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Articles by Joanna E. Burdette in JoVE
JoVE Bioengineering
Los hidrogeles de alginato para la cultura del órgano en tres dimensiones de los ovarios y oviductos
Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago
Cultivo de células normales en sus tres dimensiones contexto representa un método alternativo para estudiar los primeros eventos necesarios para la transformación celular y tumorigénesis. Este método se utiliza para producir los ovarios normales y las células del oviducto para estudiar los eventos tempranos en la formación de cáncer de ovario.
Other articles by Joanna E. Burdette on PubMed
Trifolium Pratense (trébol Rojo) Presenta Efectos Estrogénicos En Vivo En Ovariectomized Ratas Sprague-Dawley
Los estudios se llevaron a cabo utilizando un modelo de ratas ovariectomizadas para determinar la actividad estrogénica y antiestrogénica de Trifolium pratense L. (trébol rojo) los extractos. Un extracto de trébol rojo, estandarizado para contener isoflavonas 15% se administra por sonda [250, 500 y 750 mg / kg (xd)] a la Virgen, ovariectomizadas 50 días de edad ratas Sprague-Dawley, durante 21 días en la presencia y la ausencia de 17 beta-estradiol [50 microg / (kg xd)]. Efectos estrogénicos incluyen un aumento en el peso uterino, vaginal y cornificación celular conducto de la glándula mamaria de ramificación. El trébol rojo produce un aumento dosis-dependiente en el peso uterino y diferenciación de células vaginales en las dos dosis más altas, pero no estimula la proliferación de las células en las glándulas mamarias. Propiedades estrogénicas Ni antiestrogénico ni aditivo se observaron en cualquiera de los tejidos estudiados. Estos datos sugieren que el extracto de trébol rojo es débilmente estrogénicos en el modelo de ratas ovariectomizadas.
Cohosh Negro (Cimicifuga Racemosa L.) Protege Contra El Daño Del ADN Inducido Por Menadiona Por La Recolección De Las Especies Reactivas Del Oxígeno: Bioensayo Dirigida Aislamiento Y Caracterización De Principios Activos
Las raíces y rizomas de la Cimicifuga racemosa L. (Nutt.) (cohosh negro) se han utilizado tradicionalmente para tratar síntomas de la menopausia a través de un mecanismo de acción desconocido. En un esfuerzo por determinar si el cohosh negro tiene beneficios de salud adicionales, extractos de metanol fueron investigados por su potencial para secuestrar especies reactivas del oxígeno y para proteger contra el daño del ADN inducido por menadiona. Estos extractos eficazmente scavenged 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH) radicales libres. Además, los extractos mostraron dependientes de la dosis disminuye en la cadena de ADN de una sola rompe y bases oxidadas inducidas por la menadiona quinona usando el cometa (unicelular ensayo de electroforesis en gel) y longitud de los fragmentos asociados ensayos enzimáticos de reparación, respectivamente. Bioensayo dirigida fraccionamiento de los extractos metanólicos utilizando el ensayo DPPH como un monitor condujo al aislamiento de nueve compuestos antioxidantes activos: ácido cafeico (1), metil cafeato (2), ácido ferúlico (3), ácido isoferulic (4), fukinolic ácido (5), ácido cimicifugic A (6), ácido cimicifugic B (7), ácido cimicifugic F (8), cimiracemate A (9), y B cimiracemate (10). Seis de estos antioxidantes se han encontrado para reducir la menadiona inducida por el daño del ADN en células cultivadas de cáncer de mama S30 con el siguiente orden de potencia: cafeato de metilo (2)> ácido cafeico (1)> Ácido ferúlico (3)> cimiracemate A (9)> cimiracemate B (10)> ácido fukinolic (5). Estos datos sugieren que el cohosh negro puede proteger contra el daño en el ADN celular causado por especies reactivas del oxígeno, actuando como antioxidantes.
El Aislamiento Y La Elucidación De La Estructura De Una Isoflavona Y Un ácido Sesterterpenoic De Fascicularis Henriettella
Un nuevo isoflavona, 4 ',5,7-trihidroxi-6 ,8-dimethylisoflavone (1), y un nuevo ácido sesterterpenoic (2), junto con cinco compuestos conocidos, lichexanthone (3), (-)-pinoresinol (4) , ácido betulínico, ácido palmítico, y el beta-sitosterol, fueron aisladas de un extracto de diclorometano de las ramas de fascicularis Henriettella. Sus estructuras fueron establecidas por métodos espectroscópicos extensas. Un intento para determinar la estereoquímica absoluta del ácido (2) se realizó por un solo cristal análisis de rayos X, utilizando radiación Cu Kalpha. Compuesto 1 mostraron una unión competitiva significativa a la beta del receptor de estrógeno y de la actividad anti-estrogénica moderada, con cultivos de células de Ishikawa.
