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Articles by Katalin Kariko in JoVE
JoVE Neuroscience
自体血液的注入模型小鼠自发性脑出血
1Department of Neurology, University of Connecticut Health Center, 2Department of Neurology, School of Medicine, University of Pennsylvania, 3Department of Neurosurgery, Hartford Hospital, 4Department of Neurosurgery, School of Medicine, University of Pennsylvania
自体血注射在本议定书中所描述的小鼠脑出血模型，采用双色注塑技术，以最大限度地减少了针轨道，在泵送系统中没有抗凝血剂的血液回流的风险，并消除了所有死在空间和系统扩展的油管。
Other articles by Katalin Kariko on PubMed
胞外 MRNA 由刺激肿瘤坏死因子-α 分泌和通过核苷酸受体信号诱导树突状细胞的激活。
我们以前表明树突状细胞 (DC) 脉冲编码抗原 mRNA 与导致加载的两个主要组织相容性复合类二抗原演示文稿通路和激活信号的传递。共培养对 mRNA 脉冲 DC 与 T 细胞导致烈性的主要免疫应答的诱导。直流，并认识到外国抗原通过模式识别受体，还必须响应改变的自我，改变或膜层感染的细胞。这是通过细胞表面的受体，识别产品的炎症和细胞死亡。在本报告中，我们的特点是利用胞外 mRNA 要激活 DC 的两个信号通路。此外，一种新型的配体，poly(A)，确认介导信号通过受体，它可以抑制由百日咳毒素和苏拉明和可以由 ATP 和 ADP，暗示 P2Y 型核苷酸受体迟钝。讨论此信号活性疫苗设计中的作用和 mRNA 发表受损细胞中诱导的免疫反应能力的潜在影响。
血小板因子 4 将绑定到低密度脂蛋白受体，并扰乱了吞机械，导致细胞表面低密度脂蛋白的保留。
不详细特点是细胞代谢的粥样脂蛋白对血小板的影响。因此，我们对血小板因子 4 (pf4 型水轮式），发表在高浓度活化血小板，对吸收和降解的低密度脂蛋白 (LDL) 低密度脂蛋白受体 (低密度脂蛋白-R) 通过阳离子蛋白的影响进行调查。低密度脂蛋白-R-依赖绑定、 内化和退化的低密度脂蛋白的细胞分别抑制 50%、 80%和 80%，血小板因子 4 的加法。Pf4 型水轮式绑定具体到配体结合域的重组可溶性低密度脂蛋白-R (半大约束力 0.5 microg 毫升 pf4 型水轮式） 和部分 （大约 50%） 抑制低密度脂蛋白的绑定。内化和降解的血小板因子 4 的抑制作用所需的单元格关联蛋白聚糖，主要是那些富含硫酸软骨素的存在。Pf4 型水轮式变种与受损的肝素绑定缺乏抑制低密度脂蛋白的能力。Pf4 型水轮式、 可溶性低密度脂蛋白-R，和低密度脂蛋白形成与细胞表面蛋白醣三元配合物。Pf4 型水轮式诱导表面涂层坑，与未关联的 multimolecular 集群中的成纤维细胞的低密度脂蛋白脂配合物保留所评估的免疫电镜。这些研究证明 pf4 型水轮式抑制低密度脂蛋白体外的分解代谢部分争夺绑定到低密度脂蛋白-R，通过促进互动与单元格关联的硫酸软骨素蛋白多糖，并通过扰乱正常的低密度脂蛋白脂复合物吞贩卖人口。低密度脂蛋白在细胞表面上的保留可能便利致凋亡的修改和血小板在动脉粥样硬化发病中支持更大的作用。
小干扰 RNA 介导的 RNA 干扰技术的 Hiv-1 感染的抑制作用。
