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Articles by Ramsey Foty in JoVE
JoVE Bioengineering
Un protocole simple Hanging culture cellulaire pour la production chute de sphéroïdes 3D
Department of Surgery, UMDNJ-Robert Wood Johnson Medical School
Nous décrivons une méthode simple et rapide de générer des tissus 3D-like sphéroïdes et leur application potentielle de quantifier les différences dans les interactions cellule-cellule.
Other articles by Ramsey Foty on PubMed
Alpha5beta1 Médiateur Intégrine Cohésion Tissulaire Forte
Les intégrines et cadhérines sont considérés comme ayant des fonctions distinctes et opposées. Les intégrines sont traditionnellement cités pour leur rôle dans la cellule-substrat interactions, tandis que les cadhérines sont considérés à la médiation d'une forte cohésion intercellulaire. Ensemble, ces systèmes d'adhérence jouent un rôle crucial dans une grande variété de processus cellulaires et de développement, y compris la migration des cellules, la morphologie, la différenciation et la prolifération. Dans ce manuscrit, nous présentons des preuves que les intégrines possèdent la capacité de médiation d'une forte cohésion intercellulaire lorsque les cellules sont cultivées comme des agrégats 3D. La plupart des données d'élucider le rôle des intégrines en tant que médiateurs de la cellule-matrice extracellulaire (ECM) les interactions ont été générés en utilisant les techniques classiques de culture cellulaire dans lequel les cellules sont étalées sur ECM surfaces revêtues en 2D. In vivo, les cellules sont noyées dans un maillage 3D de protéines ECM. Nous émettons l'hypothèse que, dans ce maillage, l'intégrine-ECM interactions peuvent conférer cohésivité à un agrégat de cellules en reliant les cellules adjacentes. Pour tester cette hypothèse, nous avons transfecté ovaire de hamster chinois (CHO-B2) des cellules d'exprimer alpha5beta1 intégrine et a constaté que ces cellules ont formé des agrégats compacts, sphériques. Nous avons mesuré la cohésivité globale à l'aide tensiométrie surface du tissu, une nouvelle technique qui permet de quantifier cellule-cellule cohésivité de sphéroïdes dans des conditions physiologiques. Nous avons déterminé que alpha5beta1 intégrine est capable de conférer une forte cohésivité (sigma = 8.22 cm + / -0,68 dynes /) à des agrégats de alpha5-intégrine des cellules transfectées. Cette cohésion a été jugée indépendante de l'expression cadhérine et était significativement plus grande que la cohésivité conféré sur CHO-B2 cellules transfectées avec la N-cadhérine (sigma = 3.14 + / -0.20 dynes / cm, P </=0.0001), a more traditional cell-cell cohesion system. Fibronectin-null CHO cells that express alpha5beta1 integrin but do not secrete endogenous fibronectin do not form aggregates in fibronectin-depleted medium. Addition of increasing amounts of exogenous dimeric fibronectin to these cells resulted in a dose-dependent compaction. However, compaction failed to occur in the presence of fibronectin monomers. These data indicate that fibronectin is required for alpha5beta1-mediated compaction and that the dimeric structure of fibronectin is essential for this process. Additionally, aggregate formation of the alpha5 integrin transfectants was inhibited by an RGD peptide thus confirming alpha5beta1 integrin specificity. Collectively, these data confirm our hypothesis that alpha5beta1 integrin acts through fibronectin to link adjacent cells together, thus promoting strong intercellular cohesion in 3D cellular aggregates.
