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Articles by Nijole Jasinskiene in JoVE
JoVE General
트렌스 제닉 모기를 구하는 A. aegypti의 태아의 Microinjection
1Department of Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine (UCI), 2Department of Molecular Biology and Biochemistry, Department of Microbiology and Molecular Genetics, University of California, Irvine (UCI)
이 비디오에서는 Nijole Jasinskiene는 뎅그열 발열에 대한 벡터 아르 유전자 변형 Aedes aegypti 모기를 생성하기 위해 사용된 방법을 보여줍니다. 정확하게, microinjection의 바늘을 준비하는 배아를 dessicating, 그리고 microinjection을 수행하기위한 기술은 증명됩니다.
Other articles by Nijole Jasinskiene on PubMed
개발 및 Aedes Aegypti 황열병 모기에 Transgenesis의 응용 프로그램
Transgenesis 기술 Aedes aegypti 황열병 모기에 대 한 개발 되었습니다. 이 모기의 번째에 exogenous DNA의 성공적인 통합 클래스 II transposable 요소와 헤르메스, 마리너와 piggyBac 달성 되었습니다. 다양 한 표식 유전자, Drosophila melanogaster의 cinnabar(+) 유전자와 형광 단백질 유전자를 포함 하 여 모니터링 이러한 요소를 삽입 하려면 사용할 수 있습니다. 여러 요소와 마커 유전자의 가용성 강력한 벡터 곤충이 질병의 전송에 대 한 소설, 유전학 기반 제어 전략 개발을 위한 자료의 기본적인 생물 학적 속성을 조사 하는 도구 집합을 제공 합니다.
유전자 벡터 및 모기 Transposable 요소 동작입니다
모기에 대 한 효율적인 세균 라인 변환 기술 개발 동물학 찾고 분리 하 고 분석 하는 유전자의 기능을 증가 했다. 현재 사용할 수 있는 시스템 유틸리티 염색체 통합 후 초기 통합 이벤트 및 그들의 행동 중 유전자 벡터의 동작을 포함 하 여 요인의 숫자에 의해 결정 됩니다. 게시물 동작 여부 기본 유전자 벡터로 현재 근무 중인 transposable 요소 유전자에 태그를 추가 하 고 증강 트래핑 대리인으로 서 도움이 될 것입니다 결정할 것입니다. 기존의 곤충 벡터의 게시물 행동은 광범위 하 게 검사 하지. Mos1 곤충에 기본 세균 선 변환 벡터로 유용 하지만 비효율적으로 Drosophila melanogaster Aedes aegypti에 remobilized. 헤르메스 디 melanogaster를 효율적으로 변환 하 고이 수 종 remobilized 수 있습니다. 이 요소는 또한 모기 결과: 플라스 미드 DNA 측면의 삽입에에서 유전자 변형 A. aegypti 하지만 통합 모드 만드는 유용 합니다. A. aegypti 및 일반적인 잘라내기 및 붙여넣기 메커니즘;를 사용 하 여 커서가 소마에 헤르메스를 remobilized 수 있습니다. 그러나, 요소 세균 라인에 remobilize 하지 않습니다. piggyBac 유전자 변형 모기를 만드는 데 사용할 수 있습니다 하 고 때때로 간단한 잘라내기 및 붙여넣기 메커니즘을 다른 메커니즘을 사용 하 여 통합 합니다. 예비 데이터는 remobilization은 자주 것이 좋습니다. 미 노스도 모기에 기능 나타나고, 다른 유전자 벡터 처럼 비효율적으로 통합에 따라 remobilize. 이러한 결과 향후 유전자 벡터 개발 노력 및 응용 프로그램에 대 한 의미.