RNA 干扰 (RNAi) 是古代的抗病毒反应处理 dsRNA 并将其关联到核酸酶的复杂的序列同源性与标识 RNA 和具体裂它。我们表现出具体由 21 bp dsRNA 介导的 RNAi 抑制 hiv-1 感染的永久性细胞系和原 CD4(+) T 细胞。抑制艾滋病毒复制是用上清液、 北部污点分析和 DNA 聚合酶链反应 p24 Gag 蛋白含量产品的逆转录来衡量的。抑制作用发生在两个点在病毒的生命周期，融合后逆转录之前和期间从综合寄主的病毒 RNA 的转录。感染艾滋病毒的治疗激活 CD4(+) T 细胞与衍生氟化 siRNA 的耐核糖核酸酶 A 产生了类似的艾滋病毒感染的抑制作用。此外，无法发送衍生物的 siRNA，未经脂质体络和血清存在。RNAi 抗 hiv-1 活性的鉴定提出了研究病毒感染和概念验证的 RNAi 在哺乳动物细胞中的抗病毒活性的新方法。
MRNA 是 Toll 样受体 3 内源性配体。
Toll 样受体 (TLRs) 是基本的信号受体的先天免疫系统。他们被激活与病原体或受伤的宿主细胞和组织相关的分子。TLR3 表明对双绞 (ds) RNA，许多病毒复制中介作出反应。在这里我们提出证据被释放或坏死细胞与关联或生成的体外转录的外源 RNA 还刺激 TLR3 和诱导免疫激活。为了评估 RNA 介导 TLR3 激活，生成了人胚肾 293 细胞稳定表达 TLR3 和含荧光素酶因子活化依赖核记者。公开这些细胞体外转录 RNA 对导致 TLR3 依赖诱导荧光素酶活性及白细胞介素-8 分泌。治疗体外转录 mRNA 激活核因子-活化 TLR3 通过是剂量依赖性和涉及的酪氨酸磷酸化的进程。此外，体外转录的自然或 2'-氟取代 mRNA 诱导表达的 TLR3、 干扰素调控因子-1、 肿瘤坏死因子-α 和白细胞介素-1 受体相关激酶-M mRNA 在人树突状细胞 (Dc)。DCs 回应 mRNA 治疗表示激活标记和拮抗 TLR3 特异性抗体抑制了这种成熟。内源性 RNA 被释放或伴坏死细胞也刺激的 DCs，通往干扰素分泌，可以废除坏死细胞的核糖核酸酶预处理。这些结果表明 RNA，有可能通过二级结构是烈性的主机派生 TLR3 的活化剂。这一发现具有潜在的生理意义，因为 RNA 逃避受损组织或细胞可作为诱使或以其它方式调节免疫反应的 TLR3 内源性配体的 endocytosed 内所载。
切削刃： 区别 RNA 含细菌与总理为高级别由树突状细胞的白细胞介素-12 分泌的真核结构特征的先天免疫系统。
来自细菌，但不是真时人单核细胞来源的树突状细胞前体转染, 的 RNA 诱导树突状细胞成熟刺激结合高级别白细胞介素-12 分泌。在模仿的结构缺乏长 3'-poly(A) 细菌基因表达的体外转录 mRNA 尾同样诱导分泌白细胞介素-12，但此属性将丢失后高效酶 3'-polyadenylation。除其他测试的 Rna，只有 polyuridylic 酸诱导白细胞介素-12 p70。这种 RNA 反应现象出现生理上有别于对 dsRNA 的经典定义响应。RNA 转染 APC 也分化 T 细胞依赖的白细胞介素-12 对干扰素-γ (高) IL-5 （低） Th1 型，建议适当结构的 RNA 的检测和倾斜向那些最佳的免疫反应之间的联系的方式适合于控制细胞内微生物。RNA 结构来模拟细菌形态构成新型疫苗战略产生极化的 Th1 型免疫反应。
小分子干扰 Rna 调解独立序列的基因抑制和诱发免疫激活的信号通过 Toll 样受体 3。