Cell Adhesion Cadhérine-médiation Et De La Ségrégation Des Tissus: Déterminants Qualitatives Et Quantitatives
Il est largement admis que la ségrégation des tissus exprimant différents résultats cadhérines de cadhérine-sous-type précis des spécificités de liaison. Cette croyance est largement basée sur des essais dans lesquels des cellules exprimant sous-types différents cadhérine regroupent séparément quand on les secoue en suspension. Dans diverses combinaisons de cellules exprimant NCAM L, E, P, N, R, ou B-cadhérine, la co-agrégation s'est produite lors de forces de cisaillement sont faibles ou absents, mais pourrait être sélectivement inhibé par les forces de cisaillement élevées. Les cellules exprimant P-vs la E-cadhérine coaggregated puis de démixtion, une population enveloppant l'autre complètement. Pour distinguer si cette démixtion est due à des différences dans les affinités cadhérine ou les niveaux d'expression, celle-ci ont été modifiées de façon systématique. Les cellules exprimant soit cadhérine à un niveau inférieur est devenu la couche enveloppant, comme prédit par l'hypothèse d'adhérence différentielle. Toutefois, lorsque les niveaux d'expression cadhérine ont été égalisées, les cellules exprimant P-vs la E-cadhérine est restée mêlée. Dans cette combinaison, "homocadherin" (EE; PP) et "heterocadherin" (EP) adhérences doit donc être de force similaire. Les cellules exprimant R-vs B-cadhérine coaggregated mais démixtion de produire des configurations d'enveloppement incomplète. Cela signifie que R-à B-cadhérine adhérences doit être plus faible que soit "homocadherin" adhérence. Ensemble, cadhérine quantité et la ségrégation des tissus affinité de commande et l'assemblage par spécification des intensités relatives de matures cellule-cellule adhérences.
La Fibronectine Matrice Assemblée Réglemente La Cohésion Cellulaire Médiée Par Alpha5beta1
L'intégrine-matrice extracellulaire (ECM) dans les interactions à deux dimensions des systèmes de culture (2D) sont largement étudiées (Goldstein et DiMilla, 2002, J Biomed Mater Res 59, 665-675;...... Koo et al, 2002 J. Cell Sci. 115, 1423-1433). Moins bien compris est le rôle de l'ECM dans la promotion de la cohésion intercellulaire en trois dimensions (3D) des environnements. Nous avons démontré que les médiatise alpha5beta1-intégrine forte cohésion intercellulaire de 3D agrégats cellulaires (Robinson et al., 2003. J. Cell Sci. 116, 377-386). Pour approfondir le mécanisme de médiation alpha5beta1 cohésivité, nous avons utilisé une série de chimères alpha5beta1-intégrine-exprimant les cellules cultivées en multicouches agrégats cellulaires. Dans ces lignées cellulaires, le domaine alpha5 sous-unité cytoplasmique distale à la séquence a été tronqué GFFKR, remplacé par celui de l'intégrine alpha4, l'intégrine alpha 2, ou maintenue intacte. L'utilisation de ces cellules, alpha5beta1-intégrine-agrégation cellulaire médiée, le compactage et la cohésion ont été déterminées et corrélées avec FN assemblage de la matrice. Les données présentées démontrent que les cellules cultivées en l'absence de support mécanique externe peut assembler une matrice FN qui favorise l'intégrine-médiation compactage global et la cohésion. En outre, l'inhibition de la FN assemblage de la matrice bloque les associations intercellulaires nécessaires pour le compactage, ce qui entraîne la dispersion des cellules. Ces résultats démontrent que FN assemblage de la matrice contribue de manière significative à la cohésion des tissus et représente un autre mécanisme de régulation de l'architecture des tissus.
Cadhérine-médiation Adhésion Cellule-cellule Et La Ségrégation Des Tissus En Relation Avec La Malignité
Nous passons en revue la preuve concernant le fondement de la ségrégation des tissus durant le développement embryonnaire. Ce cloisonnement est montré comme un phénomène non-miscibilité causée par des changements dans les forces d'adhérences entre les cellules mobiles qui accompagnent leur différenciation et de générer des tensions interfaciales aux frontières de la population de cellules. Les voisins mobiles cellules de change en réponse à ces forces d'adhérence générés qui poussent le système vers la configuration de la liaison maximale. Cadhérines dominent ces adhérences intercellulaires, mais intégrine-fibronectine à base adhérences également contribuer à eux ainsi que la cellule-matrice adhérences. A l'interface entre deux populations de cellules de ségrégation existe trois types de cellule-cellule interfaces: AA, BB et AB. Tissus immiscibilité (ségrégation) des résultats lorsque la croix-adhérence est plus faible que la valeur moyenne des deux types d'auto-adhérences, ne nécessite pas (même si elle le permet) des changements qualitatifs dans les molécules d'adhésion cellulaire et est facilement généré même par des changements modérés dans le quantités de molécules d'adhésion sur les surfaces des cellules. Tous les types I et II cadhérines testé croisée respecter, dans la plupart des cas avec des forces proches de ceux de leurs auto-adhérences. Est atteinte maligne un processus de séparation de cellule dans le sens inverse, dans lequel le contre-adhérence entre les cellules cancéreuses et les composants tissulaires de l'hôte est solide par rapport à leur auto-adhérences? Nous passons en revue la preuve de la participation cadhérine dans les cancers du sein, la prostate et du cerveau. Malgré la preuve que la N-cadhérine augmente le caractère envahissant de certaines cellules cancéreuses, nous avons constaté que l'augmentation de l'expression non seulement de la E-cadhérine fonctionnelle, mais aussi de la P-ou N-cadhérine retient la propagation d'autres lignées de cellules malignes au cours (et à travers) une matrice extracellulaire reconstituée.
