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Articles by Jean-Simon Diallo in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
腫瘍溶解性ウイルスと生きている組織のex vivoでの感染
Center for Innovative Cancer Research, Ottawa Hospital Research Institute (OHRI)
腫瘍溶解性ウイルスは、癌の治療薬として期待されています。治療前に患者から得られた生体組織標本の感染力を把握する能力は、この治療的アプローチのユニークな利点です。このプロトコルは、のための組織を処理する方法について説明します。
Other articles by Jean-Simon Diallo on PubMed
式と前立腺癌における ErbB3 の核局在。
ErbB1 と ErbB2 受容体は前立腺癌の進行に関与しているが、以下の役割と他 ErbB 受容体の家族前立腺癌の生物学について知られています。式および前立腺組織と前立腺癌細胞株における ErbB3 の局在を分析した.
PC3/PC3(AR) 前立腺癌細胞株におけるイノシトール Hexakisphosphate 毒性からアンドロゲン依存アンドロゲン受容体の機能を保護します。
イノシトール hexakisphosphate (IP6) 植物化学出展抗癌活性です。前立腺がん （PCa） セル数行 IP6 を研究に使用されているので、我々 PCa セルラインのパネルにその効果を評価しました。
アンドロゲン受容体および前立腺癌の核要因 KappaB 転写因子による IkappaB キナーゼ イプシロン発現制御。
複数の遺伝子が前立腺癌の進行と関連付けられているが、我々 は、開始とホルモン不応性状態に病気の進行に関与する分子のイベントの理解から遠くあることは明らかです。アンドロゲン受容体は中央の選手は、開始と前立腺癌とホルモン療法への応答の増殖です。核要因 kappaB 開発と治療への抵抗と同様にがん細胞の進行に貢献できる重要な増殖性と抗活動をしています。本研究では、我々 ひと軟骨細胞の核要因 kappaB を制御する、その IkappaB キナーゼ イプシロン (IKKepsilon) 報告表されますひと前立腺癌細胞で。IKKepsilon 遺伝子発現 LNCaP 細胞における腫瘍壊死因子-α 治療によって刺激され、p65 の核移行を防ぎます IkappaBalpha のドミナント ネガティブ形のトランスフェクションによって阻害されることを示します。また、アンドロゲン感受性膵臓がん細胞におけるアンドロゲン アナログ (R1881) による腫瘍壊死因子 α 誘発 IKKepsilon 式を抑制し、この阻害による IkappaBalpha 発現 R1881 の変調と相関することを発見しました。また、我々 はアンドロゲン依存 PC 3 と DU145 細胞における IKKepsilon 発現記載。我々 の知識にこれはその式のアンドロゲンによって変調し、アンドロゲン受容体陰性細胞の規制緩和、IkappaB キナーゼ家族メンバーの最初の報告です。
NF KappaB2 処理と P52 の核蓄積 LNCaP 前立腺癌細胞のアンドロゲン刺激後は。
いくつかのレポートは、アンドロゲン シグナル伝達とアンドロゲン感受性細胞における正規関連 p50 活動を妨げるとお勧めします。非正規の NF-κ b サブユニットとにも発生するかどうかは検討されていません。ここではアンドロゲン アナログと LNCaP 細胞のアンドロゲン刺激 R1881 p52 刺激の 48-72 時間後の細胞質と核の両方の蓄積として積極的に非正規の NF-κ b の経路を調整するが表示されることを報告します。TNF-α 刺激とは対照的アンドロゲン刺激は RelB の発現を誘導するのに失敗して休んでいる R1881 扱わ LNCaP 細胞の核から。Electromobility シフト試金は積極的に DNA に後 72 h アンドロゲン刺激と外観併用 p52 を含む複合体の結合 NF-κ b 複合体の性質の時間変化を明らかにします。Co 免疫沈降研究を示すその新たに生産された p52 関連や p50, ヘテロダイマーとして存在することができますが、ホモ二量体として主に存在しているかもしれません。IKK α と IKK β ターゲティング RNAi 実験 p52 の R1881 誘起核蓄積 IKK α 依存である. します。これらの結果は、アンドロゲンは NF-κ b を規制して非正規 NF-κ b シグナルにおける前立腺癌の生物学的意義にさらなる研究のための理論的根拠を提供する新しいメカニズムをポイントします。
