Translate this page to:
Japanese
In JoVE (1)
Other Publications (14)
- The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience
- Archives of Biochemistry and Biophysics
- Journal of Neurophysiology
- Neuron
- Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America
- The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience
- Biomaterials
- Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists
- The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience
- Lasers in Surgery and Medicine
- The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience
- Development (Cambridge, England)
- Experimental and Molecular Pathology
- British Journal of Pharmacology
Automatic Translation
This translation into Japanese was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Luis Polo-Parada in JoVE
JoVE General
微小循環の生体内蛍光イメージングのためのMicroiontophoresisとマイクロマニピュレーション
1Department of Medical Pharmacology and Physiology, University of Missouri, 2Dalton Cardiovascular Research Center, University of Missouri
Microiontophoresisは、マイクロピペットの内側と外側との間の電位の差に応答して、マイクロピペットからのイオンの動きを伴います。生物学的活性分子は、それによって電流に比例して配信されます。我々は、微小循環の内皮依存性血管拡張を研究するためにマイクロマニピュレーションと連携してアセチルコリンのmicroiontophoresisを示しています。
Other articles by Luis Polo-Parada on PubMed
異なる神経細胞接着分子 NCAM アイソ フォームの NCAM 180 KDa のアイソ フォーム欠損マウスの解析によって明らかにシナプスの成熟の役割。
すべて神経細胞接着分子 NCAM (140 と 180 kDa 貫通型、および 120 kDa 一種のリンク) 3 主要アイソ フォームを欠いているマウスは以前その神経筋接合部 (シナプス) の成熟に大きな変化を展示を示した。具体的には、生後日もによって 30、彼らからダウンレギュ レート彼らの軸索と端末に沿って L 型 ca 2 + チャネルを使用する未熟なブレフェルジン A に敏感なシナプス小胞サイクリング機構失敗。さらに、これら NCAM null シナプス出展初期の重度のうつ病と後続の循環期間のシナプス前の起源だった総伝送障害の高頻度刺激と効果的なトランスミッタ出力を維持するためにできませんでした。ここでは、のみ 180 kDa のアイソ フォームの NCAM downregulated を欠いているマウス未熟小胞サイクリング機構スケジュールで報じたように、いずれか、140 または 120 kDa NCAM アイソフォームこの重要なイベントの幼 implicating。しかし、180 NCAM 欠損マウスはまだ多くの機能的な伝送の欠陥を出展しました。180 NCAM null シナプス NCAM null シナプスの重度の初期うつ病を表示されませんでしたが、彼らはまだ完全な伝送失敗の循環期間を持っていた。さらに、いくつかのシナプス分子より低いレベルで表現されたまたはよりびまん性局在していた。したがって、180 kDa のアイソ フォーム NCAM のシナプス前終末の分子組織と効果的なトランスミッタ出力反復刺激を確保する上で重要な役割を再生するが表示されます。PKC とミオシン (ミオシン軽鎖キナーゼ) 軽 NCAM これらのプロセスの下流のエフェクタをかもしれないことも示唆された.一緒に、これらの結果から異なるアイソ フォーム NCAM のシナプス前の成熟にはっきりと重要なイベントを仲介することを示しています。
