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Articles by Martin Suhr in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Los ensayos clínicos y de eliminación de la médula espinal en un modelo murino de esclerosis lateral amiotrófica (ELA)
1Dept. of Neurology, University Medicine Göttingen, 2DFG Research Center for the Molecular Physiology of the Brain (CMPB), Göttingen, Germany
Un modelo de ratón para la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es un examen clínico y de comportamiento. Como un requisito previo para un análisis inmunohistoquímico acompaña la preparación de la médula espinal se representa en detalle.
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Expresión De Alto Rendimiento En Escherichia Coli, Purificación Y Caracterización De Alérgeno Maní Principal Correctamente Doblada Ara H 2
Reacciones alérgicas a los cacahuetes son un serio problema de salud debido a su alta prevalencia, asociado con potencial gravedad y cronicidad. Uno de los tres principales alérgenos en maní, Ara h 2, es un miembro de la familia de conglutin de las proteínas de almacenamiento de semillas. Ara h 2 muestra homología de secuencia alta a las proteínas de la familia de albúmina 2S. Actualmente, sólo muy pocos datos estructurales de proteínas alergénicas de esta familia existen. Para una comprensión detallada de los mecanismos moleculares de alergias inducidas por alimentos y para el desarrollo del conocimiento de estrategias terapéuticas de alta resolución tridimensional estructura de proteínas alergénicas es esencial. Divulgamos un método para la preparación a gran escala eficiente de correctamente doblada Ara h 2 para estudios estructurales y reportar los datos espectroscópicos de CD. En contraste con otros alergénicos 2S albúminas, Ara h 2 existe como una cadena polipeptídica única continua en semillas de maní, y así fue posible la expresión heteróloga en Escherichia coli. Ara h 2 se expresó como la proteína de fusión de Trx-su-etiqueta en e. coli Origami (DE3), una cepa de Escherichia coli modificada con oxidantes citoplasma que permite la formación de puentes disulfuro. Podría ser demostrado que recombinante Ara h 2, así sobreexpresa y purificado, y el alergeno aislado de maní son idénticos como juzgado de immunoblotting, HPLC analítica y espectros de dicroísmo circular.
Desarrollo De Una Herramienta De Análisis Específicos Del Epítopo Para El Alergeno Cacahuete Importante Ara H 2 Mediante Una Estrategia De Alta Densidad De Péptidos Antigénicos Múltiple
Usando el alergénico principal de cacahuete Ara h 2 como ejemplo, una herramienta analítica que permite la determinación de inmunoglobulina E (IgE)-epitopos en alérgenos de alimentos procesados se desarrollaron. Hemos sintetizado un péptido múltiple antigénico (mapa) del IgE reactiva epitopo lineal 3 (aminoácido posiciones 27-36) de Ara h 2 y levantó un monoespecíficas antisuero contra este método para obtener un control positivo para el futuro del epítopo resolver diagnósticos. En primer lugar, un mapa del epitopo 3, cuya masa molecular de 7770 Da, fue sintetizado, purificado, y su estructura confirmada por cromatografía líquida espectrometría (ionización por electrospray) (LC-MS(ESI)), matriz asistida por láser desorción/ionización-tiempo de vuelo (MALDI-TOF) y secuenciación de Edman. El mapa fue utilizado para levantar anticuerpos de alto título en conejos usando el adyuvante Titermax y caracterizar la especificidad de IgE de alergénicos pacientes sensibilizados a Ara h 2. El antisuero exclusivamente detecta Ara h 2 en extracto crudo de maní con un título de niveles por Western blot y reacciona específicamente con el epitopo 3 de Mapeo epitopo para una biblioteca de péptidos sintéticos de sólido-fase-limite 15-mer que cubren toda la secuencia de Ara h 2. Estos epitopos IgE-reactivos son de alta relevancia analítica como que podrían constituir la base para los sistemas de detección específicos del epítopo para uso en control de calidad en la industria alimentaria o con fines forenses en casos de reacciones fatales a lo contrario no detectan proteínas cacahuetes.
Aislamiento Y Caracterización De Natural Ara H 6: Evidencia De Un Cacahuete Más Alérgenos Con Supuesta Relevancia Clínica Basan En La Resistencia a La Digestión De La Pepsina Y El Calor
Alergia del cacahuete es un importante problema de salud debido a su prevalencia y la gravedad potencial de la reacción alérgica. La caracterización de los alergénicos del cacahuete es crucial para la comprensión del mecanismo de la alergia del cacahuete. Recientemente, hemos descrito la clonación del alergeno cacahuete Ara h 6. El objetivo de este estudio fue el aislamiento y la caracterización adicional de nAra h 6. Nos purifica nAra h 6 del cacahuete crudo extracto usando gel filtración y cromatografía de intercambio aniónico. La preparación se caracterizó más por electroforesis en geles de poliacrilamida bidimensional (2-D página) con posterior immunoblotting. Estabilidad de nAra h 6 fue estudiada por un ensayo de digestibilidad in vitro, así como por la resistencia contra el tratamiento térmico. Secuencia de nAra h 6 identificó la secuencia del aminoácido N-terminal MRRERGRQGDSSS. Además resulta claramente demostrado estabilidad de nAra h 6 contra la digestión de la pepsina y calefacción. Inmunoglobulina G (IgE) obligatorio análisis y su actividad biológica que se muestra por RBL 25/30-prueba de natural Ara h 6 admite la importancia de este alérgeno maní. Investigación de nAra h 6 reveló evidencia de un cacahuete más alérgenos con supuesta relevancia clínica basan en la resistencia a la digestión de la pepsina y el calor.
Estructura Y Estabilidad De Los Alergénicos Del Cacahuete Tipo Albúmina 2S: Implicaciones Para La Severidad De Las Reacciones Alérgicas Cacahuetes
Resistencia al calor y enzimas proteolíticas se cree que una propiedad prerrequisito de los alérgenos alimentarios. De maní (Arachis hypogaea) son la causa más frecuente de las reacciones alérgicas de la comida fatal. Se estudiaron los alergénicos 2S albúmina Ara h 2 y el alergeno menor homólogo Ara h 6 a nivel molecular con respecto a la potencia alergénica del alergeno nativo y tratados con proteasa. Una estructura de alta resolución de la solución de la proteasa-resistente base de Ara h 6 se determinó mediante Espectroscopia NMR y modelado de homología se aplicó para generar una estructura de h 2 de Ara. Ara h 2 parece ser el alergeno más potente, a pesar de que los dos los alergénicos del cacahuete compartan substancial reactividad cruzada. Ambos alérgenos contienen núcleos que son altamente resistentes a la digestión proteolítica y a temperaturas de hasta 100 grados centígrados. A pesar de que la capacidad de unión de anticuerpos IgE fue reducida por el tratamiento de la proteasa, la liberación del mediador de un equivalente funcional de un mastocito o basófilo, la célula de (leucemia basophilic de rata) RBL humanizada, demostrada que esta reducción en la capacidad de unión de anticuerpos IgE no necesariamente se traduce en reduce potencia alergénica. Nativa Ara h 2 y Ara h 6 tienen prácticamente idéntica potencia alergénica en comparación con los alergenos que fueron tratadas con enzimas digestivas. Los pliegues de los corazones alergénicos son prácticamente idénticos entre sí y con el doble de las regiones correspondientes en las proteínas no digeridas. La extrema estabilidad inmunológica de las estructuras de base de Ara 2 y Ara h 6 proporciona una explicación para la persistencia de la potencia alergénica incluso después de la transformación de los alimentos.