低原子力 ErbB3 前立腺癌患者における生化学的再発を予測します。
(RP) 全摘後 BCR のような患者のリスクがあるのでさらに ErbB3 の細胞質または核ローカリゼーション前立腺癌患者における生化学的再発 （BCR） と肯定的な外科的切除縁間の関連を評価するには。
NOXA とプーマ式生存ツリー モデルにおける前立腺癌患者の生化学的再発予測における臨床マーカーを追加します。
アポトーシスの発現を評価する NOXA と前立腺組織におけるプーマと前立腺がん （PCa） 再発との関連付けを描きます。
Co-assessment 前立腺標本における細胞質と核のアンドロゲン受容体立地: 予後と前立腺癌の開発のための潜在的な影響。
アドレスには、細胞質と核のアンドロゲン受容体 (AR) 式前立腺組織における前立腺癌 （PC） の段階とその値の全体で AR の寄与 (RP) 全摘後の生化学的再発 （BCR） の予測のためのマーカーとしての co-assessing によって。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤による先天性抗ウイルス応答の標的化学物質はウイルスの腫瘍崩壊に敏感耐火癌をレンダリング
腫瘍先天性免疫は、腫瘍溶解性ウイルス（OVS）の数の効果的な治療の普及を阻止する上で重要な役割を果たすことができます。ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（HDIS）はクロマチンのエピジェネティックな変更に影響を与えると細胞の抗ウイルス応答を鈍らせることができることが知られている。我々は、HDIS腫瘍の前処理は、悪性腫瘍内OVSの複製と普及を高めることができると考えた。ここでは、HDISが著しく原発腫瘍組織片では、複数の動物モデルにおいて、in vitroで癌細胞の様々な水疱性口内炎ウイルスの蔓延（VSV）を向上させることを示している。この増加した腫瘍細胞破壊作用は、細胞のIFN応答とウイルス誘導性アポトーシスの増強の減衰と相関していた。これらの結果は、細胞の生来の抗ウイルス応答を調節し、悪性腫瘍の中で治療のウイルスの制御成長を提供するために、化学スイッチとしてHDISの一般的なユーティリティを示しています。 HDISは、OV治療薬の臨床試験実施に関する深く肯定的な影響を及ぼす可能性があります。
IkappaB-キナーゼ-イプシロン （IKKepsilon/一輝) の過剰発現は、前立腺癌細胞株における炎症性サイトカインの分泌を誘導します。
上昇炎症性サイトカイン濃度血清中前立腺癌では高度な段階転移関連罹患率に関連付けられています。いくつかの研究は、IL-6 と IL-8 ひと前立腺癌細胞の成長を加速することを示しています。以前の研究でマウスの胚繊維芽細胞、その Ikappa B キナーゼ-イプシロン （IKKepsilon/一輝） を示している-欠乏の結果表現リポ多糖を介する IL 6 の削減。
インテリジェント·デザイン：腫瘍溶解性ウイルスとの併用療法
転移性癌は、ほとんどの場合で難病のままで、そのような腫瘍溶解性ウイルス療法などのため、新たな治療戦略は、急速に臨床使用に向けて進めています。成功するためには、併用療法のいくつかのタイプがこの病気に大きな影響を持つことが必要となる可能性があります。それは単に既存の標準放射線や化学療法と腫瘍溶解性ウイルスを組み合わせて魅力的かもしれませんが、このような治療の長期的な目標は、安全かつ容易に臨床の現場で使用することができる合理的な、潜在的に相乗効果戦略を持つようにする必要があります。既存の放射線療法と化学療法のモダリティと腫瘍溶解性ウイルス療法の組み合わせは、研究者は、これらの製品の臨床開発中のインテリジェントな意思決定を支援するためには、免疫療法を含む新規生物学的療法と一緒に見直されます。
腫瘍溶解性ウイルスを増強腫瘍を殺す間の相乗作用