La Inhibición De La [3H]-LSD Unión a Los Receptores 5-HT7 Por Los Flavonoides De Scutellaria Lateriflora
El agua caliente y el 70% de los extractos de etanol secos perro rabioso escutelaria (Scutellaria lateriflora), ambos vinculados a la 5-HT (7) del receptor, con 87,2 + / - 6,2% y 56,7 + / - 1,3% de inhibición de [(3) H]-LSD unión al receptor a 100 mcg / ml, respectivamente. El análisis en línea de un extracto de etanol al 70% por HPLC-UV/MS como resultado la identificación de cinco flavonas (1-5). Fraccionamiento del extracto de etanol dio como resultado el aislamiento de tres flavona-glucurónidos (6-8) y un flavanona-glucurónido (9), incluyendo un nuevo compuesto, lateriflorin (5,6,-dihidroxi-7-glucuronyloxy-2'-metoxiflavona ) (8). La estructura de 8 se determinó por RMN ((1) H RMN, (13) C RMN, y los experimentos NOESY) y análisis EM. De los resultados obtenidos en el ensayo de los compuestos puros, es evidente que la actividad en el 5-HT (7) del receptor es por lo menos en parte debido a la presencia de flavonoides. Scutellarin ikonnikoside y me mostró la mayor inhibición de la [H (3)]-LSD vinculante con IC (50) los valores de 63,4 y 135,1 microM, respectivamente.
Identificación De Nuevos Metabolitos Electrófilos De Piper Methysticum Forst (Kava)
Los suplementos dietéticos que contengan Piper methysticum Forst. (Kava) han sido implicados en varios casos de daño hepático en humanos, incluyendo 10 casos revisados recientemente en el que los pacientes requieren trasplante de hígado tras el uso de productos que contienen kava (Centros para el Control y Prevención de Enfermedades, reimpreso. (2003) J. Am. . Med. Assoc. 289, 36-37). Para investigar un posible mecanismo (s) de la hepatotoxicidad inducida por la kava, un extracto de kava se incubaron in vitro con microsomas hepáticos, NADPH y de GSH. Intermediarios electrófilos que se generaron a través de la activación metabólica fueron atrapados como conjugados de GSH y eliminado de la mezcla de proteína mediante ultrafiltración. Positivos LC-MS/MS electrospray de iones con iones de exploración precursor se utilizó para la detección selectiva de conjugados de GSH, y LC-MS (n) de exploración de iones producto se utilizó para dilucidar sus estructuras. El uso de este ensayo in vitro de detección basado en MS, dos metabolitos novedosos electrófilos de kava, 11,12-dihidroxi-7 ,8-dihidrokavaina-o-quinona y 11,12-dihydroxykavain-o-quinona, fueron identificados. Ácidos mercaptúrico de estas especies quinoides no se detectaron en la orina de un voluntario humano después de la ingestión de un suplemento dietético que contiene la kava, sino que los catecoles correspondientes se metaboliza ampliamente a ácido glucurónico y sulfatos conjugados. Estas observaciones indican que los metabolitos quinoides, en la mayoría de las circunstancias, probablemente no se formó en grandes cantidades después de la ingestión de dosis moderadas de la kava. Sin embargo, la formación de metabolitos electrofílicos quinoides por los microsomas hepáticos in vitro sugieren que los metabolitos de estos podría contribuir a la hepatotoxicidad en los seres humanos cuando se alteran las vías metabólicas (por ejemplo, debido a una interacción de medicamentos, la diferencia genética en la expresión de la enzima, etc) o si las vías de conjugación saturarse.
Efecto De Los Sustituyentes Halogenados En El Metabolismo Y Los Efectos Estrogénicos De Los Estrógenos Equinos, Equilenina
La terapia de reemplazo de estrógeno se ha correlacionado con un mayor riesgo de desarrollar cáncer de mama y de endometrio. Un mecanismo potencial de estrógeno carcinogénesis implica el metabolismo de los estrógenos a 2 - y 4-hidroxilados catecoles, que se oxida a electrofílica / redox activa o-quinonas que tienen el potencial para iniciar y promover el proceso carcinogénico. Anteriormente, hemos demostrado que los estrógenos equinos, equilina y equilenina, que son los principales componentes de la formulación de estrógenos de reemplazo Premarin (Wyeth-Ayerst), se metaboliza principalmente a la catecol, 4-hydroxyequilenin. Este catecol se encontró que autoxidize a una oxidación de o-quinona y causando alquilación de ADN in vitro e in vivo. Para bloquear la formación de catecol de equilenina, 4-halogenados equilenina derivados fueron sintetizados. Estos derivados se ensayaron para determinar su capacidad para unirse al receptor de estrógeno, inducen genes sensibles a los estrógenos, y su potencial para formar metabolitos catecol. Hemos encontrado que los derivados de 4-fluoro eran más estrogénico que los derivados de 4-cloro y bromo-4, como lo demuestra una mayor afinidad para los receptores de estrógenos alfa y beta, una inducción de una mayor actividad de la fosfatasa alcalina en células Ishikawa, la expresión de PS2 en S30 las células y la expresión de relaciones públicas en las células de Ishikawa. La incubación de estos compuestos con tirosinasa en presencia de GSH mostró que los compuestos halogenados equilenina formado menos conjugados de GSH catecol que los compuestos matrices, equilenina y 17beta-hydroxyequilenin. Además, estos compuestos halogenados mostraron menos citotoxicidad en presencia de tirosinasa de los compuestos parentales en células S30. También, como se indicó anteriormente, los derivados de 4-fluoro mostró similares efectos estrogénicos en comparación con los compuestos originales, sin embargo, eran menos tóxicos en las células S30, en comparación con equilenina y 17beta-equilenina. Debido a que 17 beta-hidroxi-4-derivados halogenados equilenina mostraron mayores efectos estrogénicos de los derivados halogenados equilenina in vitro, se estudió la capacidad relativa de la 17 beta-hidroxi-4-derivados halogenados equilenina para inducir efectos estrogénicos en el modelo de ratas ovariectomizadas. El derivado de 4-fluoro mostraron mayor actividad que los derivados de 4-cloro y bromo-4 como se demuestra mediante la inducción de diferenciación superior vaginal celular, el crecimiento del útero y glándula mamaria de ramificación. Sin embargo, 17beta-hidroxi-4-fluoroequilenin mostraron una menor actividad estrogénica de 17 beta-estradiol y hydroxyequilenin, lo que podría ser debido a las propiedades farmacocinéticas alternativos para estos compuestos. Estos datos sugieren que los derivados de 4-fluoroequilenin tienen promesa como alternativas a la terapia tradicional de reemplazo de estrógenos debido a sus propiedades estrogénicas similares con una menor toxicidad general.
