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Articles by Mary Catherine Reneer in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Generation der induzierte regulatorische T-Zellen aus primären humanen naiven und Gedächtnis-T-Zellen
Department of Microbiology, Immunology and Molecular Genetics, University of Kentucky
Wir beschreiben ein Verfahren zum Erzeugen regulatorische, Speicher und naive T-Zellen aus einem einzelnen menschlichen Blutspender. Polarisierten Tregs können dann auf andere Teilmengen in einer Vielzahl von genetischen und funktionelle Anwendungen mit genetische Homogenität, einschließlich einer Unterdrückung Assay auch hier detailliert verglichen werden.
Other articles by Mary Catherine Reneer on PubMed
Charakterisierung Einer Sialinsäure - Und P-selectin Glykoprotein Ligand-1 Unabhängig Adhesin Tätigkeit in Der Granulocytotropic Bakterium Anaplasma Phagocytophilum
Anaplasma Phagocytophilum, der ätiologischen Agent des menschlichen granulocytic Anaplasmosis, ist ein obligat intrazelluläres Bakterium, die Neutrophilen und neutrophil Vorstufen kolonisiert. Das Granulocytotropic-Bakterium verwendet mehrere Adhesins, die kooperativ an der N-terminalen Region P-selectin Glykoprotein Ligand-1 (PSGL-1) und an Sialyl-Lewis binden x (sLe(x)) auf myeloid Zellen Oberflächen ausgedrückt. Anerkennung von sLe(x) erfolgt durch Interaktionen mit alpha2, 3-sialic Acid und alpha1, 3-Fucose. Es ist unbekannt, ob andere Bakterien-Host Zelle Interaktionen beteiligt sind. In dieser Studie haben wir für A. Phagocytophilum Organismen angereichert, die nicht verlassen sich auf Sialinsäure bezüglich einer zellulären Adhäsion durch die Aufrechterhaltung der Stamm NCH-1 in HL-60-Zellen, die stark Undersialylated sind. Die ausgewählten Bakterien, genannt NCH-1A, zeigen auch vermindert Abhängigkeiten von PSGL-1 und alpha1, 3-Fucose. Optimale Adhäsion und Invasion von NCH-1A erfordern Interaktionen mit den bekannten Determinanten (Sialinsäure, PSGL-1 und alpha1, 3-Fucose), aber keiner von ihnen ist absolut notwendig. NCH-1A Bindung an sLe (X)-modifizierte PSGL-1 erfordert die Anerkennung der bekannten Determinanten in der gleichen Sitten als sonstige A. Phagocytophilum-Stämme. Diese Daten legen nahe, dass A. Phagocytophilum drückt eine separate Adhesin von denen Sialinsäure, alpha1, 3-Fucose und der N-terminalen Region PSGL-1. Wir schlagen vor, dass NCH-1A Upregulates Ausdruck dieser Adhesin.