Mesure Biophysique De La Cohésion De Tumeur Cérébrale
Un avantage de l'utilisation de 3D sphères multicellulaires pour étudier la biologie des tumeurs est qu'ils puissent mieux rapprocher les interactions rencontrées par les cellules in vivo. Nos études antérieures ont montré que le processus de formation sphéroïde est régie par les mêmes principes de la thermodynamique de conduite de la formation de gouttelettes de liquide. Ce comportement de type liquide nous permet de mesurer une propriété clé qui influe sur le comportement de tumeur, à savoir, la cohésion intercellulaire. Nous avons développé une méthode, tensiométrie surface du tissu (TST), pour mesurer la cohésivité, exprimable que la tension superficielle (sigma), d'agrégats de tissus dans des conditions physiologiques. Cette étude utilise le TCT pour mesurer la cohésion des 3 largement utilisés malignes des lignées de cellules d'astrocytome de différents potentiels dans in vitro envahissantes. On compare avec envahissement cohésivité agrégat et à l'expression de la N-cadhérine, un médiateur clé de cellule-cellule de cohésion dans des tissus neuronaux. Nous montrons que les lignées cellulaires présentent un comportement de type liquide-car ils forment sphéroïdes dont la tension de surface est à la fois de force et de volume indépendant; que les agrégats de chaque lignée cellulaire ont une tension superficielle distincte qui est en corrélation avec leur capacité d'invasion in vitro; que la dexaméthasone ( Dex), un agent thérapeutique largement utilisée pour le traitement de la tumeur liée à l'oedème cérébral, augmente et diminue cohésivité global envahissant; que traitement à la dexaméthasone diminue l'invasion d'une manière dose-dépendante, mais seulement lorsque les cellules sont en contact direct avec un de l'autre, et que dex-médiation envahissant diminué en corrélation avec cohésivité globale accrue, telle que mesurée par le TST, mais pas avec la N-cadhérine expression ou la fonction. Nos résultats démontrent que pour ces lignées cellulaires, cohésivité est un excellent prédicteur de la envahissant dans in vitro.
L'hypothèse D'adhérence Différentielle: Une évaluation Directe
L'hypothèse d'adhérence différentielle (DAH), avancé dans les années 1960, a proposé que le liquide comme le tissu d'étalement et des phénomènes de ségrégation des cellules de développement proviennent de tensions superficielles des tissus qui, à son tour résulter de différences dans l'adhésivité intercellulaire. Nos mesures antérieures de tensions de cellules liquide comme de surface globales ont montré que, sans exception, un agrégat de cellules de tension de surface inférieure tend à envelopper une tension superficielle plus élevée à laquelle il adhère. On mesure ici les tensions superficielles des agrégats de cellules transfectées pour exprimer L N-, P-ou E-cadhérine dans variées, des quantités mesurées. Nous avons constaté que dans ces agrégats, dans lequel les cadhérines sont essentiellement les seules molécules d'adhésion cellule-cellule, les tensions de surface globales sont la conséquence directe, fonction linéaire du niveau d'expression cadhérine. Pris dans leur ensemble avec nos résultats antérieurs, la conclusion s'ensuit que la cellule morphogénétique liquide-like et des réarrangements des tissus de tri cellulaire, tissulaire propagation et de la ségrégation représentent des processus d'auto-assemblage guidé par la diminution de la colle de l'énergie sans que les cellules ont tendance à maximiser leur liaison mutuelle . Cette conclusion se rapporte à la physique qui régissent ces phénomènes morphogénétiques et s'applique indépendamment des questions telles que les spécificités des adhésifs intercellulaires.