臨床開発のすべての腫瘍溶解性ウイルス（OVS）への主要な障壁は、ヒト悪性腫瘍のスペクトルの可変アクティブになっている携帯電話先天性免疫である。腫瘍反応の不均一性を克服するために、我々は異なる方法で攻撃癌が治療転帰を改善するための補完的なOVSを組み合わせました。二つの遺伝的に異なるウイルス、水疱性口内炎ウイルス（VSV）とワクシニアウイルス（VV）は、組換えのリスクを排除するために使用された。組み合わせは、初代ヒト癌試料のパネルで、免疫不全、免疫マウス腫瘍モデルにおいて、in vitroでの腫瘍の種類の様々なテストと、ex vivoでいた。我々はVVが相乗的にVV B18R遺伝子産物の活性に大部分依存し、VSVの抗腫瘍活性を増強ことがわかった。さらにそれぞれのウイルスが他の能力を高めここで、 "ピンポン"腫瘍溶解効果が得られ、感染した単分子層を介して拡散するためにVVの能力を強化融合関連の小貫通（p14FAST）タンパク質を発現する組換えVSVバージョン複製および/または腫瘍細胞に広がった。当社の戦略は、OVSが合理的に悪性腫瘍の不均一性を克服するために別のOVSの属性を利用するために結合される最初の例であり、治療結果を改善するために補完的なOVSを組み合わせることの可能性を示しています。
ハイスループットPharmacoviralアプローチ新規腫瘍溶解性ウイルスの増感を識別します
腫瘍溶解性ウイルスは、（OVS）抗がん剤を約束されていますが、他の癌単独療法と同様に、ヒト悪性腫瘍の遺伝的異質性は、治療抵抗性につながる可能性があります。我々はウイルス感染に抵抗する腫瘍細胞を破壊するOVSとの相乗効果で作用することができる小さな分子を識別するために、多様な化学的ライブラリーをスクリーニングするために、ウイルス/細胞ベースのアッセイを使用していました。いくつかの分子が同定されたウイルスの腫瘍崩壊の援助、腫瘍細胞の1000倍ほどにはウイルスの複製と普及を強化する。我々はウイルスの増感剤1（VSe1）という名前のこれらの分子の一つは、腫瘍免疫応答を標的に発見され、正常組織に良性のまま動物の腫瘍モデルでは、プライマリヒト腫瘍外植片内のOVの有効性を高めることができる。私たちは、これがウイルス感染に対する細胞応答を調節する小分子を識別し、腫瘍溶解性ウイルス療法を強化することを目的としたウイルス/セルベースの "pharmacoviral"画面の最初の例であると信じています。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤とワクシニアウイルス系腫瘍崩壊の強化
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（HDI）は、インターフェロン産生を減少させることによって細胞の自然免疫応答を抑制し、水疱性口内炎ウイルスとHSVの増殖を増加させることが示されている。弱毒腫瘍選択的な腫瘍溶解性ワクシニアウイルス（VV）がすでに臨床評価を受けているように、この研究の目的は、HDIはまた、感染症耐性癌細胞株におけるこれらのポックスウイルスの効力を高めることができるかどうかを判断することです。複数HDISを試験したとトリコスタチンAは、（TSA）を強力にいくつかの感染症耐性癌細胞株における腫瘍選択的なワクシニアウイルスの拡散およびレプリケーションを強化することが判明した。 TSAは、大幅にまだ正常組織でワクの複製を増加させなかった同系B16F10LacZ肺転移モデルにおける肺転移数を減少させた。単独剤を投与したマウスに比べて、TSAとVVの組み合わせは、人間のHCT116結腸腫瘍異種移植片を保有するマウスの生存を増加させた。我々は、TSAが選択的かつ効率的に癌細胞の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの複製と普及を向上させることができると結論付けている。
転移性メラノーマ患者のJX-594の機序概念実証臨床試験では、ターゲットマルチ機構的腫瘍溶解性ポックスウイルス、
JX-594は、ターゲットと顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）を発現して選択的に複製し、ウイルスの腫瘍崩壊と腫瘍特異的免疫を介して癌細胞を破壊するために設計された腫瘍溶解性ポックスウイルスである。ヒトでのJX-594のメカニズム·オブ·アクション（MOA）を勉強するためには、機構のproof-of-concept臨床試験は年最大許容線量の≤10％（MTD）に低用量と同等で行われました他の臨床試験。以前に処理されたIV期の黒色腫患者10人が在籍していた。腫瘍は最大9つの合計の治療のために毎週注射した。血液サンプルと腫瘍生検は、遺伝子活性の証拠は、ウイルス複製、免疫刺激について分析した。抗体誘導で明らかなようにβ-ガラクトシダーゼ（β-gal）遺伝子は、すべての患者に発現していた。 6人の患者は、このような好中球（25-300％増）とGM-CSF反応性白血球（WBC）のサブセットの有意な誘導があった。血液中にJX-594のレプリケーションおよびそれ以降の脱落は、サイクル1月9日後の5の患者で検出可能であった。腫瘍生検では、JX-594の複製、血管周囲のリンパ球浸潤、びまん性腫瘍壊死を示した。軽度のインフルエンザ様の症状は、最も一般的な有害事象であった。要するに、JX-594の複製、腫瘍崩壊し、両方の導入遺伝子の発現が実証された、レプリケーションは、複数のサイクル後に、まだ明らかになった。これらの知見は、JX-594と他の遺伝子武装腫瘍溶解性ウイルスのさらなる臨床開発のための含意を持っています。