活動電位刺激 P/Q-カルシウム チャネル依存エキソサイトーシス マウス副腎組織切片での役割を明らかにします。
副腎髄質クロム親和性細胞から内臓神経のコリン作動性入力を受け取る。交感神経の活動時に髄質細胞活動電位の電圧電位依存性カルシウム チャネルを開き、カテコールアミンの exocytic のリリースを呼び起こす火災します。カテコールアミン、心拍出量と血管緊張などの恒常性のプロセスを調節します。こうして髄質細胞におけるカルシウム流入の制御は複数の生理機能の規制対象を表します。以前のレポートは、比例 exocytic レスポンス カルシウム チャネル サブタイプの関数として定量化する矩形パルス分極活用。本研究では、我々 穿孔パッチ電圧クランプと活動電位波形細胞 in situ デポラライズに使用します。カルシウム動的ネイティブ セルの動作と一致する条件の下で現在のコンポーネントを分析します。このアプローチでは誘発エキソサイトーシスの P/Q 型カルシウム チャンネルの大きな役割よりも以前に報告を明らかにしました。したがって、P/Q 型チャネルは以前よりも信じてより重要なコントロール ポイント カテコールアミン依存処理の規制を表しています。
副腎髄質細胞障害顆粒 NCAM ノックアウト マウスにおける人身売買を展示します。
神経細胞接着分子 NCAM はニューロン経路探索と細胞間コミュニケーションの開発中にいくつかの重要な役割を果たしています。臨床設定では、統合失調症と自閉症患者における血清 NCAM に変化します。NCAM ノックアウト マウス神経機能障害の海馬長期増強、モーターの調整などの赤字を展示するに示されています。NCAM 欠損マウスにおける最近の研究は、シナプス小胞輸送とアクティブなゾーンをターゲットが周期的なシナプス伝達障害反復的な生理的刺激下で生じる障害されていることを示しています。この研究では, 我々 は NCAM かどうかそれもトランスミッタ リリース他のセルのシステムからでより一般的な役割を担うかもしれない神経筋接合部に限られている小胞輸送する役割を果たしているかどうかテスト。我々 はマウス副腎組織スライス標本における神経内分泌クロム親和性細胞からのカテコールアミン放出をテストしました。顆粒の採用と野生型と NCAM-/- マウスでターゲットを試金する電気生理学的および電気化学的措置を活用します。私たちのデータ NCAM-/- マウス通常顆粒人身売買が容易に脱着可能なプールやリリース有能すぐに脱着可能なプール間で赤字を示すことが明らか。この欠陥における顆粒の融合の率の低下の結果、それゆえカテコールアミン生理的刺激下でのリリースします。我々 のデータは NCAM トランスミッタ リリース機構神経内分泌細胞の顆粒募集調停を介しての基本的な役割、神経筋接合部と中央のシナプスにアクティブなゾーンに限定されないことを示します。
NCAM 180 演技を介して保存された C 末端ドメインとミオシン軽の効果的な伝送反復刺激のために不可欠です。
NCAM 180 アイソ フォーム null 神経筋接合部は効果的に動員し、シナプス小胞の exocytose にできず、したがって総伝送障害の期間中に高頻度刺激を展示します。効果的な伝送を維持し、ミオシン軽とおそらくミオシン軽鎖 （MLC） とミオシン II を含む経路を介して機能することを実証するために必要な NCAM 上非常に節約された C ターミナル (KENESKA) ドメインを識別しています。大人のシナプスにペプチドを導入する方法を完成することによって、我々 仮説の役割蛋白質のこの経路で蛋白質蛋白質の相互作用の競争の破壊によってテスト。この経路のミオシン軽と MLC の活性化とエラー野生型および null 接合 NCAM 180 KENESKA と他のペプチドの効果のサポート、KENESKA のセリンのリン酸化は重大だった。この経路がシナプス小胞のエキソサイトーシス ミオシン駆動アクティブ ゾーンへのシナプス小胞の配信を促進またはその後続のエキソサイトーシスの高レベルの間に利用を補充するために必要であることを提案します。
CD24 は筋線維シナプス核によって表現され、シナプス伝達を調節します。
