Unterschiedlichen Rollen Der Verschiedenen Neuronalen Zelladhäsionsmolekül (NCAM) Isoformen Im Synaptischen Reifung Offenbart Durch Analyse Von 180 KDa Isoform NCAM-defizienten Mäusen

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14985425

Aktionspotential Stimulation Zeigt Eine Stärkere Rolle Für P / Q-Calcium-Kanal-abhängige Exozytose in Maus Nebennierengewebe Scheiben Schneiden

Archives of Biochemistry and Biophysics. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15680908

Adrenalen Chromaffinen Zellen Zeigen Beeinträchtigt Granulat Handel Mit NCAM Knockout-Mäusen

Journal of Neurophysiology. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 15800072

NCAM 180 Wirkend über Einen Konservierten C-terminalen Domäne Und MLCK Ist Für Eine Wirksame Übertragung Mit Repetitiver Stimulation

Neuron. Jun, 2005  |  Pubmed ID: 15953420

CD24 Drückt Sich an Myofiber Synaptische Kernen Und Reguliert Die Synaptische Übertragung

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16606832

Die Genen mehrere synaptischen Proteine, einschließlich Acetylcholin-Rezeptoren, Acetylcholinesterase und die Muskel-spezifische Kinase, Moschus, werden selektiv durch wenige Myofiber Kerne positioniert in der Nähe des synaptischen ausgedrückt. Genetische Analyse von Mutanten Mäusen legt nahe, dass zusätzliche Gene, ausgedrückt selektiv an synaptischen Kernen, Muskel-abgeleitete retrograde Signale codieren könnte, die die Differenzierung der motorischen Axon Klemmen zu regulieren. Um Kandidat retrograde Signale zu identifizieren, wir einen Microarray-Bildschirm verwendet, um Gene zu identifizieren, die bevorzugt in der synaptischen Region des Muskels ausgedrückt werden und wir ein solches gen, CD24, weiter analysiert. Wir zeigen, dass CD24, das ein kleines, variabel codiert und stark glykosyliert, Glykosylphosphatidyl (GPI)-verknüpfte Protein, wird vorzugsweise an Myofiber synaptische Kernen in embryonalen und adulten Muskel ausgedrückt und dass CD24-Ausdruck ist auf der Region Muskel unabhängig von Innervation beschränkt. Darüber hinaus zeigen wir, dass CD24 eine Rolle bei präsynaptischen Differenzierung, weil synaptischen Übertragung deprimiert ist und völlig, in zyklischer Weise nach repetitive Stimulation des motorischen Axone CD24 Mutanten Mäusen schlägt fehl. Diese Defizite bei der synaptischen Übertragung, die durch aberrante Reiz-abhängige Aufnahme von AM1-43 von Axonen versehen sind, zeigen, dass CD24 für normale präsynaptischen Reifung und Funktion erforderlich ist. Da CD24 auch in einigen Neuronen angegeben wird, müssen weitere Experimente zu bestimmen, ob vor- oder postsynaptisches CD24 diese Effekte am präsynaptischen Entwicklung und Funktion vermittelt.

Selektive Ausrichtung Der Verschiedenen Neuronalen Zelle Adhäsion Molekül Isoformen Bei Motoneuron Myotube Synapse Bildung in Der Kultur Und Der Wechsel Von Einem Unreifen Ausgereifte Form Der Synaptischen Vesikel Radfahren