Sialyl-Lewis-X-unabhängige-Infektion Menschlicher Myeloid Zellen Durch Anaplasma Phagocytophilum Stämme HZ Und HGE1
Anaplasma Phagocytophilum, die Erreger der menschlichen granulocytic Anaplasmosis, ist ein obligat intrazelluläres Bakterium, der Neutrophilen und neutrophil Vorstufen infiziert. Bakterielle Anerkennung von P-selectin Glykoprotein Ligand-1 (PSGL-1) und die alpha2, 3-Sialylated - und alpha1, 3-Fucosylated-Gruppe Sialyl-Lewis x (sLe(x)), die ändert des PSGL-1 N-Terminus, ist wichtig für die Verklebung auf und Invasion der myeloid Zellen. Wir haben bereits bewiesen, dass A. Phagocytophilum Organismen der NCH-1-Stamm, die ein sLe (X) nutzen-modifizierte PSGL-1-unabhängigen Mittel der Eintrag kann durch Anbau in Undersialylated HL-60-Zellen, die nicht in der Lage, sLe(x) zu konstruieren sind für bereichert werden. Weil es nicht bekannt war, ob andere A. Phagocytophilum-Isolaten diese Fähigkeit teilen, haben wir unsere Studien zu den geographisch verschiedenen Klängen HZ und HGE1 erweitert. HL-60 A2 ist eine klonale Zelllinie, die für Sialylation und alpha1, 3-Fucosyltransferase defekt ist. HL-60 A2 Zelle Oberflächen, also nicht nur fehlt sLe(x) sondern sind auch praktisch frei für andere Sialinsäure - und/oder alpha1, Glykan 3-Fucose-geändert. Durch den Anbau HZ und HGE1 in HL-60 A2-Zellen, wir Kaoline für bakterielle Subpopulationen (HZA2 und HGE1A2 genannt), die binden bzw. anstecken myeloide Zellen in Abwesenheit von Sialinsäure und alpha1, 3-Fucose und in Anwesenheit von Antikörper blockiert, die das N-Terminus PSGL-1. Somit mehrere A. Phagocytophilum Isolate teilen die Fähigkeit zur Nutzung von sLe (X)-PSGL-1-abhängigen und -unabhängige Wege des Eintrags in myeloid Zellen modifiziert. HZA2 und HGE1A2 stellen angereicherte bakterielle Bevölkerungen, die Präparation der die Komplexität der Wechselwirkungen zwischen A. Phagocytophilum und Host myeloid Zellen helfen werden.
Anaplasma Phagocytophilum MSP2 (P44)-18 Vorherrscht Und in Mehreren Isoformen in Den Menschlichen Myeloid Zellen Geändert Wird
Anaplasma Phagocytophilum ist das ätiologische Mittel des menschlichen granulocytic Anaplasmosis. MSP2(P44), das Bakterium großen Oberfläche Protein, wird von einer Familie paralogen Gen codiert und hat verwickelt wurde, in einer Vielzahl von pathobiological Prozesse, einschließlich Antigene Variation, Host-Anpassung, Adhäsion, porin Aktivität und strukturelle Integrität. Der Konsens zwischen mehrere Studien durchgeführt, die auf der DNA und RNA ist, dass eine heterogene Mischung aus einer begrenzten Anzahl von Abschriften der msp2(p44) während der in-vitro Kultivierung von A. Phagocytophilum ausgedrückt wird. Solche Analysen sind noch nicht auf die Protein-Ebene ausgeweitet werden. In dieser Studie verwendeten wir Proteomic und Molekulare Ansätze bestimmen die MSP2 (P44)-18 ist die vorherrschende, wenn nicht die einzige Paralog ausgedrückt und wird geändert in mehrere 42-44-kDa Isoformen von A. Phagocytophilum Stamm HGE1 während der Infektion von HL-60-Zellen. Das msp2(p44)-Ausdruck-Profil wurde für msp2 homogene (p44)-18. So MSP2 (P44)-18 darf einen Fitness-Vorteil in HL-60-Zellkultur ohne selektive immun Druck haben. Auch wurden mehrere neuartige 22-27 kDa MSP2 Isoformen fehlt ein Großteil der N-terminalen konservierte Region identifiziert. A. Phagocytophilum MSP2(P44) Orthologen ausgedrückt durch andere Krankheitserreger in der Familie Anaplasmataceae sind glykosyliert. Gaschromatographie offenbart, dass rekombinante MSP2 (P44)-18 wird geändert, indem Glukose, Galaktose, Xylose, Mannose und Spuren von anderen Glycosyl-Rückständen. Diese Daten sind die ersten, die differentielle Änderung der alle A. Phagocytophilum MSP2(P44) Paralog zu bestätigen und die erste für Ausdruck der gekürzte Versionen von solche Proteine nachzuweisen.