높은 효율, 살 균 소 P1 Cre LoxP 시스템 Aedes Aegypti 황열병 모기에 의해 마커 유전자의 사이트별 절단
곤충의 통합된 transgenes에서 특정 DNA 시퀀스의 절단 유전자 발현 조절에 중요 한 있을 수 있습니다 구조 요소의 현장에서 절 개를 허용 합니다. 또한, 단일 통합 사이트의 컨텍스트에서 잠재적인 제어 요소의 조작 주변 게놈의 삽입 사이트 영향에 대하여 완화. Cre loxP 사이트별 재조합 시스템은 유전자 변형 황열병 모기, Aedes aegypti에서에서 마커 유전자를 제거 하려면 성공적으로 사용 되었습니다. 총 절단 프로토콜에서 발생 하는 모든 비옥한 가족의 33.3% 사이트별 절단 cre loxP 중재의 증거를 보여주었다. 절단 주파수 개별 가족 내에서 99.4%로 높은 것으로 밝혀졌다. Cre recombinase 정확 하 게 모기 게놈에서 loxP 사이트를 인식 하 고 진작 절단 표시 했다. FLP/FRT 사이트별 재조합 시스템과 비슷한 실험 모기 염색체에서 마커 유전자의 절단을 입증 하지 못했습니다.
형성 및 황열병 모기 Aedes Aegypti PiggyBac Transposable 요소의 큰, 불안정 한 탠덤 배열의 손실
클래스 II transposable 요소, piggyBac, 황열병 모기, Aedes aegypti 변환 하는 데 사용 되었다. 두 개의 변환 된 라인에서 자손의 15-30%만 EGFP 마커 유전자의 모자이크 식 표시 이러한 개인과 transgene, 상속. 남부 분석, 유전자 증폭 genomic DNA와 플라스 미드 구조 실험 제공 증거가이 라인 piggyBac 변환 구문 높은 사본 수를 포함 하 고이 DNA의 많은 기증자 및 도우미 plasmids의 구성 되어 있습니다. 한 줄에 대 한 상세한 분석 piggyBac 시퀀스의 대부분 단위 길이 기증자 또는 도우미 plasmids 단일 세대에서 대 거 손실 될 수 있는 큰 탠덤 배열에서 배열 했다 보여주었다. Transposase 소스와 많은 그대로 기증자 요소의 존재에도 불구 하 고 Piggybac의 보수 (잘라내기 및 붙여넣기) 전위 없음이 라인에서 관찰 되었다. 이러한 결과 통제 및 예기치 않은 재조합이이 모기에의 한 결과 공개 하 고 추가 조사는 transposable 요소 전에 필요한 piggyBac 모기 인구 병원 체 저항 유전자를 유전 드라이브 메커니즘으로 사용할 수 있습니다와 같은 결론을 지원.
C1q와 MBL, 타고 난 면역 체계의 구성 요소 Monocyte Cytokine 식에 영향
그것은 최근에 타고 난 면역 반응, 감염에 대 한 강력한 첫 번째 응답은 후속 적합 한 면역 반응의 특성 결정에 큰 영향을 인식 하고있다. C1q, 스 바인딩 lectin (MBL) 및 단백질의 방어 콜라겐 가족의 다른 구성원 패턴 인식 분자, 병원 균, 세포 파편과 apoptotic 세포 생체 외 및 생체 조건의 식 균 작용을 향상 시킬 수 있습니다. 인간은 결핍 c1q에 루 푸 스 같은 자가 면역 질환 필연적으로 개발 하 고 C1q 녹아웃 생쥐의 연구 보여 자기 면역 응답에 대 한 성향 가진 apoptotic 세포의 클리어런스의 결핍. 여기에 제시 된 데이터는 식 균 작용 향상 된 조건 하에서 c1q와 MBL 변조 cytokine 생산 Mrna와 단백질 수준에서 보여 줍니다. 특히 타고 난 면역 체계의 이러한 인식 분자 신호 lipopolysaccharide 유도 proinflammatory cytokines, 인터 루 킨 (IL)의 탄압으로 이어지는 인간의 말 초 혈액 단 세포를 기여-1alpha IL 1beta 및 cytokines 일리노이-10, 일리노이-1 수용 체 길 항 제, monocyte chemoattractant 단백질-1과 일리노이-6의 분 비 증가. 이러한 데이터 proinflammatory 응답의 방어 콜라겐 중재 억제 apoptotic 세포의 정리 하는 동안 autoimmunity의 소지를 없애기 중요 한 단계를 수 있습니다 가설을 지원 합니다.