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18160656

Charakterisierung der neuromuskulären Synapse Bildung und Funktion in Mäusen fehlt alle Isoformen in neuronalen Zelle Adhäsion Molekül (NCAM) oder nur die 180 Isoform gezeigt, dass die 180-Isoform erforderlich, bei Erwachsenen Synapsen, effektive Übertragung mit repetitive Stimulation beizubehalten, während die 140 bzw. 120 Isoform(s) ausreichend waren, um das Medikament synaptische Vesikel Radfahren entlang dem Axon nach Synapse Bildung zu vermitteln. Ausdruck und gezielte jedes Isoform und ihre Beziehung zu unterschiedlichen Formen der synaptische Vesikel Radfahren vor und nach der Bildung der Synapse war jedoch bisher nicht bekannt. Transfecting Küken Motoneurons mit Leuchtstoff markierte Maus 180, 140 und 120-Isoformen, zeigen wir, dass vor Myotube Kontakt die 180 und 140-Isoformen exprimiert werden, in unterschiedlichen Puncta entlang dem Axon die Seiten von einem unreifen Form (Brefeldin A sensible, L-Typ Ca2 +-Kanal vermittelt) sind der Vesikel Radfahren. Nach Myotube Kontakt die 140 und 180-Isoformen sind Downregulated aus dem Axon und selektiv für den präsynaptischen Terminal. Dies fiel zeitlich mit der Heraufregulation des Vesikel Radfahren entlang dem Axon und der Ausdruck der Reife Form (BFA unempfindlich, P/Q-Typ Ca2 +-Kanal vermittelt) der Vesikel Radfahren am Terminal. Die synaptische gezielte exogen 180 ausgedrückt und 140-Isoformen auch eingetreten, wenn Küken Motoneurons kontaktiert + / + Maus Myotubes; jedoch nur die 180 aber nicht die 140-Isoform zielte auf Kontakt mit NCAM-/-Myotubes. Diese Beobachtungen weisen darauf hin, dass postsynaptisches NCAM für die synaptische Ausrichtung der präsynaptischen 140 NCAM erforderlich ist aber, dass die Lokalisierung von präsynaptischen 180 NCAM über einen anderen Mechanismus erfolgt.

Bevorzugte Zelladhäsion, Stickstoff-dotiertes Diamond-Like Carbon (DLC:N) Zur Messung Der Quantal Exozytose

Biomaterials. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19124153

Elektrochemische Messung der Sender oder Hormon Freisetzung von einzelnen Zellen auf Mikrochips hat Anwendungen sowohl in der Grundlagenforschung und Drogen-Screening. Hochauflösende Messung der quantal Exozytose erfordert die Elektrode arbeiten, klein zu sein (Zelle Größe) und befindet sich in unmittelbarer Nähe der Zelle. Wir prüfen die Fähigkeit des Kandidaten Elektrodenmaterialien, die Anlage von zwei Hormon-sezernierende Zelltypen als Mechanismus für die Zielgruppenadressierung Zellen für auf Aufnahme Elektroden mit hoher Präzision zu fördern. Wir fanden, dass Stickstoff-dotiertes Diamond-Like Carbon (DLC:N) gefördert-Zelladhäsion im Vergleich zu anderen Materialien, die in der Rangordnung der DLC:N>In(2)O(3)/SnO(2) (ITO), Pt getestet > Au. Darüber hinaus fanden wir, dass die Behandlung von Kandidaten Elektrodenmaterialien mit Polylysin Befestigung der chromaffin Zellen an DLC:N nicht zu erhöhen, sondern förderte Zelladhäsion auf die anderen getesteten Materialien. Wir fanden, dass Hormon-sezernierende Zellen nicht leicht zu Teflon AF als Isolierstoff Potential, und gezeigt, dass die Musterung von Teflon AF führt zur selektiven Zelle-targeting DLC:N "Andocken Websites". Diese Ergebnisse werden das Design der nächsten Generation von Biochips für automatisierte und Hochdurchsatz-Messung von quantal Exozytose führen.

Kardiale Kissen Modulieren Aktionspotential Phänotyp Bei Herz-Entwicklung [korrigiert]

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. Mar, 2009  |  Pubmed ID: 19235920

Die extrazelluläre Matrix spielt eine wichtige Rolle in der Herzfunktion. Seine Rolle bei der Generierung und Modulation der elektrischen Aktivität in einem frühen Entwicklungsstadium Herz wurde nicht ausgiebig studiert. Unsere Studie zeigt, dass der extrazelluläre Matrix im Herz Kissen die Aktionspotential-Phänotyp durch direkten Kontakt mit Cardiomyocytes aus verschiedenen Regionen des Herzens ändern kann. Wir zeigen auch, dass Fibronektin, eine wichtige und reichlich Komponente der kardialen extrazellulären Matrix, die Auswirkungen des Gewebes Kissen Änderungen in Aktionspotential zu ändern teilweise imitiert. Fibronektin erhöht I(Ca) (2 +) und akut erhöht cytosolic Kalzium. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass die Zusammensetzung der kardialen extrazellulären Matrix während der Entwicklung eine wichtige Rolle spielt bei der Festlegung der Muster der elektrischen Aktivität im entwickelnden Herzen.