Efectos Perjudiciales Antiestrogénico Y El ADN Inducidos Por Metabolitos Tamoxifeno Y Toremifeno
El antiestrógeno, el tamoxifeno, ha sido ampliamente utilizado en el tratamiento y la prevención del cáncer de mama. Aunque el tamoxifeno mostraron beneficios en la quimioterapia y la quimioprevención del cáncer de mama, los estudios epidemiológicos, tanto en pacientes tratados con tamoxifeno del cáncer de mama y mujeres sanos indicó que el tratamiento provocó un aumento del riesgo de desarrollar cáncer de endometrio. Estos efectos secundarios preocupantes dar lugar a preocupaciones sobre la seguridad a largo plazo de la droga. Por lo tanto, es importante para comprender plenamente la relación entre el antiestrogénica y los mecanismos genotóxicos de tamoxifeno, antiestrógenos otros, y sus metabolitos. Anteriormente, hemos demostrado que el o-quinona formación de tamoxifeno y sus análogos, droloxifeno y 4 hidroxitoremifeno-, no puede contribuir a los efectos citotóxicos de estas antiestrógenos, sin embargo, estas o-quinonas pueden formar aductos con desoxinucleósidos y esto implica que la junta -quinona vía podría contribuir a la genotoxicidad de los antiestrógenos en vivo. Para investigar más a fondo esta vía potencial genotóxico, que se mostraron interesados en el papel de receptor de estrógeno (ER) (1) alfa y beta ya que el trabajo con los estrógenos catecol ha demostrado que las exigencias ambientales parecen aumentar el daño del ADN en líneas celulares de cáncer de mama. Como resultado, hemos investigado las afinidades de unión de 4-hidroxi y 3,4-dihidroxi derivados del tamoxifeno y toremifeno a ER alfa y beta. Las actividades antiestrogénicos de los metabolitos utilizando las células Ishikawa también fueron investigados, así como su actividad en ERalpha y células de cáncer de mama ERbeta utilizando el reportero transfección transitoria, la respuesta de estrógeno elemento dependiente de ensayo de luciferasa. Los datos mostraron que las actividades antiestrogénico de estos compuestos en los ensayos biológicos imitó sus actividades en el ensayo de unión de ER. Para determinar si los compuestos eran tóxicos y si RE jugado un papel en este proceso, la citotoxicidad de estos compuestos en ERbeta41 (2) (ERbeta), S30 (ERalpha), y MDA-MB-231 (ER (-)) líneas celulares Se comparó. Los resultados mostraron que las diferencias entre los metabolitos de citotoxicidad fueron modestos. Además, todos los metabolitos mostraron patrones similares de toxicidad en ambas líneas celulares ER positivos y negativos, lo que significa que el RE no puede contribuir a la vía de citotoxicidad. Finalmente, se comparó la cantidad de daño en el ADN inducidos por estos metabolitos en estas líneas celulares utilizando el ensayo cometa. El 3,4-catecoles dihydroxytoremifene y 3,4 dihydroxytamoxifen-inducido una mayor cantidad de escisión celular única hebra de ADN en comparación con los fenoles en todas las líneas celulares. Las diferentes cantidades de daño del ADN en líneas celulares de ER positivas y negativas sugiere que las exigencias ambientales pueden jugar un papel en este proceso. Estos datos sugieren que la formación de catecoles representa un papel menor en los efectos citotóxicos y antiestrogénico en las células, en comparación con sus análogos de fenol. Sin embargo, catecoles inducidos más daño en el ADN a dosis no tóxicas en las células de cáncer de mama, lo que implica que la o-quinonas formadas a partir de catecoles podría contribuir a la genotoxicidad in vivo, que es ER-dependiente.