人間のマルチメカニズムがん標的腫瘍溶解性ポックスウイルスの静脈内送達
高濃度の静脈内投与後、正常組織に対し、達成し、腫瘍組織に選択的に増幅することができればこのようなペプチドと低分子干渉RNA（siRNA）などの癌治療における生体分子の有効性と安全性は、著しく増加することができます。これは人間でこれまで達成されていません。我々は、哺乳類の血液を媒介と全身の普及のために進化したポックスウイルスは、癌選択的な複製のために設計および腫瘍における導入遺伝子の静脈内送達および発現のための車両として使用することができるという仮説を立てた。 JX-594は、細胞溶解と抗がん免疫に続く上皮成長因子受容体（EGFR）/ Ras経路の活性を保有する癌細胞内で複製、導入遺伝子の発現と増幅のために設計された腫瘍溶解性ポックスウイルスである。ここでは、JX-594が選択的に感染している臨床試験で示し、用量依存性様式で、静脈内注入後の癌組織での遺伝子製品を複製して表現しています。正常組織は臨床的に影響を受けませんでした。このプラットフォーム技術は、選択的にヒトの転移性固形腫瘍のいくつかの補完的な治療とイメージング分子の高濃度を表現する多機能製品の可能性を開きます。
腫瘍溶解性ポックスウイルスJX-594は、選択的に複製し、一般的に癌で活性の遺伝的経路によって駆動されるがん細胞を破壊する
腫瘍溶解性ウイルスは、一般的に、単一の遺伝子変異に基づいて選択的に癌になるように設計されています。 JX-594は、チミジンキナーゼ（TK）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）およびレプリケーションに依存した細胞溶解との刺激を介して癌細胞を破壊するように設計されているのlac-Z導入遺伝子を発現する遺伝子不活化腫瘍溶解性ワクシニアウイルスである抗腫瘍免疫。 JX-594は、臨床試験で、固形がんの種類の様々な良好な安全性プロファイルおよび再現性の腫瘍壊死を実証してきました。しかし、その癌選択性の責任機構（s）は、まだ十分に記載されていない。主要な正常および癌細胞は、外科植し、マウス腫瘍モデル：我々は3つのモデルシステムにJX-594の複製を分析した。 JX-594の複製、遺伝子発現、細胞変性効果は非常に癌選択的であった、広いスペクトル活性が実証された。 JX-594癌選択性は、マルチメカニズムであった。レプリケーションは、I型インターフェロン（IFN）に上皮成長因子受容体（EGFR）/ RAS経路シグナリング、細胞のTKレベル、および癌細胞の抵抗によって活性化させた。これらの知見は、ヒトの固形腫瘍に共通の遺伝的異常によって駆動されJX-594の大きな治療指数を確認します。これは、腫瘍溶解性ウイルスの内在とエンジニアリングの両方に複数の選択性のメカニズムは、最初の説明のように見えます。これらの知見は、一般的に腫瘍溶解性ウイルスのための含意を持っており、標的のがんは、複雑で多因子プロセスであることを示唆している。
伝搬、浄化および腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス株の in Vivo テストします。
腫瘍溶解性ウイルス治療具体的にレプリケートして、がん細胞を殺す self-amplifying です。我々 は以前その水疱性口内炎ウイルス （VSV）、腫瘍溶解性ウイルスとして使用することができますを示しています。M 蛋白 (VSVΔ51) の突然変異を蔵匿 VSV のひずみその野生型対応正常細胞の抗ウイルス プログラムを克服できないことが原因とシグナル伝達経路の腫瘍の大半で観測された抗ウイルス剤で頻繁に欠陥が原因で強化された腫瘍選択性を示すことがわかった。VSVΔ51 transgenes を抱くことができます簡単に反映、高価と同系 CT26 lacZ の皮下の結腸癌のモデルを含む、いくつかのマウス モデルで強力な腫瘍溶解性の活動を示しますする精製しました。ただし、VSV 中和抗体の主、VSV G 表面糖タンパク質をターゲット初期投与後 3 ～ 5 営業日以内に生じる。これはウイルスまたは in vivo VSV レプリケーションを長引かせることを目指しての追加投与の配信を通して VSV の有効性の向上を目指す戦略を考慮しなければなりません。