Charakterisierung Von Rhythmischen Ca2 + Transienten Im Frühen Embryonalen Küken Motoneurons: Ca2 + Quellen Und Auswirkungen Der Aktivierung Von Sender-Rezeptoren Verändert

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Dec, 2009  |  Pubmed ID: 19955376

Im Nervensystem spontane Ca(2+) Transienten eine wichtige Rolle in vielen Entwicklungsprozesse spielen. Vorher finden wir, dass die Veränderung der Häufigkeit der elektrisch aufgezeichneten rhythmische spontan platzende Episoden in embryonalen Küken spinale Schnüre differentiell die zwei wichtigsten Pathfinding Entscheidungen Motoneurons, dorsal-Ventral und Schwimmbad-spezifisch, je nach Vorzeichen der Frequenz-Änderung umwerfen. Hier wir charakterisiert die Ca(2+)-Transienten, die diese Ausbrüche zugeordnet und zeigten, dass in frühen Stadien, während Motoneurons sind noch migrieren und Ausweitung der Axone auf der Basis der Gliedmaßen-Knospe, sie zeigen spontane, sehr rhythmische und synchronisierte Ca(2+) Transienten. Einige Vorläuferzellen in der ependymalen-Schicht angezeigt ähnliche Transienten. T-Typ-Ca(2+)-Kanäle und eine beständige Na(+) aktuelle wurden wesentliche, spontane Ausbrüche zu initiieren, die damit verbundenen Transienten. Führte jedoch nachfolgende Ausbreitung der Tätigkeit während der Schnur von Netzwerk-gesteuerte chemische Übertragung vermittelte presynaptically von Ca(2+) Eintrag durch N-Typ-Ca(2+)-Kanäle und postsynaptically von Acetylcholin auf nikotinische Rezeptoren. Die erhöhte [Ca(2+)](i) bei transienten hing in erster Linie auf L- und T-Typ-Kanäle mit einem bescheidenen Beitrag von TRP (transient Receptor Potential) Kanäle und Ryanodin-Sensitive interne Speicher. Erheblich, verändert, Pathfinding Störungen produzieren zuvor verwendeten Medikamente transient Frequenz aber nicht Dauer oder Amplitude. Diese Beobachtungen bedeuten, dass verschiedene transiente Frequenzen differentiell Motoneuron Pathfinding modulieren können. Die Dauer der Ca(2+)-Transienten unterschieden sich jedoch erheblich zwischen Pools, potenziell ermöglichen zusätzliche verschiedene Pool-spezifische nachgeschaltete Signalgebung. Viele frühe Veranstaltungen in spinal motor Schaltung-Formation sind daher potenziell empfindlich auf die rhythmische Ca(2+) Transienten wir geprägt haben und auf alle Medikamente, die sie zu verlängern.

Erkennung Von Melanomzellen In-vitro über Ein Optisches Erkennungssystem Photoakustischen Wellen

Lasers in Surgery and Medicine. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20333746

Zirkulierende Tumorzellen haben nachweislich positiv korrelieren mit Metastasen Zustand bei Patienten mit fortgeschrittenem Krebs. Wir haben die Fähigkeit, Melanomzellen in einem Fluss-System zu erkennen, durch generieren und erkennen von Photoakustischen Wellen in Melanomzellen bewiesen. Diese Methode ähnelt der Durchflusszytometrie, obwohl Photoacoustics anstelle der Fluoreszenz verwenden. Zuvor benutzten wir piezoelektrische Folien als unsere akustischen Sensoren. Allerdings haben solche Filme falsch-Positive Signale durch unerwünschte direkte Interaktionen zwischen Photonen aus der hohen Laser Fluenz in der Flow-System und der Film selbst angedeutet. Wir haben eine optische Erkennung-Schema angepasst, die die Notwendigkeit der piezoelektrischen Filmen Methode.