Hechos De Cohosh Negro Como Un Ligando Mixto Competitivo Y Agonista Parcial Del Receptor De La Serotonina
Los extractos de rizoma de cohosh negro [Actea racemosa L., antes llamado Cimicifuga racemosa (L.) Nutt.] Fueron evaluados por los posibles mecanismos de acción en el alivio de los bochornos de la menopausia. Ovariectomizadas ratas Sprague-Dawley se les administró un 40% de 2-propanol extracto de cohosh negro [4, 40 y 400 mg / (kg.día)] por sonda durante 2 semanas con o sin estradiol [50 microg / (kg.día) ] para determinar si el cohosh negro podría actuar como un estrógeno o antiestrógeno sobre la base de un aumento en el peso uterino o cornificación celular vaginal. No se observaron efectos sobre el peso del útero o en la cornificación vaginal celular en ratas tratadas con cohosh negro solo o en combinación con 17 beta-estradiol, lo que indica este extracto de cohosh negro no tenía propiedades estrogénicos o antiestrogénicos en el modelo de ratas ovariectomizadas. Para evaluar otras posibles vías por la que el cohosh negro puede reducir los bochornos de la menopausia, la actividad de la serotonina se evaluó por primera vez por la inhibición de la unión de radioligando a las preparaciones de membrana de células que contienen receptores de serotonina humana recombinante (5-HT) subtipos. Un 40% de 2-propanol extracto de cohosh negro se probó frente a 10 subtipos del receptor de serotonina, que revela la presencia de compuestos con fuerte unión a la 5-HT (1A), 5-HT (1D), y 5-HT (7 ) subtipos. Posteriores estudios de unión se llevó a cabo utilizando 5-HT (1A) y 5-HT (7) receptores debido a su asociación con el hipotálamo, que ha sido implicado en la generación de los sofocos. El cohosh negro 40% 2-propanol extracto inhibe la [H (3)] dietilamida del ácido lisérgico (LSD) que se une al ser humano de 5-HT (7) receptor (IC (50) = 2,4 + / - 0,4 ug / ml) con una mayor potencia de unión de [(3) H]-8-hidroxi-2-(di-n-propilamino) tetralina a la rata de 5-HT (1A) del receptor (IC (50) = 13,9 + / - 0,6 ug / ml) . Análisis de ligando el enlace de datos indica que los componentes de un extracto de cohosh negro metanol funcionó como un ligando competitivo mixto de la 5-HT (7) del receptor. Además, un metanol cohosh negro extraer niveles elevados de AMPc en 293T-5-HT (7)-transfección de células HEK, lo que sugiere el extracto actuó como un agonista parcial en el receptor. La elevación de la mediada por AMPc por el extracto de cohosh negro podría ser invertida en la presencia del antagonista metiotepina, lo que indica un proceso mediado por receptor. Estos datos sugieren que la reducción de los sofocos en las mujeres que toman algunos cohosh negro no puede ser debido a las propiedades estrogénicas. Este estudio identifica otros posibles objetivos biológicos de cohosh negro que podrían explicar los efectos biológicos reportados.
Los Estrógenos Y Los Congéneres De Bagazo De Lúpulo (Humulus Lupulus)
Estrogenicidad dirigida por el fraccionamiento de un extracto de metanol de los estróbilos de Humulus lupulus que habían sido extraídos previamente con CO supercrítico (2), conocido como "el sector del lúpulo pasó", condujo al aislamiento y la identificación de 22 compuestos, incluyendo 12 chalconas preniladas (1-8 , 10-13), cinco prenylflavanones (14-17), 4-hidroxibenzaldehído (18), sitosterol-3-O-beta-glucopiranósido (19), humulinone (20), y cohumulinone (21). Además, el prenylated chalcona xantohumol C (9a) se obtuvo como una mezcla 6:1 junto con su 1 ', 2'-dihidro derivado (9b). Tres nuevas chalconas (4, 11, 12) y cuatro componentes inéditas de lúpulo (5, 6, 9 ter, 13) son reportados. Las estructuras de los nuevos compuestos se determinaron mediante una combinación de técnicas de espectrometría de RMN incluyendo 1D y 2D, HRESIMS, y ESIMS-MS. Íntegro 1H NMR análisis del sistema de espín se realizaron para caracterizar la glucopiranosil de orden superior, prenilo, y chalcona anillo B espectros de los aislados. El estrógeno principio 8-prenylnaringenin (15) a partir del lúpulo es un artefacto formado junto con su isómero posicional 6-prenylnaringenin (16) a través de la isomerización espontánea de la DMX pro-estrogénica chalcona (7).
Activina A Media La Inhibición Del Crecimiento Y La Detención Del Ciclo Celular a Través Smads En Células Humanas De Cáncer De Mama
El factor de crecimiento transformante-beta (TGF-beta) superfamilia de factores de crecimiento es responsable de una variedad de acciones fisiológicas, incluyendo la regulación del ciclo celular. Activina es un miembro de la superfamilia de TGF-beta que inhibe la proliferación de células de cáncer de mama. Activina funciones al interactuar con sus receptores tipo I y tipo II para inducir la fosforilación de las moléculas de señalización intracelular conocida como Smads. Smads regular la transcripción de muchos genes en una célula y tejido específico. En este estudio, el papel de la activina A en la regulación del crecimiento de las células de cáncer de mama se investigó. Activina estimula el promotor Smad-respuesta, p3TP, dos veces por el control de T47D células de cáncer de mama. Activina inhibe la proliferación celular de las células de cáncer de mama T47D después de 72 horas, un efecto que podría ser derogada por la incubación con la activina tipo I inhibidor de los receptores, SB431542. Activina detenido células T47D en la fase celular G0-G1 ciclo. Smad2 y Smad3 fueron fosforilados en respuesta a la activina y acumulado en el núcleo de las células tratadas T47D. La infección de las células T47D con Smad3 adenoviral resultó en el arresto del ciclo celular y la activación de p3TP-luciferasa, mientras que un adenovirus dominante negativo Smad3 bloqueado activina mediada por la detención del ciclo celular y la transcripción de genes. Activina mantenido expresión de p21 y p27 dependientes de ciclina inhibidores de la quinasa implicados en el control del ciclo celular, la expresión aumentada de p15, la reducción de ciclina Una expresión, y la fosforilación reducida del retinoblastoma (Rb) de proteínas. Sobreexpresión Smad3 recapituló activina p15 inducida por la expresión y la represión de la ciclina A y la fosforilación de Rb. Estos datos indican que la activina A inhibe la proliferación celular del cáncer de mama y Smads activa responsables de la iniciación detención del ciclo celular.