アセチルコリン受容体、アセチルコリンエステラーゼ、ムスク、筋肉に固有キナーゼなど、複数のシナプス蛋白質をコードする遺伝子は選択的に少数の筋線維の核のシナプスのサイトの近くに配置によって表現されます。変異マウスの遺伝解析シナプス核によって選択的に表明した追加の遺伝子モータ軸索の端末の分化を調節する筋肉由来のシグナルの逆行がエンコードされることを示唆しています。候補逆行性信号を識別するには、我々 マイクロ アレイ画面筋肉、シナプス領域における優先的表現される遺伝子を識別する使用、我々 1 つのような遺伝子、CD24、さらに分析しました。私達は示すその小さな、必ずエンコードします CD24 と高いグリコ、一種 (GPI)-リンクされた蛋白質である胎児および成体の筋における筋線維シナプス核によって優先的表明したし、その CD24 式が筋肉の神経支配独立の中央の領域に限定されます。さらに, シナプス伝達は落ち込んでいるし、CD24 変異マウスのモーターの軸索の反復刺激後の完全に循環的な方法では、障害が発生したため CD24 ロール シナプスの分化している示します。AM1 43 の異常な刺激に依存する吸収からの軸索を伴っており、これらの赤字シナプス伝達の通常のシナプス前成熟と機能の CD24 が必要であることを示します。CD24 は、またいくつかのニューロンで表されるため、追加の実験前またはシナプス後 CD24 シナプス前の開発および機能にこれらの効果を仲介するかどうかを決定する必要があります。
異なる神経細胞接着分子のアイソ フォームの運動ニューロン細胞シナプス形成過程における文化とシナプス小胞の成熟したフォームから未熟なスイッチ選択的ターゲティング サイクリングします。
神経筋接合の形成と関数すべての神経細胞接着分子 NCAM アイソ フォームまたは 180 のアイソ フォームのみに欠けているマウスのキャラクタリゼーション 180 のアイソ フォームが 140 および 120 isoform(s) がシナプス小胞のシナプスの形成後の軸索に沿ってのサイクリングのダウンレギュレーションを仲介する不十分であったに対し、効果的な伝送と反復刺激を維持するために大人のシナプスで必要であることを示した。しかし、式の各アイソ フォームとそのシナプス小胞の前に、と後のシナプス形成をサイクリングの形態の異なるターゲットでした以前知られています。蛍光にタグ マウス 180, 140 および 120 アイソ フォームの運動ひよこニューロン ウマ我々 細胞接触する前に 180 と 140 のアイソ フォームの未熟な形式 (媒介 L 型 ca 2 + チャネル敏感、ブレフェルジン A) のサイトは、軸索に沿って異なる涙点で表されること小胞の示すサイクリングします。細胞接触後 140 と 180 のアイソ フォーム downregulated 軸索からし選択的シナプス前終末をターゲットします。これは、小胞の軸索と成熟したフォーム (BFA を区別しない、P/Q 型 ca 2 + チャネルを介した) の発現に沿ってサイクリング ターミナルでベシクルのサイクリングのダウンレギュレーションと一致しました。シナプスの度外ターゲット 180 表現と 140 のアイソ フォームも発生ひよこ運動ニューロンに連絡するとき +/+ マウス乏しく;しかし唯一 180 ですがない 140 アイソ フォームの接触 NCAM/乏しくで標的にされました。これらの観察は、シナプス後 NCAM がシナプス前 140 NCAM のシナプス ターゲティングのため必要であることがシナプス前 180 NCAM の局在が異なるメカニズムを介して発生することを示します。
窒素ドープ素量エキソサイトーシスの測定のためのダイヤモンド状炭素 (DLC:N) 優遇細胞付着。
送信機またはホルモンのリリース マイクロ チップ上の個々 のセルからの電気化学測定基礎科学と創薬スクリーニングの両方のアプリケーションがあります。素量エキソサイトーシスの高分解能測定が必要小さいように作用電極 (セル サイズ） とすぐに近くのセルであります。候補電極材料電極を高精度記録する 2 つのホルモンを分泌する細胞の種類の添付ファイル ターゲット細胞のためのメカニズムとして促進するために能力を検討しました。その昇格窒素をドープしたダイヤモンド状炭素 (DLC:N) の細胞接着 DLC:N>In(2)O(3)/SnO(2) (ITO)、Pt のランク順にテスト他の材料を基準を発見目 Au。さらに、候補の電極材料とポリリジンの治療は DLC:N、クロム親和性細胞の添付ファイルを増加しなかったがセルに添付ファイルが他の供試材料を昇格を発見しました。我々 はホルモン分泌細胞が容易にテフロン AF に絶縁材料、可能性として添付していないテフロン AF のパターニング「ドッキング サイト」DLC:N に選択セルをターゲットにつながることを実証ことを発見しました。これらの結果は、次世代バイオチップの素量エキソサイトーシスの自動化・高スループットの測定のためのデザイン ガイドします。
心臓クッション活動電位の表現型は心臓の開発中に [修正] を調整します。