Anaplasma Phagocytophilum Infiziert Zellen Der Megakaryocytic Linie Durch Sialylated Liganden Jedoch Fehlschlägt, Thrombozyten-Produktion Zu ändern
Anaplasma Phagocytophilum ist ein obligat intrazelluläre bakterielle Erreger, die vor allem neutrophile bewohnt. Um markierte Thrombozytopenie führt jedoch zu Infektionen mit A. Phagocytophilum ein gemäßigter. Im Host Neutrophilen verwendet A. Phagocytophilum Sialylated Liganden, in erster Linie P-selectin Glykoprotein Ligand-1 (PSGL-1), seine Wirtszelle eingeben. PSGL-1 ist eine breite Palette von blutbildenden Zellen, einschließlich Erkrankung geäußert. In dieser Studie war es die Hypothese, dass (i) Zellen der megakaryocytic Linie (MEG-01 Zellen) anfällig für A. Phagocytophilum Infektionen wäre und (Ii) Infektion kann Änderungen in der Produktion der Thrombozyten zur Infektion-induzierte Thrombozytopenie auslösen. Es wurde festgestellt, dass MEG-01 Zellen anfällig für Infektionen sind. MEG-01 Zellen auszudrücken reichlich Sialylated Liganden wurden die am anfälligsten für Infektion und das Fehlen von Sialylation oder Blockierung von PSGL-1, nur Infektion Anfälligkeit. Produziert wird jedoch infizierte Zellen der MEG-01 Proplatelets und Thrombozyten-ähnliche Partikel nicht infizierten Zellen vergleichbar. Diese Ergebnisse markieren Sie ein neuartiges Ziel der Pathogen-Infektion und schlagen vor, daß der Erreger ähnliche Strategien, um Zugriff auf Erkrankung nutzen kann. Direkte Erreger-Änderung der Thrombozyten-Produktion kann keine Infektion-induzierte Thrombozytopenie Rolle.
Anaplasma Phagocytophilum PSGL-1-unabhängige Infektion Erfordert Keine Syk Und Führt Zu Weniger Effizient AnkA-Lieferung
Anaplasma Phagocytophilum ist ein obligat intrazelluläres Bakterium, die Neutrophilen verursachen granulocytic Anaplasmosis in Menschen und Säugetiere befällt. P-selectin Glykoprotein Ligand-1 (PSGL-1) und die Tetrasaccharide Sialyl-Lewis x (sLe(x)), welche Caps-PSGL-1 N-Terminus, sind bestätigte A. Phagocytophilum Rezeptoren. A. Phagocytophilum kann sLe (X)-modifizierte PSGL-1-abhängigen und -unabhängige Infektion. PSGL-1 N-Terminus-vermittelten Eintrag ist abhängig von Milz-Tyrosinkinase (Syk). Hier haben wir festgestellt, dass PSGL-1-unabhängige Eintrag nicht bakterielle Replikation ändert und untersucht, ob es geht mit NCH-1A2 Syk, eine angereicherte Teilgesamtheit von A. Phagocytophilum NCH-1 durch Anbau in einen sLe (x) - mangelhafte HL-60 Zelllinie, HL - 60 A2. Pharmakologische Hemmung der Syk fast schafft NCH-1-Infektion, aber NCH-1A2-Invasion nicht ändert und nur geringfügig reduziert NCH-1A2-Vermehrung. Dieses Phänomen wurde mithilfe einer konkurrenzfähigen Infektion Probe bestätigt PSGL-1-abhängigen und -unabhängige A. Phagocytophilum Organismen umgewandelt, mCherry oder grün fluoreszierendes Protein beziehungsweise auszudrücken. Wir hemmende auch gegen Lieferung und Tyrosin-Phosphorylierung von A. Phagocytophilum Effektor, AnkA, nach NCH-1oder NCH-1A2 Inkubation mit HL-60 oder HL-60 A2-Zellen in Anwesenheit von PSGL-1 blockierende Antikörper. PSGL-1 N-Terminus Anerkennung fördert optimale AnkA Lieferung während Bindung an sLe(x) oder an den unbekannten Rezeptor vergleichsweise weniger wichtig für diesen Prozess.