말라리아 벡터 Anopheles Stephensi의 AsVg1, Vitellogenin 유전자의 프로모터의 기능적 특성 분석
모기 매개 질병의 전송을 제어 하기 위한 유전자 전략 일부 벡터 인구에 antipathogen 이펙터 유전자의 introgression에 대 한 호출 합니다. 그들의 효능을 극대화 하기 위해 이펙터 분자의 표현을 직접 생 모기 발기인 및 다른 cis 연기 DNA 시퀀스를 필요 합니다. -인코딩 유전자 제어 시퀀스 조직을 운전에 대 한 후보는-Vitellogenin (Vg), 무대 및 성 관련 표현의 exogenous 유전자. Anopheles stephensi Vg 유전자, AsVg1, 중을 복제 하 고 전체 길이의 Cdna로 850 자료 쌍 5'-끝에 인접 한 했다 시퀀싱 및 특징. Asvg1의 여성 혈액 공급의 지방을 신체 조직에 제한는 고 개념적 번역 제품의 아미노산 시퀀스는 > 85 %vgs 다른 anopheline와 동일 합니다. 이러한 특성 AsVg1 Vg 인코딩 유전자 결론을 지원 합니다. AsVg1 상 cis 규제 시퀀스의 기능 분석은 유전자 변형 모기를 사용 하 여 수행 되었습니다. 결과 바로 옆 3' 엔드 맞이 지역 유전자의 5'-끝에 850 자료 쌍을 포괄 하는 DNA 파편은 직접 섹스-리포터 유전자의 무대 및 조직 관련 표현 하기에 충분 했다. 이러한 데이터는 AsVg1 발기인이 말라리아 벡터 모기에 anti-pathogen 이펙터 분자의 표현을 제어 하기 위한 좋은 후보자 임을 나타냅니다.
나노 유전자 제어 DNA 발달 중재 황열병 모기 Aedes Aegypti에서 전위 규제
Transposable 요소 (TEs) 병원 체 저항 유전자 벡터 모기 인구를 통해 확산 드라이브 시스템을 개발 하기 위한 기반으로 제시 됩니다. Transcriptional 변환 제어 전위 중재 곤충 세균 선 구체적으로 표현 하는 유전자 DNA 요소 사용 일부 대상 벡터 종에서 transgene 동작에 대 한 우려를 완화 하 고 nontarget 유기 체에 대 한 효과 대 한 가능성을 제공 합니다. 여기, 우리는 발기인의 성공적인 사용에 설명 하 고 Aedes aegypti, 황열병 모기의 나노 (nos) orthologous 유전자에서의 제어 성 및 조직 관련 표현 영역 추가 맞이 exogenously 마리너 MosI transposase 인코딩 DNA 파생. 유전자 변형 모기 transposase mRNA 풍부 하 게에서 가까이 또는 생 nos 성적표와 여성의 생식 세포에서 독점적으로 표현. 또한, MosI mRNA oocytes 개발에 및 지역화 및 초기 배아 발달 중 후부 장 대에서 유지. 중요 한 것은, 4 5 유전자 변형 라인 검사 기능 transposase 그를 생산 하는 나타내는 모기 게놈으로 두 번째 MosI transgene 동원 가능 했다. 따라서, nos 제어 시퀀스 테 기반 유전자 드라이브 시스템의 일환으로 보기 약속.
말라리아 기생충 전송의 유전자 제어: 조류 모델 시스템에서 감염에 대 한 임계값 수준
Anopheles 모기에 엔지니어링 병원 체 저항에 따라 말라리아 전송 제어를 위한 유전자 전략 다양 한 동물 모델에서에서 테스트 되 고 있습니다. 핵심 구성 요소는 이펙터 분자와 기생충 전송을 줄일 수 있는 효율성. 조류 기생충 Plasmodium gallinaceum의 circumsporozoite 단백질에 바인딩할 단일 체인 체 (scFvs) 2 4 유전자 변형 Aedes aegypti에 비교 하 여 침 샘의 감염 sporozoite의 평균 농도 줄일 수 있습니다. 크게, 모기의 침 샘에 20 sporozoites로 적게 Gallus gallus 척추 호스트에 대 한 전염성이 있다. ScFvs 이펙터 분자로 약속을 잡고, 비록 그들은 감염 기생충 전송 및 질병을 방지 하기 위해 0의 평균 농도 감소 해야한다. 우리는 비슷한 끝점 우리가 질병 전송에 영향을 기대 하는 것 이라면 인간의 병원 체와 도달 해야 결론.
