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Articles by Mark Laible in JoVE

 JoVE General

Mutagenesi sito fatto in casa Regia di Plasmidi Whole


JoVE 1135 5/11/2009

1Department of Biology, Johannes Gutenberg-University Mainz, Germany, 2Proteomics division, AlPlanta, Neustadt an der Weinstrasse, Germany

Mutagenesi sito-specifica di plasmidi tutto รจ un modo semplice per creare varianti leggermente diverse di un plasmide originale. Qui mostriamo un modo semplice ed economico per introdurre sostituzioni di basi in un plasmide standard utilizzando reagenti.

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Contatta Spotting Della Proteina Microarrays Accoppiato Con Spike-della Proteina Normalizer Permette Analisi Time-resolved Di Segnalazione Del Ricevitore ERBB

Microarrays della proteina permettono altamente accurato confronto e quantificazione dei numerosi campioni biologici in parallelo mentre che richiedono solo poco materiale. Questa qualifica le schiere della proteina per la biologia dei sistemi e ricerca clinica dove solo materiale campione limitato è disponibile, ma una lettura precisa è necessaria. Con l'introduzione di passaggi della normalizzazione segnale per monitorare la dimensione della goccia di matrici di proteina RP manualmente macchiato di contatto, è stata dimostrata l'utilità delle proteine normalizzatore per assicurare un alto rendimento ma analisi della proteina poco costoso. Questo approccio è stato applicato per l'analisi dei segnali attraverso la chinasi del recettore attivato ERBB nella linea cellulare di cancro al seno MCF-7. Attivazione di ERK1/2 e di AKT da ERBB1 (EGFR), ERRB2 (HER2/neu), ed ERBB3-4 è stato monitorato in modo time-resolved. Analisi dell'attivazione di pathway di stimolazione con fattore di crescita epidermico e heregulin, o inibizione bloccando con gefitinib o herceptin ha consentito una caratterizzazione delle proprietà segnalazione distinta dei diversi sottotipi di recettore ERBB.

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