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Articles by Jillian Dargatz in JoVE
JoVE General
Isolamento e la coltura di cellule endoteliali polmonari da topi neonati
Blood Research Institute, BloodCenter of Wisconsin
Qui, descriviamo un protocollo per l'isolamento e la coltura di cellule murine endoteliali polmonari. Questo metodo comprende meccanico e dissociazione enzimatica tessuto polmonare e una 2-step processo di purificazione con anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpi coniugati a sfere magnetiche, che produce una popolazione pura di cellule endoteliali di origine per lo più microvascolare.
Other articles by Jillian Dargatz on PubMed
Rap1 Promuove Un Meccanismo Che Coinvolge Integrina αvβ₃ VEGFR2 Attivazione E L'angiogenesi
Vascular endothelial growth factor (VEGF) che agiscono attraverso recettori VEGF 2 (VEGFR2) sulle cellule endoteliali (ECs) è un regolatore chiave dell'angiogenesi, un processo essenziale per metastasi di tumore e di guarigione ferita. Rap1a e Rap1b, 2 altamente omologhe piccole proteine G, sono che entrambi necessari per l'angiogenesi in vivo e per le normali risposte CE di VEGF. Qui abbiamo cercato di determinare il meccanismo attraverso il quale Rap1 promuove l'angiogenesi VEGF-mediata. Utilizzando topi knockout Rap1 lineage-restricted mostriamo che Rap1-deficit di endotelio conduce a difettoso angiogenesi in vivo, in modo dose-dipendente. Utilizzando ECs ottenuti da topi carenti Rap1 ci dimostrano che Rap1b promuove l'attivazione della chinasi VEGF-VEGFR2 e regola dell'integrina attivazione. Soprattutto, l'attivazione Rap1b-dipendente VEGF-VEGFR2 è in parte mediato via integrina α(v)β(3). Inoltre, in un modello in vivo di zebrafish angiogenesi, dimostreremo che Rap1b è essenziale per la germinazione dei vasi intersomitic, un processo conosciuto per essere dipendente su segnalazione di VEGF. Utilizzando 2 distinti farmacologici inibitori VEGFR2 mostriamo che Rap1b e VEGFR2 agiscono additivamente per controllare l'angiogenesi in vivo. Concludiamo che Rap1b promuove l'angiogenesi VEGF-mediata promuovendo VEGFR2 attivazione in ECs via integrina α(v)β(3). Questi risultati forniscono una visione romanzo il ruolo di Rap1 nella segnalazione di VEGF in ECs.