小干扰 (si) 和短发夹环 (sh) RNAs 诱使鲁棒退化的同源基因，使一个有力的工具，以实现在哺乳动物细胞基因沉默。沉默的 siRNAs 广泛使用，因为被认为是非常具体的有针对性的基因，尽管最近一份报告表明，siRNA 也诱使信号通过类型我干扰素系统。时人胚肾 293 (人胚胎肾 293) 或角质形成细胞 (HaCaT) 细胞株或主树突细胞或巨噬细胞被转染 siRNA 或 shRNAs、 nontargeted 基因表达的抑制被检测到。此外，siRNA 和 shRNA，独立于它们的序列，发起了包括干扰素 α 和肿瘤坏死因子-α 生产和增加的 HLA-DR 表达，转染的巨噬细胞和树突状细胞的免疫激活。SiRNAs 诱导干扰素 β 在人胚胎肾 293 和 HaCaT 细胞中的低，但意义重大，水平。当人胚胎肾 293 细胞外源的 Toll 样受体 3 (TLR3) 和增加的分泌干扰素 β 的被抑制的抑制剂 TIR 域包含适配器诱导干扰素 － β 干扰素调节因子 3 信号相连 TLR3 适配器蛋白共表达，这些细胞因子的分泌大大增加。尽管 siRNA 和 shRNA 基因的组合式表示一个新的和功能强大的工具，不是没有非特异性的影响，我们表现出部分介导通过 TLR3 信号。
短干扰 RNA 介导的单纯疱疹病毒类型 1 基因的表达和功能中抑制人角质形成细胞的感染。
RNA 干扰 (RNAi) 是抗病毒的机制，当双链 RNA 分解成碎片，称为短干扰 RNA (siRNA)，素诱导的基因沉默复杂的酶被激活。我们应用 RNAi 对单纯疱疹病毒 1 型 (HSV 1) 基因、 介导的细胞蔓延的糖 E、 蛋白与免疫逃逸的。在感染体外模型中，人类角质形成细胞被特定的糖蛋白 E 的 siRNA 转染，然后感染野生型单纯疱疹病毒 1。RNAi 介导的基因沉默转载小牌匾表型的 gE 删除突变病毒。基因打靶的特殊性表现在流式细胞术和北部污点分析。外源 siRNA 可以期间活动性感染体外通过 RNAi 抑制单纯疱疹病毒 1 糖蛋白 E 表达式和函数。这项工作作为研究的单纯疱疹病毒的遗传工具建立 RNAi 和 rnai 技术作为一种新型的抗病毒治疗的发展提供了基础。
外源 SiRNA 介导的信号通过 Toll 样受体 3 的独立序列的基因抑制。
RNA 干扰 (RNAi) 是一个功能强大的方法，具体在哺乳动物从真菌生物体中找到其机械序列依赖的方式抑制基因表达。哺乳动物细胞 Toll 样受体 3 (TLR3) 通过制订了基因抑制往往诱发病毒复制包含的双链 RNA （dsRNA） 识别序列独立系统和感应的 I 型干扰素合成。干扰素激活一套包括抑制蛋白质合成的 dsRNA 活化蛋白激酶和 2'-5'-寡合成酶，产生一种核糖核酸酶 L 在 RNA 序列独立的方式激活产品的基因的转录。我们观察到 21 bp dsRNA，关键的 RNAi，调解不仅诱使序列特异性基因抑制，但也信号 TLR3 诱使 I 型干扰素和激活序列独立抑制蛋白质合成的和 mRNA 降解的增强。此序列独立制止演示了这两个外部管理的报告基因以及期间针对病毒基因在急性单纯疱疹病毒类型的过程中我的角质形成细胞的感染。TLR3 由许多小学单元格类型和单元格的行表示，此序列独立制止应在设计中使用小干扰 RNA 介导的基因抑制实验。
对大鼠脑局部缺血耐受的诱导： 皮层毁损和传播抑郁症之间的分离。
皮质中的氯化钾应用以前一直所示诱导耐受到随后的脑缺血发作。氯化钾触发经常发作的皮层和生产皮质应用现场的小病灶。若要确定是否仅皮质病变是不足以诱导缺血耐受，作者用于 5-mol/L 氯化钠前提 — — 3 天前永久的大脑中动脉闭塞大鼠脑。氯化钠如果没有唤起皮层产生应用程序站点小病变。预处理 5-mol/L 氯化钠大大减脑血流减少毒后大脑中动脉闭塞和皮质梗死体积减少了 35%。结果显示，小皮质病变本身，是不足以诱导耐受的缺血。