細胞外マトリックスに重要な役割の心臓の機能を果たしています。その世代と心臓の開発の初期段階における電気的活動の変調における役割は広く研究されていません。我々 の研究は、細胞外マトリックス心臓クッションの心のさまざまな地域からの心筋細胞との直接接触による活動電位の表現型を変更できますを示します。またそのフィブロネクチンは心臓の細胞外マトリックスの重要な豊富なコンポーネントは、部分的に活動電位の変化を変えるクッション ティッシュの効果を模倣を示します。フィブロネクチンは I(Ca) (2++) を増加し、鋭くゾル性細胞質カルシウムを増加します。心臓の細胞外マトリックスの組成開発中の開発の中心は、電気的活動のパターンを定義する重要な役割を果たしていることが示唆されました。
リズミカルな Ca 2 + のトランジェント初期鶏胚の運動ニューロンのキャラクタリゼーション: Ca 2 + 源と影響の変更トランスミッタ受容体活性化。
神経システムでは、自発的なカルシウム トランジェント多く発達過程において重要な役割を再生します。我々 は以前、特異的ニワトリ胚脊髄電気的記録されたリズミカルな自発的なバースト エピソードの頻度を変えると運動ニューロンと周波数変化の符号に応じてプール固有の背腹軸が 2 つの主な経路探索機能決定が摂動を発見しました。ここでは、我々 のこれらのバーストに関連付けられているカルシウム トランジェントの特徴し、運動ニューロンがまだ移行および軸索肢芽のベースに拡張する間は、初期の段階で示した、自発的な非常にリズミカルな同期されたカルシウム トランジェントを表示します。いくつか前駆細胞上衣層に類似のトランジェントを表示しました。T 型カルシウム チャネルと永続的な Na(+) の現在自発バーストの開始に必須でしたトランジェント関連付けられています。ただし、後続の伝播コード全体で活動の化学の伝送ネットワーク駆動 presynaptically N 型カルシウム チャンネルを通してカルシウム エントリと postsynaptically ニコチン性受容体に作用するアセチルコリンを媒介に起因.増加させたトランジェント (一過性受容体電位) TRP チャネルからのささやかな貢献と L 型と T 型チャネルに主に依存とリアノジン感受性内部の店舗の中に。大幅、以前経路探索エラーを生成するために使用される薬は、期間や振幅ではなく非定常周波数変更。これらの観察は異なる過渡周波数特異的経路探索機能運動ニューロンを調節する可能性を意味します。ただし、カルシウム トランジェントの期間は大幅に可能性のある追加異なるプール固有下流シグナルを有効にするプール間で異なっていた。多くの初期イベント脊髄モータ回路形成におけるしたがってリズミカルに機密性の高いです我々 の特徴があるし、任意に医薬品のカルシウム トランジェントかき乱すそれら。
光音響波の光検出器を用いたin Vitroにおけるメラノーマ細胞の検出
循環腫瘍細胞は進行癌患者では転移性疾患の状態と正の相関が示されている。我々は、メラノーマ細胞における光音響波を生成し、検出することにより、フローシステムでメラノーマ細胞を検出する能力を実証した。この方法ではなく蛍光よりもphotoacousticsを使用していますが、フローサイトメトリーに似ています。以前、我々は音響センサとして圧電膜を使用していました。しかし、このようなフィルムは、フローシステムで高いレーザフルエンスやフィルム自体からの光子の間に不要な直接的な相互作用に起因する偽陽性シグナルを示している。我々は、圧電膜の必要性を取り除き光検出方式を適応している。
シナプス小胞エンドサイトーシス、エキソサイトーシス アダルト マウス神経筋接合部での周波数依存型モード。
歩行中に大人の齧歯類の腰椎運動ニューロン火災高周波 (80-100 Hz) 1-2 s のバーストあたり 10,000 や 20,000 小胞間解放するすべての数秒をバーストします。推定合計ベシクル プール サイズすべてベシクル 30 内で使用されることを示す s;したがって、急速エンドサイトーシスと小胞をリサイクルのためのメカニズムは、効果的な伝送とモーターの動作を維持するために必要です。ただし、このような急速なリサイクル マウス神経筋接合部 (シナプス) またはどのように規制されてで存在するかどうか明確されています。ここも同じ数小胞のエキソサイトーシスを受ける際にはるかに少ない FM1 43 色素があたり 10 Hz 刺激よりも 100 Hz 刺激と刺激が失われることを示します。Folimycin を用いた電気生理学的データは、この色素の損失の少ない量の一部小胞の急速な再利用によって引き起こされるショーします。我々 は以前、ミオシン軽鎖キナーゼ (軽) を示した-ミオシン II の経路 100 Hz で効果的な伝送が必要だった。ここでは、高められた神経ターミナル フォスフォ MLC 免疫染色, 100 Hz ですが 10 Hz 刺激に基づいてミオシン軽の活性化を確認します。我々 さらにミオシン軽増加細胞外カルシウム、プロテインキナーゼ （蛋白質キナーゼ C） または、ミオシン軽アゴニスト ペプチドの活性化が 10 Hz の刺激にも失われた染料の量を減らすことを示します。ミオシン軽アクティベーション 10 Hz ではまた急速に再利用されてより多くの小胞で起因しました。したがって、100 Hz 刺激によるミオシン軽活性化ベシクルの急速な再利用モードにサイクリングのメカニズムを切り替え、アダルト マウス シナプスにおける効率的な転送を維持するために必要です。
