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- 분리 및 Neurosphere 분석을 사용하여 인간 Glioblastoma의 Multiforme 종양 세포의 확장
- 카르복시 Fluorescein Succinimidyl 에스터 (CFSE)를 사용 인간 Glioblastoma의 속도가 느린 - 나누면 전지의 식별 및 분리
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Articles by Loic P. Deleyrolle in JoVE
JoVE Neuroscience
분리 및 Neurosphere 분석을 사용하여 인간 Glioblastoma의 Multiforme 종양 세포의 확장
1Department of Neurosurgery, University of Florida, 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences
이 비디오 프로토콜은 neurosphere 분석 문화 방법을 사용하여 수술 resected 인간 glioblastoma의 mutliforme (GBM) 종양 조직에서 세포처럼 고립과 줄기의 확장을 보여줍니다.
JoVE Clinical and Translational Medicine
카르복시 Fluorescein Succinimidyl 에스터 (CFSE)를 사용 인간 Glioblastoma의 속도가 느린 - 나누면 전지의 식별 및 분리
1Department of Neurosurgery, The University of Florida, 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran
이 비디오 프로토콜은 세포 분열의 주파수에 따라 인간 glioblastoma의 셀의 다른 하위 집단의 식별 및 분리를위한 형광 염료 carboxyfluorescein succinimidyl 에스테르 (CFSE)의 응용 프로그램을 보여줍니다.
Other articles by Loic P. Deleyrolle on PubMed
격리, 확장, 및 성인 포유류 신경 줄기와 조상 세포의 Neurosphere 분석 결과 사용 하 여 차별화
개발 하 고 성인으로 계속 일 하는 동안 줄기 세포 역할은 여러 조직 및 장기에 셀 창세기를 지원 하기 위해 undifferentiated 세포 유형의 저수지로 동작 합니다. 성인, 그들은 필수적인 역할 homeostatic 생리 회전율, 부상 또는 질병으로 인해 손실 된 차별화 된 세포를 대체 하 여. 발견 성인 포유류 중앙 신경 시스템 (CNS)에 있는 같은 셀의 전통적으로 거의 없거나 전혀 없는 재생 능력을가지고 생각 기관 15 년전 혁신적인 재생 치료 학, 신경 생물학에서 예기치 않은 개념을 디자인의 가능성에 문을 열었습니다. 1992 년, 성인 뇌의 전조 세포를 감지 하 우리 고용가 면 대다수의 주요 차별화 된 CNS 셀 생존 하지 않았다 하지만 EGF 반응 세포의 작은 인구 undifferentiated 상태로 유지 되었고 양식 클러스터 확산 이라는 neurospheres 혈 청 무료 문화 시스템 (레이놀즈와와 이즈, 과학 255:1707-1710, 1992). 이러한 neurospheres 수 수 (a) 연결 형태로 수많은 보조 등 또는 (b) 유도, 차별화 하는 CNS의 세 가지 주요 셀 형식 생성. 이 장에서 성인 포유류 NSC 문화 방법론에 간략하게 설명 하 고 재현할 수 문화를 달성 하기 위해 neurosphere 분석 결과의 기술 정보를 제공 합니다.
식별 및 신경 줄기 세포를 열거: 노화와 암에 대 한 응용 프로그램
성인 중앙 신경 시스템에 줄기 세포의 발견 내 생 수리 exogenous 세포 기반 치료제에 대 한 가능성을 암시. Neurosphere 분석 결과 및 신경 식민지 형성 세포 분석 실험과 같은 실험 프로토콜의 개발 신경 줄기 세포 속성의 정확 하 고 의미 있는 조사를 활성화 하 고 노화와 암에 신경 줄기 세포의 역할에 관련 된 메커니즘의 탐사를 허용.