抑制 Toll 样受体与细胞因子信号转导 — — 缺血耐受在一个统一的主题。
缺血性脑损伤引发急性炎症，加剧了原发性脑损伤。先天免疫系统的激活是这个炎症反应的一个重要组成部分。炎症发生通过行动促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子、 白介素-1 β、 IL-6、 改变血流量和增加血管通透性，从而导致二次缺血和免疫细胞在脑中积累。这些细胞因子的生产是由通过 Toll 样受体 (TLRs) 识别主机派生的分子从受伤的组织和细胞中释放的信号启动。近日，了解先天免疫系统的规管方面取得了重大进展，尤其是 TLRs。 负反馈抑制剂 TLRs 和炎症细胞因子的信号机制现在已经确定并为特点。也是明显的脂筏在膜中存在，并在受体介导的炎症信号事件中发挥作用。在目前审查，使用此新的可用的大量的知识，我们看新鲜的缺血耐受的研究。基于这种分析，我们认识到缺血耐受和内毒素容忍，特点是对脂多糖 (LPS) 低反应性免疫抑制状态惊人的相似性。这个比喻，并考虑到最近的发现与耐受的分子机制有关的因为我们假定的单反和促炎细胞因子信号转导抑制作用极其有助于大脑和其他器官缺血耐受。缺血耐受是各种各样的预处理的刺激所致的保护机制。可以与两个时空配置文件建立宽容： (i) 迅速窗体的触发器内分钟和 (ii) 延迟窗体的保护发展需要几个小时或几天，并要求 de novo 蛋白质合成诱导免疫耐受缺血。快速的容忍形式被通过与细胞膜的流动性，造成中断导致单反/细胞因子信号转导通路抑制脂筏的直接干涉。延迟容忍的形式，预处理的刺激首先触发单反/细胞因子炎症通路，导致炎症但也同时上调的反馈抑制炎症。这些抑制剂，其中包括信号抑制剂、 受体诱饵和抗炎细胞因子，减少缺血以后发病的炎症反应。这种新型的缺血耐受的分子机制解释强调了今后调查的预防和治疗脑卒中及相关的疾病的新途径。
抑制 Toll 样受体的 RNA 识别： 核苷类改性和 RNA 的进化起源的影响。
DNA 和 RNA 刺激通过激活 Toll 样受体 (TLRs) 哺乳动物的先天免疫系统。然而，DNA 甲基化的 CpG 序列，其中包含不是刺激性的。选择核苷中自然产生的 RNA 也甲基化或以其他方式修改，但这些改动的免疫调节作用仍然是未经测试。我们显示 RNA 信号通过人类 TLR3、 TLR7，和 TLR8，但修饰的核苷 m5C，将纳入 m6A、 m5U、 s2U 或假尿苷 ablates 活动。树突状细胞 (Dc) 遭受这种修改后的 RNA 快递比那些治疗未修改的 RNA 大大减少细胞因子和激活标记。先天对 Dc 和单反表示单元格被激活细菌和线粒体 RNA，但不是由哺乳动物的总 RNA，这是丰富中修饰核苷。我们得出的结论核苷类修改取消激活 DCs RNA 的潜力。先天免疫系统可能因此检测 RNA 缺乏核苷类修改作为对细菌或坏死组织有选择地反应的手段。
使用高渗盐溶液的皮质应用脑预处理： 编码抑制炎症因子的分泌表达上调。
以前的研究表明本地应用程序的高渗氯化钾或氯化钠到大脑皮层诱导免疫耐受缺血以后发病。本研究的目的是要确定是否应用这些盐增加的编码抑制炎症因子的分泌水平。高渗氯化钾或氯化钠，被申请到大鼠额叶皮质 2 h。后恢复时间最多 24 个 h，选定 mRNAs 的水平衡量在额叶的样本中和顶叶皮层使用北螺栓。应用高渗氯化钾导致的肿瘤坏死因子 (TNF)、 tristetraprolin (TTP)、 抑制细胞因子信号转导-3 (SOCS3) 和脑源性神经营养因子 (BDNF) 编码的 mRNA 水平迅速而普遍的增长和 24 h 延迟的感应睫状神经营养因子 (CNTF) mRNA。高渗氯化钠的应用程序在被局限于额叶皮层的 mRNA 水平造成改建。在这个区域，氯化钠的应用迅速增加的编码肿瘤坏死因子、 TTP，和 SOCS3，但不是源性神经营养因子的基因表达水平和造成 CNTF mRNA 延迟的感应。这些结果提高了可能性，抑制炎症的表达上调后预处理可能有助于对缺血耐受的诱导。