Extracellulaire Inducteur De Métalloprotéinase De Matrice (CD147) Confère Une Résistance Des Cellules Du Cancer Du Sein à Anoïkis Par L'inhibition De Bim
Surexpression de la métalloprotéinase matricielle extracellulaire inducteur (EMMPRIN ou CD147), un membre de la famille des immunoglobulines et une glycoprotéine enrichi sur la surface des cellules tumorales, favorise l'invasion, métastases, et la croissance et la survie des cellules malignes et confère une résistance à certains médicaments chimiothérapeutiques. Cependant, les mécanismes moléculaires qui sous-tendent les actions de EMMPRIN ne sont pas pleinement compris. Dans cette étude nous avons cherché à déterminer si EMMPRIN contribue au phénotype malin du cancer du sein par inhibition anoïkis, une forme de l'apoptose induite par la perte ou l'altération de la cellule-cellule ou cellule-matrice d'ancrage, et d'explorer les voies de signalisation impliquées. Nous avons constaté que, en l'absence d'attachement, les cellules humaines de cancer du sein exprimant des niveaux élevés de EMMPRIN forment des agrégats moins compactes avec plus grande surface et assemblage de la matrice moins fibronectine, avait élevé la viabilité, et étaient résistants à anoïkis. Knockdown d'expression EMMPRIN par interférence ARN (petits ARN interférents ou d'ARN en épingle à cheveux courts) des cellules cancéreuses sensibilisés à anoïkis, comme l'a démontré par l'activation de la caspase-3, a augmenté fragmentation de l'ADN, et une diminution de la viabilité cellulaire. En outre, nous avons observé que l'accumulation de Bim, une protéine pro-apoptotique BH3-seulement, a été réduite en EMMPRIN cellules exprimant et que l'inhibition de l'expression des niveaux élevés de EMMPRIN protéines Bim et le renforcement de la sensibilité cellulaire à anoïkis. Le traitement des cellules avec un inhibiteur de MEK (U0126) ou d'un inhibiteur du protéasome (époxomicine) également régulation à la hausse d'accumulation et de cellules Bim rendus plus sensibles à anoïkis. Ces résultats indiquent que l'expression de EMMPRIN protège les cellules cancéreuses de anoïkis et que cet effet est médié au moins en partie par une MAP kinase dépendante de la réduction de Bim. Comme la carence en anoïkis est un élément clé de la transformation néoplasique et la croissance invasive des cellules cancéreuses épithéliales, notre étude sur le rôle de la résistance EMMPRIN anoïkis et le mécanisme impliqué souligne le potentiel d'expression EMMPRIN comme un marqueur pronostique et nouvelle cible pour le traitement du cancer.
Fusion Des Tissus Et Tri Cellulaire Dans Le Développement Embryonnaire Et La Maladie: Conséquences Biomédicales
Au cours du développement embryonnaire, séparés des populations de cellules épithéliales et / ou mésenchymateuses prendre contact et fusionnent pour former des unités de tissus nouveaux. Ce processus, connu sous le nom de fusion des tissus, est un événement clé dans de nombreux mécanismes morphogénétiques essentiels et sa rupture peut conduire à des malformations congénitales. Un autre mécanisme par lequel les tissus complexes peuvent se poser porte sur un procédé de tri cellulaire dans lequel l'origine des cellules entremêlées de-mélanger pour générer phases distinctes ou des couches. Différents organismes utilisent une combinaison de fusion des tissus et des cellules de tri d'acquérir la forme. Bien que les deux processus semblent différer de façon mécanique, ils sont intimement liés dans la mesure où ils impliquent tous deux les mêmes déterminants moléculaires et de contribuer à le même schéma corporel. Nous visons à discuter du rôle des molécules d'adhésion et de la dynamique des cellules de fusion des tissus et tri cellulaire, en fournissant des exemples de leur impact dans le développement embryonnaire. Enfin, nous allons faire progresser le concept que l'invasion maligne peut être considéré comme le tri de cellules dans le sens inverse. Matériel supplémentaire pour cet article peut être trouvé sur le site BioEssays (http://www.interscience.wiley.com/jpages/0265-9247/suppmat/index.html).