Differentielle Ausdruck Und Glykosylierung Von Anaplasma Phagocytophilum Großen Oberfläche Protein 2 Paralogs Während Der Kultivierung in Wirtszellen Sialyl-Lewis-X-Mangel
Viele mikrobielle Erreger außerdem Ausdruck und/oder posttranslationale Modifikationen ihrer Oberfläche Proteine als Reaktion auf die Dynamik in ihre Host-Mikroumgebungen, optimale Interaktion mit ihren Wirtszellen zu behalten bzw. die humorale Immunantwort zu entgehen. Anaplasma Phagocytophilum ist ein Intragranulocytic Bakterium, die Sialyl-Lewis nutzt x (sLe(x))-P-selectin Glykoprotein Ligand 1 geändert, als ein Rezeptor für myeloide Zellen zu infizieren. Bakterielle Bevölkerungen, die nicht auf diesen Rezeptor erhalten Sie durch Anbau in sLe (X)-defekte Zelllinien. A. Phagocytophilum großen Oberfläche Protein 2 [Msp2(P44)] wird von den Mitgliedern einer Familie paralogen Gen kodiert und es wird spekuliert, Rollen in Host-Verfilmung spielen. Wir beurteilen die Ergänzung von Msp2(P44) ausgedrückt Paralogs von A. Phagocytophilum während der Infektion SLE (x) - kompetente HL-60 Zellen und zwei HL - 60 Zelllinien fehlerhaft für sLe(x) Ausdruck. Mehrere Msp2(P44) und N-unheilbar abgeschnitten, 25 - 27-kDa-Isoformen mit verschiedenen isoelektrische Punkte und elektrophoretische Mobilitäten in jede Zelllinie ausgedrückt wurden. Die Ergänzung zum Ausdruck gebrachten msp2(p44) Paralogs und die Glycosyl-Rückstände ändern Msp2(P44) schwankt beträchtlich bakteriellen Bevölkerungen von sLe (X) erholt-kompetent und -mangelhaft Wirtszellen. So fiel Verlust der Host Zelle sLe(x) Ausdruck mit differentiellen Expression und Glykosylierung von A. Phagocytophilum Msp2(P44). Dies verstärkt die Hypothese, die dieses Bakterium ist in der Lage, eine Vielzahl von Oberfläche exponierten Moleküle zu generieren, die Antigenen Vielfalt bieten und mehrere Bindungseigenschaften führen könnte.
Farbwechsel Photonische Kristalle Erkennen Explosion Exposition
Induziert durch Explosion Hirntrauma (bTBI) ist der "Signatur" der aktuellen Kriege im Irak und in Afghanistan. Jedoch keine objektive Informationen der relativen Explosion Exposition, Warfighters mit bTBI dürfen keine angemessenen medizinischen Versorgung erhalten und laufen Gefahr auf dem Schlachtfeld zurückgegeben wird. Dementsprechend haben wir eine farbmetrisch Explosion Verletzungen Dosimeter (BID) geschaffen, die materiell Vertragsverletzung Photonische Kristalle Explosion Exposition erkennen ausnutzt. Erscheinen wie einen farbigen Aufkleber, ist das Angebot in lichtempfindliche Polymeren über Mehrstrahl Interferenz Lithographie produziert. Obwohl sehr stabil in Gegenwart von Hitze, Kälte oder körperliche Auswirkungen, geformte Mikro - und Nanostrukturen des Angebots werden physisch verändert genau durch Explosion Exposition, was zu Farbänderungen, die Explosion Intensität entsprechen. Dieser Ansatz bietet einen leichten, macht-free Sensor, der leicht mit bloßem Auge interpretiert werden kann. Wichtig ist, schlug mit zukünftigen Raffinesse, die diese Technologie eingesetzt werden kann um Soldaten gemachten Blast auf Ebenen zu identifizieren um supra-Schwellenwert für non-Impact Explosion mild TBI induziert.