Gp340 对人类生殖器黏膜上皮细胞表示绑定艾滋病毒 1 信封蛋白并有利于病毒传播。
在妇女中艾滋病毒性传播，可能已受感染的第一个单元格是黏膜下 CD4(+) T 细胞和树突状细胞的生殖器呼吸道。艾滋病毒是由上皮细胞层，可以绕过健康和不变的情况下，即使分开这些目标单元格。若要了解如何艾滋病毒穿透这一障碍，我们确定宿主蛋白，gp340，这表示对生殖器的上皮细胞并绑定通过特定蛋白质-蛋白质相互作用的艾滋病毒信封。此绑定允许否则 subinfectious 数量来有效地感染艾滋病毒的目标单元格，并允许此感染发生在较长的时间后绑定。我们的研究结果表明病毒性条目在异性性接触传染艾滋病毒在绑定到完整的生殖器黏膜上皮细胞，然后促进感染的初始事件期间的一种机制。理解这一步开始的感染会允许发展的工具和方法用于阻止艾滋病毒的传播。
自然发生的修改核苷类抑制免疫刺激活性的 RNA： 对治疗 RNA 发展的影响。
DNA 和 RNA 通过触发各种传感器，包括 Toll 样受体 (TLRs) 刺激哺乳动物的先天免疫系统。TLR9 因暴露于 DNA，同时 TLR3，信号响应 RNA TLR7 和 TLR8。大多数 DNA 和 RNA 来自自然源包含修饰的核苷。CpG 序列在 DNA 甲基化阻止 TLR9 信号。只是最近才讨论了类似的效果是否可以归因于 RNA 中的核苷类修改的问题。这次审查的特点自然发生的 RNA 的核苷类修改和激活免疫细胞和 TLRs。 包含修饰的核苷的 Rna RNA 的能力对其影响的几个，因此缺乏免疫激活的属性，在临床应用中具有潜在的重要性。
通过 TLR3 SiRNA 序列和独立于目标的血管生成抑制。
小分子干扰 RNA (siRNA) 针对血管内皮生长因子-A (VEGFA) 或致盲脉络膜新生血管患者 (CNV) 从年龄相关性黄斑变性，及其受体 VEGFR1 （也称为 FLT1），临床试验的前提是通过细胞内 RNA 干扰 (RNAi) 基因沉默。我们显示相反 CNV 抑制是 siRNA 类效果： 21 核苷酸或更长时间的 siRNAs 针对非哺乳动物基因、 非表达基因、 非基因组序列、 pro 和抗血管生成的基因和 RNAi 无能 siRNAs 所有在同等的 siRNAs 针对 Vegfa 或 Vegfr1 没有偏离目标 RNAi 或干扰素-α/β 激活小鼠中隐含 CNV。非目标 （针对非哺乳动物基因） 和目标 （针对 Vegfa 或 Vegfr1) siRNA 抑制 CNV 通过细胞表面 toll 样受体 3 (TLR3）、 其特里夫，适配器和诱导干扰素和白细胞介素-12。非目标 siRNA Vegfa siRNA 作为有效地抑制小鼠皮肤新生血管。siRNA 抑制新生血管的所需最小长度 21 核苷酸，在模式 2： 1 TLR3 RNA 复杂衔接的必要性。向胞外 siRNA 介导的毒性，促进遗传药理学的个体化的治疗难治性脉络膜血管内皮细胞从人民表达 TLR3 编码变量 412FF。多个血管内皮细胞类型表示表面 TLR3，指示泛型 siRNAs 可能治疗血管疾病，影响到世界人口的 8%和 siRNAs 可能诱使血管或免疫作用的意料之外。
纳入到 MRNA 假尿苷产量提高翻译能力和生物稳定性优越 Nonimmunogenic 向量。