Anopheles Gambiae Vitellogenin (VGT2) 유전자 프로모터 유전자 변형 Anopheles Stephensi 여러 Bloodmeals 다음에 리포터 유전자 제품의 지속적인 축적을 지휘하 고 있습니다
유전 공학 통해 병원 균에 저항력이 만든 모기 질병 전송 제어 하는 전략을 개발 하기 위한 기반으로 제시 됩니다. 모기 유전자에 exogenous antipathogen 이펙터 유전자 도입 유전자 변형 방법 cis 연기 규정 DNA 조직, 무대 및 섹스 관련 transgene 식 제어 필요 합니다. 우리는 Anopheles gambiae, 사하라 사막 이남의 아프리카의 주요 벡터의 vitellogenin 인코딩 유전자에서 파생 된 컨트롤 시퀀스 Anopheles stephensi, 남부 아시아의 도시 말라리아의 벡터에에서는 조직, 무대 및 성별 특정 방식으로에 세 유전자의 표현을 안내할 수 있습니다 보여줍니다. 특정 기자 유전자 발현 유전자 변형 남성 또는 유전자 변형 여성의 혈액 공급에 유전자 변형 혈액 먹이 여성 지방 신체 조직만 관찰 되었다. 여러 bloodmeals 기자 진 녹취 록의 지속적인 존재에 최소한 12 일에 대 한 결과. 영구 식 heterologous 발기인이 중요 한 말라리아 벡터에서 조작된 antipathogen 이펙터 유전자의 전사를 제어 하기 위한 유력한 게.
여성 관련 날지 못하는 형 모기 제어
뎅기열 및 출혈 성 뎅기열 공중 보건 문제가 약된 50-100만 새로운 감염 매년 증가 하 고 있습니다. Aedes aegypti 범위에서 뎅기열 바이러스의 주요 벡터 및이 모기의 제어 크게 인간의 병 적 상태와 사망률을 줄일 것 이다. 현재 모기 제어 방법 충분히 효과적 이며 새로운 접근 긴급 하 게 필요 하다. 조건부 지배적인 치명적 유전자를 운반 하는 모기의 릴리스를 기반으로 하는 "불 임 남성 릴리스" 전략은 매력적인 새로운 제어 방법입니다. 유전자 변형 종자의 Aedes aegypti Aedes aegypti 말라 4 유전자에서 여성 관련 간접 비행 근육 발기인의 사용을 기반으로 단일 transgene 또는 두 개의 별도 transgenes를 사용 하 여 repressible 여성 고유의 날지 못하는 형을가지고 설계 되었다. 이러한 변종 방사선으로 살 균에 대 한 필요성을 제거 하 고 ("유전 파는"), 남성 전용 릴리스 허용 성인 대신 계란의 릴리스를 사용. 또한, 이러한 변종 영역 전체 컨트롤 또는 통합된 유해물 관리 전략의 일환으로 채택 하는 경우 뎅기열의 제거를 용이 하 게 것으로 예상 된다.
Plasmodium Falciparum 개발 유전자 변형 Anopheles Stephensi에 저항을 설계
단일 체인 항 체 (scFvs) 인간 말라리아 기생충, Plasmodium falciparum 대상으로 설계 된 익스프레스 Anopheles stephensi를 생산 하는 transposon 중재 변환 사용 되었다. ScFvs, m1C3, m4B7, 및 m2A10, 침 샘 midgut 또는 sporozoite 침공의 어느 ookinete 침략을 억제 하는 마우스 단일 클론 항 체에서 파생 됩니다. 기생충 표면, m4B7 및 m2A10, Scfvs는 Anopheles gambiae 항균 성 펩타이드를 융합 했다, Cecropin A. 이전에 특징 Anopheles cis 연기 DNA 규제 요소 기생충 개발 scFv 생산을 조정 하는 transgenes에 포함 됐다. 유전자 증폭 및 immunoblot 분석 혈액 먹이 여성 transgene 식 발기인 관련 증가 보였다. ScFv 유전자의 각을 표현 하는 유전자 변형 모기 라인 컨트롤 P. falciparum에 도전 하는 경우 보다 현저 하 게 낮은 감염 수준을 했다.