Una Inyección De Esteroides Conjugados Agente De Contraste Para Resonancia Magnética De La Señalización De La Célula
Se han sintetizado la primera hormona esteroide-MR conjugado agente de contraste diseñado para seguir el proceso de señalización celular al unirse a un sistema de interruptor de los genes. El derivado tiene un relajabilidad alta y cuando se ensayó in vitro es activo como un antagonista de la progesterona (RE-486). Mediante la combinación de un sistema de transcripción y una tecnología de imagen no invasiva, como la resonancia magnética, que sería una poderosa herramienta para investigar la vía de señalización celular in vivo.
Gonadotropina Inducida Por Unidades De Superovulación Ovárica Epitelio Superficial Proliferación De Ratones CD1
El epitelio superficial del ovario (OSE) es una monocapa de células que rodean el ovario y acomodar desgarro repetido y reparación en respuesta a la ovulación. Las células de OSE se cree que son los progenitores de un 90% de los cánceres de ovario. En la actualidad, la cantidad total de la proliferación de la OSE no se ha informado en respuesta a un evento de la ovulación. En este estudio, la proliferación de la OSE se cuantificó en respuesta a la superovulación inducida por la inyección ip de suero de yegua preñada de gonadotropina (PMSG) y gonadotropina coriónica humana (hCG) en inmaduros de 27 días de edad ratones CD1 con bromodeoxiuridina (BrdU). BrdU incorporación en las células de OSE se midió desde el momento de la inyección de hCG para una etiqueta total acumulado de 12 h. Incorporación de BrdU también se midió desde el momento de la inyección de PMSG una etiqueta total de 60 h para correlacionar con la estimulación de gonadotropina proliferación específica. La proliferación de OSE fue significativamente mayor en los animales superovuladas en comparación con los ratones de control en todos los puntos de tiempo. Proliferación de las armas también fue analizado en las secciones anatómicas discretas, e indicó que OSE cubre folículos antrales y el cuerpo lúteo proliferado más rápidamente que OSE distal para el crecimiento folicular. Por último, se evaluó la apoptosis en respuesta a la ovulación, y prácticamente no hay muerte celular dentro de la OSE fue detectado. Estos datos demuestran que la OSE, especialmente cerca de los folículos antrales y cuerpo lúteo, prolifera de manera significativa en respuesta a la PMSG y hCG gonadotropinas. Por lo tanto, la superficie del ovario de la división celular en respuesta a la ovulación podrían contribuir al cáncer de ovario por mutaciones en el ADN inducidos por la proliferación y la progresión de células transformadas.
El Perfil Químico Y Biológico De Un Trébol Rojo (Trifolium Pratense L.) Extracto De La Fase II Clínica
Para documentar la química y biológica de un perfil clínico de fase II trébol rojo (Trifolium pratense L.) extracto mediante la identificación y la medición de los componentes principales y secundarias visibles en el líquido de alto rendimiento cromatografía-ultravioleta (HPLC-UV) cromatograma y evaluar cada compuesto para la actividad estrogénica y antioxidante.
Quistes Ováricos Epiteliales De Inclusión En Crónica Superovuladas CD1 Y Smad2 Dominantes-negativas Ratones
La ovulación crónica como un factor que contribuye para el desarrollo de cáncer epitelial de ovario en las mujeres ha sido durante mucho tiempo una hipótesis excepcional. Para probar la hipótesis de la ovulación incesante, los ratones fueron superovuladas con inyecciones semanales IP de suero de yegua preñada de gonadotropina (5 UI / animal), seguido de 48 horas más tarde por la gonadotropina coriónica humana (5 UI / animal). De tipo salvaje ratones CD1 se usa junto con ratones CD1 que expresan una Smad2 dominante negativo (Smad2DN) transgén bajo el control del promotor de la sustancia inhibidora Mülleriana que se dirige la expresión en el ovario y aumenta la formación de quistes. Después de las inyecciones crónicas, los ovarios fueron analizados a partir de animales de 6 meses de edad para el número total ajustado de los quistes, el área del quiste, la ubicación del quiste, y las principales vías de señalización. Todos los quistes observadas fueron confirmados como de origen epitelial. El número de quistes no fue significativamente diferente entre los ratones superovuladas y control, ya sea en los grupos de tipo salvaje o Smad2DN. Sin embargo, la combinación del transgén Smad2DN y superovulación resultó en un incremento en la formación de quistes en comparación con sus compañeros de camada normales que se unstimulated. Rápida proliferación de las células que revisten los quistes se detectó utilizando bromodesoxiuridina y fosfato histonas inmunohistoquímica 3, pero no fue diferente en el epitelio superficial del ovario o en el revestimiento del quiste entre los grupos. Estos datos sugieren que la inducción de la superovulación crónica en ratones Smad2DN da lugar a una mayor incidencia de la formación de quistes en comparación con los controles no estimulados, pero los quistes epiteliales alineados no progresar a cáncer en el transcurso de este estudio.
