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Articles by Jillian Dargatz in JoVE
JoVE General
Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos
Blood Research Institute, BloodCenter of Wisconsin
Aquí se describe un protocolo para el aislamiento y cultivo de las células endoteliales murinas pulmonar. Este método consiste en la disociación mecánica y enzimática del tejido pulmonar, así como un proceso de purificación de 2 pasos con anti-PECAM-1 y anti-ICAM-2 anticuerpos conjugados a perlas magnéticas, lo que produce una población pura de células endoteliales microvasculares su mayoría de origen.
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Promueve Rap1 VEGFR2 Activación Y Angiogénesis Por Un Mecanismo De Participación De La Integrina αvβ ₃
Factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), actuando a través del receptor 2 de VEGF (VEGFR2) en las células endoteliales (EC) es un regulador clave de la angiogénesis, un proceso esencial para la cicatrización de heridas y la metástasis del tumor. Rap1a y Rap1b, 2 proteínas G altamente homóloga pequeños, ambos son necesarios para la angiogénesis in vivo y para respuestas normales CE a VEGF. Aquí hemos tratado de determinar el mecanismo a través del cual Rap1 promueve la angiogénesis mediada por VEGF. Uso de linaje restringido Rap1 ratones knock-out nos muestran que la deficiencia de Rap1 en el endotelio lleva a un defecto en la angiogénesis in vivo, de una manera dosis-dependiente. Uso de EC de obtener Rap1 ratones deficientes que demuestran que Rap1b promueve la activación de VEGF-VEGFR2 cinasa y regula la activación de la integrina. Es importante destacar que la Rap1b dependiente de VEGF-VEGFR2 activación es en parte mediada a través de la integrina α (v) β (3). Además, en un modelo in vivo de la angiogénesis pez cebra, se demuestra que Rap1b es esencial para el crecimiento de vasos intersomitic, un proceso conocido por ser dependiente de la señalización VEGF. Con 2 diferentes inhibidores farmacológicos VEGFR2 nos muestran que Rap1b VEGFR2 y actuar de forma aditiva para controlar la angiogénesis in vivo. Se concluye que el VEGF Rap1b promueve la angiogénesis mediada por promover VEGFR2 activación en ECs a través de la integrina α (v) β (3). Estos resultados proporcionan una visión novedosa sobre el papel de Rap1 de señalización VEGF en EC.