重要蛋白在体外转录基因编码生理治疗应用的巨大潜力。然而，以其目前的形式，表达是不可行的临床使用由于其活性和免疫原性的性质。在这里，我们调查是否自然修饰核苷酸纳入成绩单将赋予到 mRNA 的增强型生物属性。我们发现包含 pseudouridines mRNAs 转化能力高于未修改 mRNAs 进行测试时在哺乳动物细胞和裂解或静脉注射方式到小鼠在 0.015 0.15 毫克/千克剂量。已交付的 mRNA 和编码的蛋白质可能在脾脏在检测到 1、 4 和 24 小时后注射，在这两种产品被显著较高的级别时假尿苷含 mRNA 管理。即使是在较高的剂量，只有未被修改的 mRNA 是免疫原性，诱导干扰素 α (干扰素 α) 高血清。这些结果表明，修饰核苷是加强稳定性和 mRNA 的翻译能力，同时减少其体内的免疫原性的有效途径。所赋予的假尿苷的性能改进使这种 mRNA 基因置换和疫苗接种有前途工具。
纳入到 MRNA 假尿苷减少救济款激活，从而增强了翻译。
先前的研究显示其卤化过程替换为 pseudouridines ； 就会提高翻译水平的体外转录信使 RNA （mRNA）然而，这种增强的原因尚未确定。在这里，我们可以展示包含尿苷的体外转录激活 RNA 依赖的蛋白激酶 (救济款），然后 phosphorylates 翻译起始因子 2-alpha (eIF-2α），并抑制翻译。相比之下，包含假尿苷的体外转录的 mRNAs 在较小程度，翻译的假尿苷含激活救济款分泌不压抑。RNA 下拉菜单化验证明含尿苷的 mRNA mRNA 与假尿苷比更有效地绑定的救济款。最后，救济款的作用是通过显示含有假尿苷和尿苷 RNAs 同样翻译救济款挖空单元格进行验证。这些结果表明分泌含有假尿苷，相比那些含有尿苷，增强的翻译介导减少激活的救济款。
DICER1 赤字诱导 Alu RNA 毒性的年龄相关性黄斑变性。
地理萎缩 (GA) 治愈的高级形式的年龄相关性黄斑变性，结果从视网膜色素上皮 (RPE) 细胞变性。在这里我们显示的 microRNA (米尔)-加工的酶 DICER1 GA，与人类的视网膜色素上皮和 Dicer1，该条件消融治疗减少但不是七其他米尔加工酶、 诱导小鼠视网膜色素上皮变性。DICER1 组合式诱导 Alu RNA 在人视网膜色素上皮细胞和 Alu 样 B1 和 B2 RNAs 在小鼠视网膜色素上皮的积累。Alu RNA 增加与 GA，人类的视网膜色素上皮和此致病性 RNA 诱导人视网膜色素上皮细胞毒性和小鼠视网膜色素上皮变性。针对 Alu/B1/B2 RNAs 的反义寡核苷酸防止 DICER1 耗竭诱导视网膜色素上皮变性尽管全球米尔下调。DICER1 降低 Alu RNA 和此消化的 Alu RNA 不能诱导小鼠视网膜色素上皮变性。这些研究结果揭示涉及反转录转座子誊本退化 DICER1 米尔独立细胞生存功能、 表明 Alu RNA 可以直接导致人体病理，并确定新的目标失明的主要原因。
中性粒细胞消耗减少了单核细胞浸润和改善实验性脑出血后的功能的结果。
炎症后脑出血，有助于继发性损伤和神经元丢失，但个别免疫人口在这些进程中的作用尚不清楚。在小鼠模型中，自体血注入纹状体是关联与中性粒细胞、 单核细胞、 和树突状细胞组成激烈炎性细胞浸润。嗜中性粒细胞的选择性枯竭导致减少浸润的单核细胞和改进功能结果在第 3 天 post-hemorrhage。这些结果表明中性粒细胞浸润到该站点的出血有助于脑损伤可以通过直接的细胞损伤或征聘的单核细胞。
RNA 中的核苷类修改限制 2'-5'-寡合成酶的激活，并增加抗性的核糖核酸 L.劈裂