Frequenzabhängige Modi Synaptische Vesikel Endozytose Und Exozytose an Adulten Maus

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 21248134

Während der Fortbewegung platzt Erwachsenen Nagetier lumbalen Motoneurons Feuer in hoher Frequenz (80-100 Hz) 1-2 s alle mehrere Sekunden, zwischen 10.000 und 20.000 Bläschen pro Platzen die Freigabe. Die geschätzte Gesamtzahl Vesikel-Poolgröße gibt an, dass alle Bläschen innerhalb 30 verwendet werden würde s; Daher ist ein Mechanismus für schnelle Endozytose und des Vesicle recycling erforderlich, wirksame Getriebe und motor Verhalten beizubehalten. Jedoch, ob solche schnelle Wiederverwertung vorhanden auf Maus neuromuskuläre Kreuzungen (NMJs) oder wie es geregelt ist unklar gewesen. Hier zeigen wir, dass viel weniger FM1-43 Farbstoff pro Impuls mit 100 Hz Stimulation als mit 10 Hz Stimulation verloren ist, selbst wenn die gleiche Anzahl von Vesikel Exozytose unterzogen werden. Elektrophysiologische Daten mithilfe von Folimycin zeigen, dass diese geringeren Betrag der Farbstoff Verlust teilweise durch die rasche Wiederverwendung von Bläschen verursacht wird. Wir zeigten, dass zuvor eine Myosin-Leichtketten-Kinase (MLCK)-Myosin-II-Stoffwechselweg bedurfte es für die wirksame Übertragung bei 100 Hz. Hier bestätigen wir die Aktivierung von MLCK, basierend auf verstärkten Nerve terminal Phospho-MLC Paraffinschnitten, mit 100 Hz, aber nicht mit 10 Hz Stimulation. Weiter zeigen wir, dass die Aktivierung des MLCK, durch erhöhte extrazelluläre Ca(2+), durch Aktivierung der PKC (Proteinkinase C) oder durch MLCK Agonist Peptid, die Höhe der Farbstoff verloren sogar mit 10 Hz Stimulation reduziert. MLCK Aktivierung bei 10 Hz führte ebenfalls mehr Bläschen, die rasch wieder. So MLCK Aktivierung durch 100 Hz Stimulation den Mechanismus der Vesikel Radfahren zu einem schnellen-Wiederverwendung-Modus wechselt und wird benötigt, um die effektive Übertragung in adulten Maus NMJs aufrecht zu erhalten.

Niederschlag Des Embryonalen Myosin Heavy Chain Offenbart Eine Wesentliche Rolle in Der Morphologie Und Funktion Des Herzens Entwickeln

Development (Cambridge, England). Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21862559

Der Ausdruck und die Funktion des embryonalen Myosin heavy Chain (eMYH) hat nicht innerhalb der frühen Entwicklung Herz untersucht. Dies ist trotz dem wissen, dass andere strukturelle Proteine wie Alpha- und Beta-Myosin schwere Ketten und kardiale alpha-Actin, entscheidende Rollen in Vorhof-Septumdefekt Entwicklung und Herzfunktion spielen. Die meisten Fälle von Vorhofflimmern Septumdefekt Mängel und Kardiomyopathie sind nicht verknüpft mit einem bekannten ursächliche Gen, was darauf hindeutet, dass weitere Analysen in Kandidatengenen erforderlich ist. Ausdruck Studien lokalisierte eMYH mitten in Entwicklungsländern Küken. eMYH Niederschlag wurde mit Morpholinos eine zeitliche Weise erreicht und Funktionsstudien wurden mit elektrischen und Kalzium Signalisierung Methoden durchgeführt. Niederschlag im frühen Embryo zu abnormen Vorhof-Septumdefekt Entwicklung und Herz Erweiterung geführt. Interessanterweise waren die Aktionspotentiale der eMYH Niederschlag Herzen abnorme im Vergleich mit Alpha- und Beta-Myosin heavy Chain Niederschläge Ringrichter und Steuerelemente. Obwohl Myofibrillogenesis normal erschien, war die Gewebe-Integrität in Niederschlag Herzen aufgrund der offensichtlichen Schwerpunkte der Muskelfaser-Verlust und eine Erhöhung der Zelltod betroffen. Ein Ausdruck-Profil des menschlichen Skeletts Myosin heavy Chain Gene legt nahe, dass menschliche Myosin heavy Chain 3 die funktionale Homolog des Gens eMYH Küken ist. Diese Daten liefern überzeugende Beweise, dass eMYH spielt eine entscheidende Rolle in wichtige Prozesse in der frühen Entwicklung von Herzen und daher ist ein Kandidat ursächliche Gen Vorhof-Septumdefekt Mängelhaftung und Kardiomyopathie.