Diseño Racional, Síntesis Y Evaluación Biológica De La Progesterona Modificados Agentes De Contraste De Resonancia Magnética
Una serie de agentes de contraste para resonancia magnética nuclear (RMN), destinado a determinar la forma no invasiva el estado del receptor hormonal del cáncer in vitro se ha desarrollado. Estos agentes de contraste para MRI se prepararon mediante la conjugación de progesterona a clínicamente utilizado Gd (III) quelatos. Estos agentes exhiben mayor afinidad de unión del receptor de progesterona en el rango nanomolar y la acumulación intracelular. Los valores altos logP de los compuestos modificados sugirió que la lipofilicidad de los conjugados esteroides pueden haber contribuido a la permeabilidad de la membrana. Sincrotrón radiación de rayos X y microscopía de fluorescencia imágenes de resonancia magnética reveló que los conjugados sintetizados mostró la mayor acumulación celular y un aumento significativo de relajación in vitro en comparación con el esteroide desarrollado previamente modificado con agente. Ensayos de transcripción utilizando el elemento de respuesta a la progesterona vinculado a luciferasa indicó que los agentes de contraste entrado en la célula, interactuado con el objetivo biológico, y condujo específica progesterona mediada por la transcripción.
Activina Y La Diafonía De Estrógeno Regula La Transcripción En Las Células De Cáncer De Mama
Activina es un miembro de la superfamilia de factor de crecimiento transformante beta que regula la función de células mamarias durante el desarrollo, la lactancia, y en el cáncer. Activina retarda el crecimiento de las células de cáncer de mama mediante la inducción de G (0) / G (1) la detención del ciclo celular. El estrógeno es una hormona esteroide que estimula la proliferación de las células epiteliales mamarias en el desarrollo y la oncogénesis. La intercomunicación entre los estrógenos y la activina que regula la expresión de la activina ligando, activina y la transducción de la señal de estrógeno, y la detención del ciclo celular se ha investigado en este estudio. El estrógeno antagoniza activina dependiente de la producción de activador del plasminógeno inhibidor 1 (PAI-1) mRNA, mientras que la activina reprimido dependiente de estrógenos transcripción del factor de trébol 1. La represión de la señalización de los estrógenos por activin se recapituló con una simple respuesta de estrógeno elemento luciferasa construcción y fue reforzada por la presencia de alfa sobreexpresión del receptor de estrógeno (ERalpha). Por el contrario, los estrógenos mediada por la represión de la activina señalización no podía ser recapitulado en un simple CagA Smad elemento vinculante, pero que inhiben el corto PAI-1 promotor, p3TP-luciferasa, sobre todo cuando ERalpha se sobreexpresa. La represión de la transcripción tanto estrógeno y activina regulado se encontró que era inducida por ligando y Smad3 dependiente. Además de la represión transcripcional, estrógenos también reduce la cantidad de ARNm activina B y proteína producida por células de cáncer de mama MCF7. Estos estudios demuestran la importancia de la diafonía activina y estrógeno durante el crecimiento de células mamarias y la iniciación del cáncer.
Un Receptor De Estrógeno Alfa Knock-in Mutación Proporciona Evidencia De Ligando-independiente De Señalización Y Permite La Modulación De Las Vías Inducidas Por Ligando En Vivo
El estrógeno-que no responde al receptor de estrógeno alfa (ERalpha) knock-in (ENERKI) se generaron ratones a distinguir entre el ligando y ligando-inducidos independiente de ER-alfa acciones en vivo. Estos ratones tienen una mutación [glicina 525 a leucina (G525L)] en el dominio de unión al ligando del ERalpha, lo que reduce significativamente la interacción con ERalpha y la respuesta a los estrógenos endógenos, mientras que no afecta a la activación del factor de crecimiento de ligando-independiente de las vías. Los ratones ENERKI tenía hipoplasia de los tejidos uterinos rudimentarios y los árboles de las glándulas mamarias ductales. Las mujeres eran infértiles debido a la anovulación, y sus ovarios contenían quistes foliculares hemorrágicos debido a los niveles crónicamente elevados de LH. El fenotipo ENERKI confirmó que la activación inducida por ligandos de ERalpha es crucial en el tracto reproductivo femenino y desarrollo de la glándula mamaria. Los tratamientos de factor de crecimiento inducida por la proliferación del epitelio uterino en las hembras ovariectomizadas ENERKI, directamente lo que demuestra que ERalpha ligando-independiente de las vías estaban activos. Además, la sintética ERalpha agonista selectivo propilo pirazol triol (PPT) y dietilestilbestrol ER agonista (DES) eran todavía capaces de activar ligando inducidas G525L vías ERalpha in vitro. PPT tratamientos iniciados en la pubertad estimulan ENERKI desarrollo uterino, mientras que los tratamientos neonatales fueron necesarios para restaurar la elongación de la glándula mamaria ductal, lo que indica que neonatal ligando inducida por la activación ERalpha pueden preparar los conductos mamarios a ser más sensibles a los estrógenos en los tejidos adultos. Este es un modelo útil para la evaluación in vivo de ligando inducida por vías de ERalpha y los patrones temporales de la respuesta. DES no estimular una respuesta uterotrófica ENERKI. Debido a que puede modular la activación ERbeta ERalpha y tienen una función antiproliferativa en el útero, la hipótesis de que los animales ENERKI eran particularmente sensibles a DES-inducida por la inhibición de la ERalpha debido a la regulados hasta niveles ERbeta uterinas.