체세포의 결정 및 암 줄기 세포 구 분석 실험을 사용 하 여 대칭과 비율을 Self-renewing
셀 교체를 위한 재생 가능한 소스를 대표 신경 줄기 세포 최근 몇 년 동안에서 상당한 관심을 받고 있다. 그러나 neurosphere 분석 결과 그들을 식별 하는 구체적이 고 확실 한 마커의 부족 때문에 그들의 정량화 및 확장 속도 여전히 확실 한 신경 줄기 세포의 존재를 감지 하는 메서드를 나타냅니다. 여기 신경 줄기 세포 대칭 분할 주파수의 실제 측정 허용 neurosphere 분석 결과의 수학적 해석을 제안 한다. 모델링 알고리즘 영역 시험에서 측정 된 시간 동안 전체 셀 배 확장 사이의 직접적인 상관 관계를 보여 줍니다 및 속도 줄기 세포 대칭 나누기를 통해 확장. 모델은 특히 신경 줄기 세포의 활동 및 기능에 질병 및 치료의 효과 평가 하는 방법을 제공 합니다. 신경 줄기 세포, 우리의 모델링의 운동 기능 평가에 새로운 통찰력을 추가 제공 하는 뿐만 아니라 암 줄기 같은 세포 조직의 항상성 유지 하는 체세포 줄기 세포 종양의 성장을 유지 하기 위해 제안 되었습니다 암 생물학을 contemplates. 실제로, 치료에 저항을 종양 줄기 세포의 효과적인 치료를 위해 필요한 대상을 이러한 세포를 만듭니다. 여기에 제시 된 neurosphere 분석 결과 수학 모델을 사용 하면 속도 평가 악성 줄기 같은 세포 대칭 사단과이 임상 관련 인구의 자기 갱신과 증식 활동에 치료제의 종양 성장과 재발을 드라이브 하는 효과의 평가 통해 확장.
인간의 Glioblastoma의 종양을 시작 셀 라벨을 유지에 대 한 증거
개별 종양 세포 치료 확산 속도, 셀 상호 작용, 전이성 잠재력 및 감도 다양 한 기능적 행동을 표시합니다. 또한, 시퀀싱 학문은 동일한 유형의 개별 환자 종양 사이의 유전적 다양성의 놀라운 수준 설명 했다. 종양이 질으로는 종양 내에서 다양 한 세포 유형 치료는, 다르게 응답할 수 inter-patient 이종 암에 대 한 일반적인 치료의 개발을 방지할 수 있습니다 중요 한 치료 도전을 선물 한다. 종양이 질을 극복 도움이 될 수 있는 전략 중 하나는 이러한 임상 관련 서브를 대상으로 치료의 개발에 대 한 특정 질병 pathologies 드라이브 종양 서브 id입니다. 여기, 우리가 종양을 시작 공략의 모든 특징을 표시 하는 염료를 유지 뇌 종양 인구를 확인 했습니다. Immunocompromised 마우스 제한 희석 이식 분석 결과 사용 하 여, 뇌 종양 세포 레이블 유지 대량 인구를 기준으로 높은 종양 개시 속성 표시. 중요 한 것은, 종양이 레이블을 유지 세포에서 생성 된 주 병의 모든 병 적인 기능을 전시 한다. 함께, 이러한 연구 결과 뇌 종양 세포 염색 유지 종양 개시 능력을 전시 하며 따라서이 공략 대상으로 치료제의 개발에 대 한 실행 가능한 목표 확인.
고립과 성인 신경 줄기 세포의 특성 분석입니다
그것은 오랫동안 성인 두뇌는 새로운 신경 세포를 생성할 수 또는 신경 세포의 복잡 한 회로에 추가할 수 없습니다 생각 하고있다. 그러나, 최근 기술 연구 보여주는 그 성체의 폭발 결과 또는 성체 줄기 세포에서 새로운 신경 세포의 탄생 constitutively; 포유 동물 두뇌의 두 특정 지역에서 발생 즉 帯 그리고 hippocampal가 이랑입니다. CNS 줄기 세포 전시 세 가지 주요 특징: (1) 그들은 "self-renewing," 즉, 스스로 구별할 자손을 생산 하는 이론적으로 무제한 능력 보유 하 고, (2) 그들은 증식 (유사 분열을 겪고) 및 (3) 그들은 다른 신경, 그리고 교 하위를 포함 하 여 CNS의 다른 neuroectodermal lineages multipotent. CNS 줄기 세포와 모든 조상 세포 종류는 광범위 하 게 되 나 "선구자." 이 장에서 우리는 식별, 격리 및 실험적으로 성인 뇌의 줄기 세포를 조작 하는 방법을 설명 합니다. 우리 순진한 뇌 조직에서 전조 세포 배양 준비 하는 방법과 3 단계 패러다임에 달성 그 문화에 있는 다른 세포 유형의 "stemness" 잠재력을 테스트 하는 방법을 설명 합니다. 그들의 격리, 줄기/시 조 세포 neurosphere 문화 확장 됩니다. 단일 셀이이 neurospheres에서 얻은 cytometry 표면 마커 표현에 대 한 정렬 됩니다. 마지막으로, 셀 정렬에서 상 줄기 세포는 소위 신경 식민지를 형성 세포 분석 실험, 줄기와 조상 세포 사이 차별을 허용 하는 대상이 됩니다. 이 장의 끝에 또한 vivo에서 신경 줄기 세포를 식별 하는 방법을 설명 합니다.
