适应免疫防御机制极大地影响人类登革病毒 (DENV) 感染，当然，但了解甚少的蚊媒的非特异性免疫反应埃及伊蚊对虫媒病毒感染。我们提出证据在这里蚊子非特异性免疫反应，RNA 干扰 (RNAi) 的主要组成部分是蚊子感染重要调制器。RNAi 反应时触发双链 RNA (dsRNA) 发生细胞质中，由于积极意义 RNA 病毒感染导致的小分子干扰 Rna (siRNAs) 的生产。这些 siRNAs 的降解病毒 mRNA 序列同源性为 dsRNA 触发，从而有助于抑制病毒复制的作用。我们可以发现，尽管登革病毒感染 2 型 (DENV2) 的 Ae。但细胞和口腔感染的成人蚊子生成 dsRNA 和 DENV2 特定 siRNAs、 病毒复制、 传染性病毒释放生产持续存在，表明 RNAi 病毒性规避。我们还显示 DENV2 不完全回避 RNAi，自损通路沉默重要传感器和效应蛋白的 RNAi 途径，增加在向量中的病毒复制而减少外在潜伏期的病毒传播所需的编码的 dcr2、 r2d2 或 ago2，基因的表达。我们的研究结果说明了主要的作用 RNAi 作为由 Ae DENV 传输的一个决定因素。埃及。
Sialotranscriptome 西尼罗河蚊、 库蚊上睑板的深入了解。
唾液的成年雌性的蚊子帮助糖和血液通过提供酶和多肽，帮助消化糖、 饲喂控制微生物生长和抵制他们的脊椎动物宿主止血和炎症。蚊子唾液也增强病媒传染病原体，包括虫媒病毒的传播。上睑板库蚊是一只鸟喂养 C.倦，蚊子较密切相关的西尼罗河病毒蚊子最近改编养活人类，并只蚊子的库蚊属有其迄今所述的 sialotranscriptome 上。
RNA 干扰途径影响肠感染-和辛德毕斯病毒的埃及伊蚊的转义壁垒。
RNA 干扰 (RNAi) 通路作为非特异性抗病毒免疫反应的埃及伊蚊，调制虫媒病毒感染的蚊子。辛德毕斯病毒 (SINV ； 家庭： 披，属： 甲) 是虫媒病毒，感染 Ae。在实验室中的埃及。SINV 应变 TR339 在 Ae 的感染过程中遇到中肠转义屏障 （体格）。埃及。这种障碍的性质不是很了解。若要调查作为中央机关虫媒病毒载体确定职权范围中肠的作用，我们在 bloodfed 女性中肠组织中生成 RNAi 通路受损的转基因蚊子。我们用这些蚊子来揭示对 SINV 复制、 肠感染和传播效率和蚊子长寿 RNAi 肠功能障碍的影响。
东树孔蚊子，Ochlerotatus Triseriatus 的唾液腺转录过程。
吸血节肢动物的唾液中含有的复杂混合体影响其主机止血、 炎症、 和免疫功能的多肽。这些活动还可以修改网站的病原交付并增加传染疾病。唾液也诱使主机能够装入 antisaliva 的免疫反应，可能会导致皮肤过敏或甚至过敏反应。因此，有用来提供一个知识平台，挖掘出新颖的药理活性，开发新型疫苗目标为媒介传播的疾病，并制订流行病学标志物矢量暴露和候选人脱敏疫苗的唾液汇辑 》 或 sialome，一只蚊子的知识。Ochlerotatus triseriatus 蚊子是病毒载体的 La 带锁，并产生过敏的人类。在这项工作，总共有 1,575 克隆从成人女性 O.triseriatus 涎腺 cDNA 文库中随机选择的是排序，然后用来组装一个数据库，产生了 731 群集相关的序列，其中 560 是单身人士。底漆扩展实验进行中选定克隆序列范围，允许识别的 159 蛋白质序列，进一步扩展至 66 哪个代码假定分泌蛋白。补充电子表格包含这些数据都在 http://exon.niaid.nih.gov/transcriptome/Ochlerotatus_triseriatus/S1/Ot-S1.xls 和 http://exon.niaid。nih.gov/transcriptome/Ochlerotatus_triseriatus/S2/Ot-S2.xls。