Eine Vergleichende Bewertung Der Microarray Folien Als Substrate Für Die Entwicklung Der Protease Assays Biosensoren

Experimental and Molecular Pathology. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 21945735

Die Anwendung von handelsüblichen Microarray Folien als Substrate für Fluorogenic Protease Assays im Hinblick auf Effizienz, Stabilität und Aktivität erforscht hat. Eine Leuchtstofflampe, biotinylierten Substrat für Botulinumneurotoxin, das über eine (BoNTA) befestigt war assembled Monolayer von Streptavidin zu Amin-reaktive Aldehyde, Epoxy, Hydrogel und Polymer-Folien. NEXTERION Slide P ® wurde festgestellt, dass die optimale Protein Bindung Effizienz und Stabilität der Folien untersucht haben. Zusatz von Glycerin auf den Drucken Puffer vor Ort Morphologie deutlich verbessert und Polyvinylpyrrolidon bereitgestellt, Langzeitstabilität, so dass Chips mit guter Tragfähigkeit bis zu 1 Monat gespeichert werden. Erkennung einer rekombinanten BoNTA-Licht-Kette wurde dann bei 37 ° C durchgeführt und eine subletale Dosis war in 2 Stunden erkannt.

Elektrische Leitung Entlang Endothelial Zellen Rohre Aus Maus Feed Arterien: Verluste Zufügte Aktionen Glycyrrhetinic Säure Derivate

British Journal of Pharmacology. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22168386

Hintergrund und Ziel: elektrische Leitvermögen entlang Endothel Widerstand Schiffe wurde nicht unabhängig vom Einfluss der glatten Muskulatur, umgebenden Gewebe oder Blut bestimmt. Zwei zusammenhängende Hypothesen wurden getestet: (1) interzelluläre Leitvermögen der elektrischen Signale zeigt sich in Endothelzellen (EG) Rohre; (2) Inhibitoren der Lücke Kreuzung Kanäle (GJCs) haben verwirrende Aktionen im EG elektrische und Ca(2+) zu signalisieren. Experimenteller Ansatz: intakt EG Rohre wurden aus Bauchmuskel feed Arterien von C57BL/6 Mäusen isoliert. Hyperpolarisation wurde eingeleitet, mit indirekten (Acetylcholin) und direkte (NS309) Stimulation des zwischen- und klein-Leitwert-Ca(2+)-aktiviert K(+) Kanäle (IK(Ca) /SK(Ca)). Entfernte Membran potenzielle (V(m)) Antworten zu intrazellulären Stromeinspeisung definiert die Länge-Konstante (λ) für elektrische Leitung. Farbstoff-Kupplung wurde nach intrazelluläre Microinjection der Propidium Jodid ausgewertet. Intrazelluläre Ca(2+) Dynamik wurden mit Fura-2 Photometrie bestimmt. Carbenoxolone (CBX) oder β-Glycyrrhetinic Säure (βGA) wurden verwendet, um die Rolle der GJCs. Key Ergebnisse untersuchen: stationäre V(m) von ECs war ∼-25 mV. Acetylcholin und NS309 hyperpolarized ECs ∼-40 mV und ∼-60 mV. Elektrisches Leitvermögen verfiel Monoexponentially mit Abstand (λ∼1.4 mm). Propidium Jodid in einem EG Ausbreitung in umliegenden ECs injiziert. CBX oder βGA gehemmt Farbübertragungs, elektrisches Leitvermögen und EG Hyperpolarisation umkehrbar. Beide Agenten erhoben Ca(2+) ruhen, während βGA Antworten zu ACh gehemmt. Schlussfolgerungen und Implikationen: einzelne Zellen sind well-coupled miteinander innerhalb der EG-Röhren. Hemmung von GJCs mit Glycyrrhetinic Säure Derivate fällt mit Verlust der Hyperpolarisation von IK(Ca) /SK(Ca) unabhängig von Ca(2+) signalisieren, Beseitigung Verwendung dieser Wirkstoffe bei der Lösung der wichtigsten Determinants der elektrischen Leitung entlang das Endothel vermittelt.