Surface Du Tissu Tensions Guide in Vitro Auto-assemblage De Cellules De Rongeurs Des îlots Pancréatiques
L'organisation des cellules endocrines dans les îlots pancréatiques est établie à travers une série d'événements morphogénétiques impliquant le tri cellulaire, la migration, et re-agrégation des procédés pour lesquels l'adhésion intercellulaire est pensé à jouer un rôle central. Chez les animaux, qui résultent morphogénétique des événements dans une topologie îlot dans lequel cellules sécrétrices d'insuline former le noyau, tout en le glucagon, la somatostatine, et le polypeptide pancréatique cellules sécrétant séparer à la périphérie. Cellules des îlots pancréatiques isolés s'auto-assembler in vitro en pseudoislets avec l'organisation même type de cellule que des îlots d'origine. Il est largement admis que l'adhésion différentielle entre les cellules des îlots pancréatiques génère cette topologie spécifique. Toutefois, cette adhésion différentielle n'a jamais été rigoureusement quantifiée. Dans ce manuscrit, nous utilisons tensiométrie surface du tissu pour mesurer la cohésion des agrégats sphériques de trois lignes du pancréas immortalisées de cellules de souris îlots. Nous montrons que, comme prédit par l'hypothèse d'adhérence différentielle, les agrégats de la. Interne ségrégation INS-1 et bêta-MIN6 lignées de cellules sont nettement plus cohérent que ceux de l'extérieur ségrégation alpha-TC ligne En outre, nous montrons que la surexpression forcée de la P-cadhérine par l'alpha-TC cellules perturbe de manière significative le processus de tri. Collectivement, les données indiquent que l'adhésion différentielle peut conduire à l'organisation du in vitro de cellules de rongeurs immortalisés des îlots pancréatiques.
Les Différences Quantitatives Dans La Tension De Surface Des Tissus Influence De Positionnement Zebrafish Feuillet Embryonnaire
Cette étude fournit une preuve directe que l'adhésion différentielle fonctionnelle, mesurables comme des différences quantitatives dans la tension de surface des tissus, influe sur le positionnement spatial entre les tissus de poisson zèbre couche germinales. Nous montrons que l'embryon et les tissus ectodermique mesendodermal généré par l'ARNm-surexpression comporter sur le long-échelles de temps comme des fluides non miscibles. Lorsqu'il est mélangé à accrocher la culture baisse, leurs cellules séparer en phases distinctes avec l'ectoderme l'adoption d'une position interne par rapport à la mesendoderm. La position adoptée est directement corrélée avec les différences de tension de surface des tissus. Nous montrons aussi que les tissus couche germinales à partir d'embryons non traités, quand disparu et mis en culture, d'adopter une configuration similaire à ceux de leurs ARNm surexprimant homologues. Bas de régulation de la E-cadhérine expression dans l'ectoderme conduit à la tension de surface réduite et entraîne une inversion de phase avec des cellules ectodermiques la E-cadhérine-appauvri maintenant adoptant une position extérieure par rapport à la mesendoderm. Ces résultats montrent que le tri de cellules in vitro de tissus mesendoderm poisson-zèbre et l'ectoderme est spécifié par les tensions interfaciales des tissus. Nous effectuons une analyse mathématique indiquant que la tension interfaciale entre les cellules des tissus très mobiles contribue à l'organisation spatiale et la dynamique de ces couches germinales in vivo de poisson zèbre.
Morphogenèse Cellulaire in Silico
Nous décrivons un modèle qui simule les cellules sphériques de différents types qui peuvent migrer et interagir soit attrayante ou repoussante. Nous constatons que les deux morphologies attendus et les modèles non signalés précédemment spontanément s'auto-assembler. Parmi les modèles nouvellement découverts sont un état segmenté d'une alternance de disques, et un "shish-kebab" état, dans lequel un type de cellule forme un anneau autour d'un second type. Nous montrons que ces états résultat unique de l'attraction cellulaire qui augmente avec la distance (par exemple, comme étirement membranes viscoélastique), et ne serait pas vu dans traditionnels, par exemple, moléculaires, les potentialités qui diminuent avec la distance. La plupart des États ont trouvé calculs été observée in vitro, et il reste à être établi quel rôle ces états auto-assemblées peuvent jouer dans la morphogenèse in vivo.