미 성숙한 신경 세포에서 신경 줄기 세포 자손의 정화
대규모 확산 및 multi-lineage 차별화 기능 확인 신경 줄기 세포 (NSCs) 치료 응용 프로그램에 대 한 셀의 유망한 신 재생 소스. 그러나 신경 세포 교체를 위한 실용적인 응용 프로그램은 NSC 자손의이 질, 신경 세포, 이다의 우위, 기증자 세포 이식 및 전조 세포의 통제 확산에 대 한 가능성의 불 쌍 한 생존의 상대적으로 낮은 수익률에 의해 제한 됩니다. 이러한 장애를 해결 하기 위해 우리가 murine NSC 자손에서 고도로 농축된 미 성숙한 신경 세포의 생성을 위한 방법을 개발 했습니다. 표준 차별화 절차 흐름 cytometry 선택, 흩어져 빛과 긍정적인 형광 빛 선택을 사용 하 여 바인딩, 근처 순수 (97%) 미 성숙한 신경 세포 인구를 제공 세포 표면 항 체를 기반으로 콘서트에서 적응. 순화 된 신경 세포를 사용 하 여, 우리 성장 요인의 패널을 검사 하 고 그 뼈 전체적 단백질-4 (BMP-4) 시험관에서 셀에 강한 생존 효과 입증 및 그들의 기능 완성도 향상 발견. 이 효과 이식으로 다음과 같은 성인 마우스가 어디 우리가 관찰 이식된 세포의 생존에 2-fold 증가 NeuN 식 3 증가 유지 했다. 또한,는 신경 식민지 형성 세포 분석 실험 (CFCA N), 설명한 신경 세포 인구에 있는 타고 난 NSC 주파수의 64 배 감소 하 고 이식된 기증자 셀 과도 하거나 통제 확산의 흔적을 보여 기반으로 합니다. 제공 하는 기능 NSC 중앙 신 경계에서 세포 대체 요법에 대 한 응용 프로그램을 찾을 수 있습니다와 같은 재생 가능한 소스 로부터 신경 세포 인구를 정의 합니다.
YB 1 다리 신경 줄기 세포와 뇌의 분화와 세포 성장에 있는 그것의 역할을 통해 세포 종양을 시작 합니다
Y 상자 의무적인 단백질 1 (YB-1) upregulated glioblastoma (GBM)을 포함 하 여 많은 인간의 악성 종양에는. 또한 YB 1 신경 줄기 세포 (NSC) 네트워크의 일부인 제안 정상적인 두뇌 개발을 위해 필수적 이다. 여기, 우리 YB 1 마우스 태아 뇌 조직의 帯 (SVZ)에 높은 표현 했다 하지만 하지에 말기 기본 이다 구분 표시. 반대로, YB 1 마네 쥐를 SVZ에 삭스 2 nestin, 그리고 무사시 1 식을 감소 했다. 기본 murine neurospheres YB 1 풍부 했지만, 그 식 교 차별화 중 손실 되었습니다. 교 종양 종종 NSC 마커를 표현 하 고 차별화;를 제어 하는 휴대 전화 제어를 느슨하게 하는 경향이 따라서, 우리는 YB-1 암 세포에서 비슷한 역할을 제공 여부를 해결. YB 1, 삭스 2, 무사시 1, Bmi-1 및 nestin coordinately SF188 셀 및 9/9 GBM 환자 파생 된 기본 뇌 종양을 시작 셀 (BTIC)에 표현 됩니다. Sirna와 YB-1 입을이 NSC 감 식 감쇠, neurosphere 성장 감소 고 GSK3 β의 좌표 손실을 통해 차별화 트리거됩니다. 또한, 1% 혈 청 또는 뼈 전체적 단백질 4 억제 된 YB 1 단백질 식 BTIC의 감 별 법. 마찬가지로, YB 1 식 정상적인 인간의 NSCs. 일관 이러한 관찰, 종양 등급 증가 YB 1 식으로 차별화 하는 동안 손실 된 (n = 49의 경우). YB-1는 또한 Bmi-1 coexpressed (Spearmans 0.80, P > 0.001)와 삭스 2 (Spearmans 0.66, P > 0.001) 고급 gliomas의 282 사례의 분석을 기반으로. 이 단백질 이후에 relapsed GBM 환자의 10/15 (67%)에서 높게 표현 했다. 끝으로, YB-1 correlatively NSC 마커 그것은 세포의 성장을 촉진 하 고 분화 억제 기능으로 표현 한다.