Ein Multimode Schock-Rohr Für Untersuchung Von Knall-induzierte Schädel-Hirn-Verletzungen
Explosion-induzierten leichten Hirntrauma (bTBI) ist in den letzten militärischen Konflikten immer häufiger geworden. Die Mechanismen, durch die non-Impact-Explosion-Exposition in bTBI Ergebnisse, werden nur unvollständig verstanden. Aktuelle Modelle der kleinen tierischen bTBI nutzen vorwiegend Druckluft angetriebene Membrane Bruch als Explosion Welle Quelle, während große Tiermodellen chemischen Sprengstoff verwenden. Die Druck-Signatur jeder Prüfphase Explosion ist einzigartig, macht es schwierig, die Beiträge der verschiedenen Komponenten von der Druckwelle zu bTBI zu bewerten, bei Verwendung einer einzigen Explosion-Datenquelle. Wir verwendet ein Multimode Schock-Rohr, der McMillan Explosion Gerät, zur Nutzung von Druckluft - komprimiertes Helium-gesteuerte Membrane Bruch, der Sprengstoff Knallgas und und Cyclotrimethylenetrinitramine (RDX, die Hauptkomponente des C-4 Plastiksprengstoff) als treibende Quelle. Bei ähnlichen Maximal blast Überdruck, die positive Druck-Phase Druckluft angetriebene Blasten war länger und positive Impuls war größer, als die Schockwellen, die durch andere treibenden Quellen produziert beobachtet. Helium-gesteuerte Shockwaves stärker ähnelte RDX Blasten, aber verschiebt Luft erstellt eine Hypoxie-Umgebung innerhalb der Schock-Tube. Druck-Zeit-Spuren von Knallgas-gesteuerte Shockwaves waren sehr ähnlich Vorverbunde nach RDX, obwohl sie erhöhten Kohlenmonoxid Maß durch Verbrennung von der Polyäthylensack geführt verwendet, um die Gase innerhalb der Schock-Schlauch vor der Detonation enthalten. Ratten ausgesetzt Druckluft angetriebene Blasten hatte vaskuläre Schäden ausgeprägter als diejenigen ausgesetzt Knallgas-gesteuerte Blasten von der gleichen Gipfel Überdruck, darauf hinweist, dass Unterschiede im Knall Merkmale als Höhepunkt Überdruck Welle das Ausmaß der bTBI beeinflussen können. Verwendung der dieser Multimode Schock-Rohr in kleiner Tiermodelle ermöglicht Vergleich über das Ausmaß der Hirnschädigung mit der Druck-Zeit-Signatur, die mit jeder Explosion-Modus, Erleichterung der Auswertung der Explosion Welle Komponenten zur bTBI.
Am Rande Induzierte Menschliche Regulatorische T-Zellen Zu Entkoppeln Kv1.3 Aktivierung Von TCR-assoziierte Signalisierung
Am Rande induzierte sind Tregs (iTregs) als eine funktionelle und physiologisch relevanten T-Zell-Untergruppe anerkannt wird. Verständnis, dass die molekulare Basis der Entwicklung ist ein notwendiger Schritt vor das therapeutische Potenzial von iTreg kann Manipulation genutzt werden. In dieser Studie berichten wir, dass die Differenzierung der primären menschlichen T-Zellen, Suppressor-iTregs umfasst die Verlagerung der proximalen TCR Signalling Schlüsselelemente der hochaktiven IL-2-Rezeptors (IL-2-R) Weg. Neben der Rekrutierung von Lymphozyt-spezifischen Protein-Tyrosinkinase (Lck) den IL-2-R-Komplex haben wir festgestellt, die Dissoziation des Spannung-Gating K(+) Kanals Kv1.3 von der TCR-Pathway und seiner funktionalen Kopplung zu den IL-2-R. Der regulatorische Switch Kv1.3 Tätigkeit im iTregs darstellen kann, einen wichtigen Faktor in die Signalisierung Umpolung, die mit der Entwicklung der periphere menschliche iTregs und Schuppen neues Licht auf die gegenseitige Übersprechen zwischen TCR und die IL-2-R-Wege verbunden sind.