Coaction De L'adhésion Intercellulaire Et La Tension Corticale Indique La Tension De Surface Des Tissus
Au cours de la morphogenèse animale, les mouvements cellulaires à grande échelle se produisent, qui impliquent le réarrangement, mutuelle d'étalement, et la compartimentation des populations de cellules dans des configurations particulières. Réarrangements cellulaires morphogénétiques tels que le tri de cellules et de tissus mutuelle propagation ont été comparés avec les comportements de liquides non miscibles, qui leur ressemblent beaucoup. Sur la base de cette similitude, il a été proposé que les tissus se comportent comme des liquides et possèdent une tension de surface caractéristique, qui se pose en tant que collectif, propriété macroscopique des groupes de cellules mobiles, cohering. Mais comment sont les tensions de surface des tissus générée? Différentes théories ont été proposées pour expliquer comment les propriétés des cellules mésoscopiques tels que adhésion cellule-cellule et de la contractilité des interfaces cellulaires peuvent sous-tendre les tensions de surface des tissus. Bien que les travaux récents suggèrent que les deux peuvent être des contributeurs, un modèle explicite pour la dépendance de la tension superficielle des tissus sur ces paramètres mésoscopique a été porté disparu. Ici on montre explicitement ce que le rapport de l'adhérence à la tension corticale détermine la tension de surface du tissu. Notre modèle minimal explique avec succès les données expérimentales disponibles et des prévisions marques, en fonction de la rétroaction entre l'énergie mécanique et la géométrie, sur les formes de cellules à la surface d'agrégats, ce qui nous vérifier expérimentalement. Ce modèle indique que il ya un croisement de l'adhérence dominé corticale tension dominé le comportement en fonction du rapport entre ces deux quantités.
Alpha5beta1 Intégrine-fibronectine Interactions Préciser Le Liquide à Transition De Phase Solide De La 3D Agrégats Cellulaires
L'organisation des tissus durant le développement embryonnaire et la cicatrisation dépend de la capacité des cellules d'une part, d'échanger des collages au cours réarrangement active et sur l'autre pour devenir fixe à la place que l'homéostasie tissulaire est atteint. Cellules réaliser ces tâches contradictoires en régulant soit collages cellule-cellule, sous la médiation par des cadhérines, ou cellule-matrice extracellulaire (ECM) de connexions, réglementés par les intégrines. Integrin alpha5beta1 et de la fibronectine soluble (SFN) sont des acteurs clés dans la cellule-ECM de génération de force et dans la polymérisation ECM. Ici, nous explorons l'interaction entre l'intégrine alpha5beta1 et SFN et son influence sur les propriétés des tissus mécaniques et le comportement de tri cellulaire.
Identification Des Régions Immunoréactives D'homologie Entre Récepteur Soluble De Facteur De Croissance épidermique Et α5 Intégrine
Les protéines codées par le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR/HER1/ERBB1) gène sont étudiées en tant que diagnostic, le pronostic, et les biomarqueurs theragnostic pour de nombreux cancers humains. L'application clinique de ces biomarqueurs tissulaires / tumeur a été limitée, en partie, par des résultats discordants observés pour des récepteurs du facteur de croissance épidermique (EGFR) expression en utilisant des réactifs immunologiques différents. Des études antérieures ont utilisé EGFR-directifs des anticorps qui ne peuvent pas distinguer entre l'EGFR (sEGFR) l'expression pleine longueur et soluble. Nous avons produit et caractérisé un antisérum anti-sEGFR polyclonal dirigé contre un peptide 31-mer (résidus 604-634) situé dans l'unique acide aminé 78-carboxy-terminale de la séquence sEGFR. Ici, nous utilisons cet anticorps afin de démontrer que sEGFR est co-exprimé avec l'EGFR dans un certain nombre de lignées cellulaires dérivées de carcinome. En outre, nous montrons que pour une deuxième protéine de ~ 140 kDa (P140) est également détectée par cet anticorps. Rigoureuse caractérisation biochimique identifie cette seconde protéine d'être α5 intégrine. Nous montrons que pour un peptide d'acide 26-amino dans le domaine de veau de α5 intégrine (résidus 710-735) est de 35% identique en séquence avec un 31-mer carboxy-terminal peptide sEGFR et présente une affinité d'environ 5 fois plus faible pour la lutte contre -sEGFR que le 31-mer homologue peptide sEGFR fait. Nous concluons que l'extrémité carboxy de sEGFR et le veau-1 domaine de α5 intégrine part une région d'identité de séquence, qui se traduit par leur réactivité immunologique avec des anticorps anti-mutuelle sEGFR. Nous démontrons également que les anti-sEGFR favorise la cohésion du tissu en trois dimensions et le compactage in vitro, suggérant en outre un lien fonctionnel entre sEGFR et α5 intégrine et un rôle de veau-1 de domaine dans l'adhésion cellulaire. Ces résultats ont des implications pour l'étude de deux EGFR et sEGFR comme biomarqueurs du cancer et aussi de fournir un nouvel éclairage sur les mécanismes d'interaction entre les isoformes de la surface cellulaire EGFR et des intégrines dans les processus complexes tels que l'adhérence des cellules et la signalisation de survie.