Imágenes in Vivo De Dianas Moleculares Y Su Función En Endocrinología
La imagen es uno de los campos de mayor crecimiento de estudio. Las nuevas tecnologías y enfoques multimodales están aumentando la aplicación de imágenes para determinar dianas moleculares y procesos funcionales in vivo. La identificación de un objetivo específico, el transportista o el proceso biológico mediante imágenes ha introducido importantes avances en el campo de la endocrinología sobre todo la utilización de la tomografía computarizada, resonancia magnética, la ecografía, la tomografía por emisión de positrones, emisión de fotón único tomografía computarizada, y la imagen óptica. Esta revisión ofrece un panorama general de los desarrollos específicos en la imagen que pertenece a la función en vivo y la identificación de objetivos basados en el sistema endocrino enfermedades.
Tridimensional De Ovario Cultura De órganos Como Una Herramienta Para El Estudio De Reparación Normal De La Superficie Epitelial De Los Ovarios De Heridas
Los cánceres de ovario se derivan principalmente de una sola capa de células epiteliales que rodean el ovario, el epitelio superficial del ovario (OSE). Proliferación de ovario superficie está asociado con la ovulación y se ha sugerido que desempeñar un papel en la transformación de ovario superficie y la progresión del cáncer. Aspectos de la reparación de la superficie del ovario después de la ovulación incluyen la proliferación, la migración, y la regeneración de la superficie. Para el estudio de la reparación de ovario superficie, un sistema de cultivo de órganos ha sido desarrollado que apoya la proliferación, la encapsulación y la reparación de una superficie artificial de heridos. Los ovarios de ratones heridos embebidos en una matriz de hidrogel de alginato que las células normales de OSE, como lo demuestra la expresión de citoqueratinas 8, vimentina, N-cadherina, y la falta de la E-cadherina. Las células normales de OSE comenzó la proliferación y migración de alrededor de superficies heridos después de un d de la cultura. Cultivos de órganos se propagaron en medio suplementado con BSA y suero bovino fetal para determinar las condiciones óptimas de crecimiento. Órganos BSA cultivadas tenía OSE que proliferaron mucho más que los controles hasta el día 4, mientras que los órganos fetales bovinas cultivadas en suero tenía un área de superficie significativamente más encapsulado por OSE. En general, un cultivo de ovario tridimensional órgano apoya el crecimiento de OSE normal en respuesta a heridas artificial y proporciona un sistema novedoso para la investigación de la reparación de heridas que se refiere a la posible función de la ovulación y el cáncer de ovario.
Identificación De Mecanismos De Acción Botánico
El mecanismo biológico de acción para cualquier extracto botánico es una parte necesaria del descubrimiento para determinar el uso farmacológico y la seguridad. Curiosamente, muchas actividades que están reguladas por compuestos endógenos no se entienden completamente lo que la caracterización de los mecanismos difícil de alcanzar. Por ejemplo, los fitoestrógenos se consumen para los síntomas menopáusicos, mientras que la acción biológica de estradiol están siendo todavía investigadas. Por lo tanto, la eficacia a largo plazo y los problemas de seguridad son un desafío en el campo. Como nuevas actividades se relacionan con las nuevas vías biológicas, un importante componente de descubrimiento terapéutico tendrá que ser la re-evaluación de los productos naturales negativos o menos activos para determinar su uso en relación a los medicamentos.
Una Sonda De Esteroides Conjugados Resonancia Magnética Mejora El Contraste En Los órganos Que Expresan Receptores De Progesterona Y De Tumores in Vivo
Receptores de progesterona (PR) es un biomarcador importante en enfermedades como la endometriosis y de mama, ovario y cáncer uterino que se asocia con pronóstico de la enfermedad y la eficacia terapéutica. Mientras que el estado del receptor está determinado por los ensayos de inmunohistoquímica, el desarrollo de las relaciones públicas no invasivos agentes de imagen podría mejorar la caracterización molecular, las decisiones de tratamiento y control de la enfermedad. ProGlo, una progesterona conjugado con imágenes de resonancia magnética nuclear (RMN) como agente de cambio, se evaluó in vivo para determinar si se dirige y mejora la intensidad de la señal en los órganos y los tumores que expresan altos niveles de relaciones públicas. Un estudio de la distribución de tejidos indicó que ProGlo se acumula en el útero PR-rica, que fue confirmado por los estudios in vivo de imágenes. Imágenes ex vivo de estos órganos reveló que ProGlo se distribuyó en las subestructuras que expresan altos niveles de RP. En modelos de tumores de xenoinjertos, ProGlo se recogió en un grado mayor que el nonfunctionalized Gd DO3A en los tumores, particularmente en PR (+) tumores. La capacidad para acumular y aumentar la intensidad de señal en PR (+) órganos y tumores sugiere que ProGlo puede ser una sonda de resonancia magnética prometedor para PR (+) enfermedades.
La Evaluación De Las Células Progenitoras Del Cáncer De Ovario: Análisis De Los Modelos Animales Actuales
El cáncer de ovario seroso es uno de los tumores malignos ginecológicos más letales. Avances en el diagnóstico y la terapéutica eficaz para esta enfermedad se ven obstaculizadas por la ambigüedad en cuanto a los orígenes celulares de este histotype de cáncer de ovario, así como los limitados modelos animales adecuados para analizar las etapas tempranas de la enfermedad. En este informe, vamos a revisar los actuales modelos de animales con respecto a las dos células progenitoras propuestas para el cáncer de ovario seroso, el epitelio ovárico superficial y el epitelio de las trompas de Falopio.