ノックダウン胚ミオシン重鎖の形態と機能の開発の中心で重要な役割を明らかにします。
式と胎児型ミオシン重鎖 (eMYH) の機能が解明されていない初期発展途上の心の中。これはアルファおよびベータ ミオシン重鎖と心臓のアルファ アクチンなどの他の構造タンパク質心房中隔の開発と心臓の機能に重要な役割を果たす知識にもかかわらずです。心房中隔欠損症および心筋症のほとんどの場合は、候補者の遺伝子にさらなる分析が必要であることを示唆して、既知の原因遺伝子と関連付けられていません。式開発のひよこ中心で局所的な eMYH を研究しています。eMYH ノックダウン、時間的な方法で morpholinos を使用して達成され、機能的研究は電気を使用してカルシウム シグナル伝達の方法論を行った。初期胚におけるノックダウンする異常な心房中隔開発と心肥大を導いた。Lrad eMYH ノックダウン心の活動電位は、アルファとベータのミオシン重鎖のノックダウンとコントロールと比較して異常であった。ノックダウン心の中に myofibrillogenesis は通常現れましたが、見掛けの焦点ポイントの心筋細胞の消失と細胞死の増加により組織整合性に影響されました。ひと骨格筋ミオシン重鎖遺伝子の発現プロファイルは人間のミオシン重鎖 3 ひよこ eMYH 遺伝子の機能的相同であることを示唆します。これらのデータ説得力のある証拠は初期の開発で重要なプロセスで重要な役割は心臓し、それゆえ、心房中隔欠損症および心筋症原因遺伝子候補であるそれ eMYH 演劇を提供します。
マイクロ アレイの比較評価のプロテアーゼ アッセイ バイオ センサーの開発用基板としてスライドします。
蛍光発生プロテアーゼ アッセイ用基板を探検として効率性、安定性、およびアクティビティ バインディングの面では、市販のマイクロ アレイのアプリケーションをスライドします。蛍光灯、ビオチン化基板 (ボン) 経由で添付されたボツリヌス神経毒素の単分子膜ストレプトアビジンのアミン反応性アルデヒド、エポキシ、ハイドロゲル、高分子のスライドに自己組織化。Nexterion スライド P ® 最適蛋白質結合効率と安定性を検討したスライドがあることがわかった。印刷バッファーへグリセリン添加スポット形態を大幅に改善、ポリビニルピロリドン チップは 1 ヶ月のために良い生存率を格納する、長期的な安定性を提供します。組換えボン軽鎖の検出は、37 ℃ で実施され、加熱線量は 2 時間で検出されました。
マウスフィードの動脈から血管内皮細胞の管に沿って電気伝導：グリチルレチン酸誘導体の交絡アクション
背景と目的：抵抗血管の内皮細胞に沿って電気伝導は、組織や血液を取り囲む平滑筋の影響から独立して決定されていない。 2つの相互の仮説をテストしました：（1）電気信号の細胞間伝導は内皮細胞（EC）チューブ内のマニフェストである、（2）ギャップジャンクションチャネルの阻害剤（GJCs）は、ECの電気とCa（2 +）シグナル伝達に対する交絡アクションがあります。実験的アプローチ：無傷EC管はC57BL / 6マウスの腹部筋肉フィードの動脈から単離した。過分極（+）は中間、小コンダクタンスCa（2 +）の活性化Kチャネル（IK（Ca）と/ SK（CA））の（NS309）間接的な（アセチルコリン）と直接刺激で開始されました。リモート膜電位（V（M））の応答は、注入電流の電気伝導のために一定の長さ（λ）を定義し、細胞内に。色素結合はヨウ化プロピジウムの細胞内マイクロインジェクション後に評価した。細胞内Ca（2 +）のダイナミクスは、フラ-2測光を用いて測定した。カルベノキソロン（CBX）またはβ-グリチルレチン酸（βGA）はGJCsの役割を調べるために使用された。主な結果：ECSの定常状態V（m）は〜-25 mVであった。それぞれ〜-40 mVと〜-60 mVに、アセチルコリンによる過分極とNS309 ECの。電気伝導は、距離（λ〜1.4 mm）でmonoexponentially減衰。ヨウ化プロピジウムはECを取り巻くに1つのEC普及に注入する。 CBXまたはβGAは可逆移染、電気伝導およびEC過分極を抑制した。 βGAは、アセチルコリンへの応答を抑制しながら、両方のエージェントは、Ca（2 +）を休んで上昇した。結論と含意：個々の細胞は、ECチューブ内にお互いによく結合されています。グリチルレチン酸誘導体とを阻害するGJCsは、内皮細胞に沿って電気伝導の主要な決定要因を解決するためのこれらの薬剤の使用を未然に防ぐ、のCa（2 +）シグナル伝達に関係なく、IK（Ca）の/ SK（CA）によって過分極仲介の損失と一致している。