La Fibronectine Matrice Assemblée Supprime La Dispersion Des Cellules De Glioblastome
Le glioblastome (GBM), la forme la plus agressive et la plus commune de tumeur cérébrale primaire, a une survie médiane de 12-15 mois. L'exérèse chirurgicale, la radiothérapie et la chimiothérapie sont rarement curatif depuis les cellules tumorales largement se disperser dans le cerveau. Prévenir la dispersion pourrait être un avantage thérapeutique. Des études antérieures ont rapporté que l'augmentation de cellule-cellule de cohésion peut réduire considérablement l'invasion en décourageant détachement cellulaire de la masse tumorale. Nous avons précédemment rapporté que α5β1 intégrine-fibronectine interaction est un puissant médiateur de la cellule-cellule indirecte de cohésion et que le processus de la fibronectine assemblage de la matrice (FNMA) est cruciale pour établir des liens solides entre les cellules en 3D de tumeurs comme des sphéroïdes. Ici, nous explorons un rôle potentiel dans la prévention des FNMA la dispersion des cellules de glioblastome à partir d'une masse tumorale de type. Grâce à une série de lignées cellulaires dérivées de GBM, nous avons développé un test in vitro pour mesurer la vitesse de dispersion des agrégats sur un substrat solide. Malgré leur grade pathologique semblable, les agrégats de ces lignes se propager à des taux très différents. Étalement de vitesse est inversement proportionnelle à la capacité de restauration FNMA et FNMA dans les cellules de glioblastome sensiblement réduit vitesse de propagation des cellules en conservant plus connecté. Blocage FNMA en utilisant le fragment de 70 kDa de la fibronectine dans les cellules FNMA restaurées sauvetages vitesse de propagation, l'établissement d'un rôle fonctionnel pour FNMA dans la médiation de la dispersion. Collectivement, les données confirment un lien de causalité fonctionnelle entre la restauration de FNMA et la vitesse de dispersion a diminué. Il s'agit d'une première démonstration que FNMA peuvent jouer un rôle dans la dispersion de suppression GBM.
Lung Auto-assemblage Est Modulée Par Des Tensions De Surface Des Tissus
Pour identifier les cellules des propriétés intrinsèques qui facilitent l'interaction entre les épithéliales et mésenchymateuses endodermiques cellules mésodermiques au cours de la morphogenèse du poumon, nous avons développé un modèle de cancer du poumon auto-assemblage qui imite la formation des poumons du foetus dans la structure, la polarité, le système vasculaire, et l'expression de la matrice extracellulaire. Tridimensionnelles des organes pulmonaires (PB) spontanément s'auto-assembler à partir de suspensions unicellulaires et présentent liquide comme des propriétés qui permettent des mesures de taux de compaction et de la cohésion, et qui peut aider à préciser cellulaire auto-organisation. Nous émettons l'hypothèse que les changements dans un ou plusieurs de ces paramètres pourraient expliquer le cas d'hypoplasie pulmonaire associée avec le développement des poumons anormale. Nous avons examiné l'impact de l'endothélium / monocytes-activation polypeptide (PAE) dans le PBS II, parce EMAPII est fortement exprimé dans hypoplasie pulmonaire. EMAPII augmenté de façon significative le taux de compactage et une diminution de la cohésion globale de PBS composé de deux cellules épithéliales et mésenchymateuses. En outre, les effets de EMAPII sur le compactage et la cohésion acte exclusivement par la population de cellules mésenchymateuses en interférant avec assemblage de la matrice de fibronectine. Nous montrons aussi que EMAPII modifie la polarité des cellules épithéliales et protéine C du surfactant expression. Nos résultats démontrent, pour la première fois, que PB possèdent des propriétés similaires liquide qui peuvent aider à guider l'auto-assemblage des poumons du fœtus, et que l'expression peut influer sur les deux EMAPII cellules mésenchymateuses et épithéliales, mais à travers les différents mécanismes moléculaires.