El Impacto De La Ovulación En Las Células Epiteliales Del Tubo De Falopio: Evaluación De Tres Hipótesis De Conexión Ovulación Y Cáncer De Ovario Seroso
El cáncer de ovario es el cáncer ginecológico más letal que afecta a las mujeres estadounidenses. Las hipótesis actuales sobre la etiología del cáncer de ovario proponer que una reducción en el número de ovulaciones vida disminuye el riesgo de cáncer de ovario. Advanced acciones carcinoma seroso varios biomarcadores con células epiteliales del tubo de Falopio, lo que sugiere que algunas formas de cáncer de ovario puede tener su origen en la trompa de Falopio. En la actualidad, el impacto de la ovulación en el epitelio de las trompas es desconocido. En ratones CD1, la ovulación no aumentó trompas de células epiteliales (TCE) la proliferación medida por incorporación bromodesoxiuridina y tinción nuclear de proliferación celular antígeno en comparación con los animales no estimulados. En ratones superovuladas, un aumento en el número de pro-inflamatorias los macrófagos se detectó en el oviducto. La ovulación también aumentó los niveles de fosfato γH2A.X en TEC, lo que indica que estas células eran susceptibles a la rotura de la doble cadena de ADN después de la ovulación. Para determinar qué componentes de la ovulación contribuido al daño del ADN en la trompa de Falopio, una línea celular inmortalizada babuinos TEC y un sistema de cultivo en tres dimensiones de órganos para el ratón del oviducto y las trompas de Falopio babuino se han desarrollado. TCE no proliferan o mostrar daño en el DNA aumento en respuesta a las gonadotropinas o estradiol solo in vitro. El estrés oxidativo generado por el tratamiento con peróxido de hidrógeno o medio de macrófagos acondicionado aumenta el daño del ADN en el TEC en la cultura. La ovulación puede afectar el epitelio de las trompas de Falopio mediante la generación de daños en el ADN y estimular la infiltración de macrófagos, pero no aumenta la proliferación a través de gonadotropina de señalización.
Inhibidores De La Glucógeno Sintasa Quinasa 3β Inducir Apoptosis En Células De Cáncer De Ovario E Inhibir in Vivo El Crecimiento Del Tumor
El cáncer de ovario es el cáncer ginecológico más letal entre las mujeres estadounidenses. Paclitaxel / carboplatino es el tratamiento farmacológico actual para tratar el cáncer de ovario, pero la mayoría de las mujeres desarrollan resistencia a los medicamentos y la recurrencia de la enfermedad, que requiere estrategias alternativas para el tratamiento. Un posible objetivo molecular para la terapia del cáncer es la glucógeno sintasa quinasa 3β (GSK3), una quinasa aguas abajo en la vía de señalización Wnt que está sobreexpresada en cáncer de ovario seroso. Nuevos maleimida inhibidores basados en GSK3 (GSK3βi) fueron sintetizados, seleccionados y probados in vitro utilizando SKOV3 y OVCA432 líneas celulares de cáncer de ovario seroso. Desde un panel de 10 inhibidores, GSK3βi 9ING41 se encontró que era el más eficaz in vitro. 9ING41 apoptosis inducida como se indica por 4 ',6-diamino-2-fenilindol-positivo condensación nuclear, poli (ADP-ribosa) escisión de la polimerasa, y desoxinucleotidil transferasa terminal dUTP tinción nick fin de etiquetado. El mecanismo de la apoptosis fue a través de la caspasa-3 división. Fosforilación GSK3βi upregulated del residuo de serina inhibidora de GSK3 en OVCA432 y SKOV3 líneas celulares y también inhibe la fosforilación de la sintasa de destino glucógeno aguas abajo. Un estudio de xenoinjertos en vivo utilizando células SKOV3 demostrado que la progresión del tumor se vio obstaculizada por 9ING41 in vivo. La dosis máxima tolerada para 9ING41 fue mayor que 500 mg / kg en ratas. El análisis farmacocinético mostró 9ING41 tener una biodisponibilidad de 4,5% y para estar bien distribuidas en los tejidos. Por lo tanto, los inhibidores de GSK3 solos o en combinación con los fármacos existentes pueden obstaculizar el crecimiento de cánceres ováricos serosos.
Síntesis Y Evaluación Biológica De Los Solubles En Agua Progesterona Conjugados Con Sondas De Resonancia Magnética De La Hormona De Cánceres Relacionados Con El
Receptores de progesterona (PR) está fuertemente asociada con pronóstico de la enfermedad y la eficacia terapéutica de la hormona relacionada con enfermedades como la endometriosis y de mama, ovario y cáncer uterino. Estado de los receptores está determinado por los ensayos de inmunohistoquímica. Sin embargo, no invasivos PR agentes de imagen podría mejorar la detección de la enfermedad y ayudar a dilucidar las vías moleculares patológicos, dando lugar a nuevas terapias y modelos de enfermedades animales. Una serie de solubles en agua PR-selectivas de resonancia magnética (MRI) sondas fueron sintetizados utilizando Cu (I)-catalizada química clic y evaluó in vitro e in vivo. Estos agentes demostraron la activación de las relaciones públicas in vitro y la acumulación preferencial en Puerto Rico (+) en comparación con el PR (-) las células humanas del cáncer de mama con baja toxicidad. En los modelos de xenoinjerto de tumor, los agentes demostraron una mayor intensidad de la señal en Puerto Rico (+) los tumores en comparación con el PR (-) los tumores. Los resultados sugieren que estos agentes pueden ser prometedores sondas de resonancia magnética para PR (+) las enfermedades.