干扰素诱导酶 2'-5'-寡合成酶 （美洲组织） 和核糖核酸酶 L 是先天免疫参与感官的关键组成部分和效应功能后病毒感染。根据绑定目标 RNA，美洲国家组织被激活产生 2'-5'-链接 oligoadenylates (2-5A) 激活核糖核酸酶 L，然后裂单绞自我与非自我 RNA。目前在蜂窝成绩单的修饰的核苷表明可抑制活化的几种 RNA 传感器。在这里，我们表现出体外转录、 未修改的 RNA 激活美洲国家组织、 诱导核糖核酸酶 L 介导核糖体 RNA (rRNA) 劈裂和核糖核酸 L.的快速切割相比之下，包含修饰的核苷的 RNA 激活美洲国家组织效率较低，并诱使有限的 rRNA 劈。核苷类的修改还通过核糖核酸酶 L(-/-) 细胞的核糖核酸 L.检查翻译使 RNA 抗劈裂和小鼠证实核糖核酸酶 L 活动减少了未修改的 mRNA，不遵守与改性 mRNA 的翻译。此外，含有核苷修饰假尿苷的 mRNA 再翻译和扩展的半衰期。修饰核苷在 RNA 的观察减少 2-5A 通路激活连接美洲国家组织和核糖核酸酶 L 到 RNA 传感器和 RNA 修改，确认的核苷类修改在抑制免疫识别 RNA 的作用时，其职能是有限的效应器的列表中。
生成用于治疗最优的 MRNA： 高效液相色谱法分离纯化消除了免疫激活并提高了翻译的修饰核苷、 蛋白质编码基因表达。
在体外转录 mRNA 潜力巨大治疗暂态表示编码的蛋白质无病毒性和以 DNA 为基础构造的不利影响。哺乳动物细胞，但是，包含天然免疫系统，必须考虑在代治疗 RNA 的 RNA 的传感器。既减少了先天免疫激活和增加翻译的 mRNA，但残余感应的修饰核苷的纳入 I 型干扰素 (IFNs) 和促炎细胞因子仍然是。我们确定的污染物，包括双链 RNA，在体外转录中修饰核苷类 RNA 负责先天免疫激活和高性能液相色谱法 (HPLC) 结果不会导致 IFNs 和炎性细胞因子和各级 10 到 1000 倍更多地在原代细胞翻译的 mRNA 在其去除。虽然未修改的 mRNAs 被翻译大大好后纯化，他们仍然诱导分泌细胞因子的高的水平。高效液相色谱法纯化修饰核苷 mRNA 是一个强大的矢量从体内干细胞生成前到体内基因治疗的应用程序。
Toll 样受体 4 贡献后脑出血的预后较差。
脑出血 (ICH) 是在哪个血肿炎症有助于神经元损伤和功能残疾造成的破坏性脑卒中子类型。组织学，该区域将成为渗透与中性粒细胞和激活小胶质细胞神经元丢失，其次但有关的协调这些事件的免疫信号所知甚少。这项研究旨在确定在 ICH 和及其对神经行为结果的影响之后的 Toll 样受体 4 （TLR4） 非特异性免疫反应中的作用。
在小鼠注射假尿苷含 MRNA 编码促红细胞生成素 Submicrogram 数量增加红细胞生成。
体外转录 mRNA 的优化研究进展使 mRNA 介导治疗更接近于现实。在培养细胞，我们最近取得了高水平的高性能液相色谱法 (HPLC) 翻译-纯净，在体外转录分泌含有修饰核苷类假尿苷。重要的是，假尿苷呈现 mRNA 非免疫原性。在这里，使用促红细胞生成素 (EPO)-编码过境 mRNA mRNA 络合，我们计算这新一代的 mRNA 在体内。100 单注射吴 （0.005 毫克/千克） mRNA 显著的 6 小时升高小鼠血清 EPO 水平和水平维持 4 天。在比较中，包含尿苷的 mRNA 产生 10-100 倍的较低级别的 EPO 持久的只有 1 天。从假尿苷 mRNA 翻译的 EPO 是功能，造成网织红细胞计数和乳猪的显著增加。只要 10 吴增加了一倍的 mRNA 网织红细胞数。100 每周注射 EPO mRNA 吴足以增加至 57%，与继续治疗保持 43 从红细胞。甚至有大量的假尿苷 mRNA 注入，没有炎症细胞因子被血浆中可检测到。使用猕猴，我们还可以检测大大增加血清 EPO 各级之后的恒河猴的腹腔注射 EPO mRNA。这些结果表明高效液相色谱法净化、 假尿苷含有基因编码蛋白质药物临床应用的巨大潜力。
