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Articles by Sara M. Robledo in JoVE
JoVE Immunology and Infection
ハムスターの背部皮膚における皮膚リーシュマニア症：Antileishmanial薬剤のスクリーニングのための有用なモデル
1Program for the Study and Control of Tropical Diseases -PECET-School of Medicine, University of Antioquia, 2School of Agrarian Sciences, University of Antioquia
の皮内注射による皮膚リーシュマニア症の実験的ハムスターモデルの最適化
Other articles by Sara M. Robledo on PubMed
[リーシュ マニア: 薬剤抵抗性と帰属戦略における P 糖蛋白の役割]。
原虫はの罹患率と死亡率の世界 ― ― これらの寄生虫の薬剤耐性の出現によって、さらに複雑な問題の重要な病原です。以下の薬剤抵抗性の機構: 吸収薬のセルには既知の過剰発現と薬物活性化、創薬ターゲットの変更についての損失減少した複数薬物トランスポーター蛋白質。このレビューでは、抵抗の 2 つの重要なコンポーネントを強調している： (1) P 糖タンパク質リーシュ マニアと他の原生動物の薬剤耐性を媒介などの ATP 結合カセット蛋白質の役割多くの構造的、機能的無関連の薬物と薬物・天然物による多剤耐性の反転機構に関する （2） いくつかの概念を交差耐性の開発が続きます。複数の変調器または異種 subtoxic の細胞内薬物濃度を維持するために P 糖タンパク質の容量を変更します。このモードではカルシウム チャンネル遮断薬ベラパミルなどする行為します。ただし、高濃度は、効率的かつ効果的な抑制の必要があり、また、望ましくない副作用を生産します。新しい、自然製品変調器の P 糖タンパク質の発見を強調しました。このカテゴリ変調器を提供するは潜在的改善効果と毒性の哺乳類のホストを下げた。
リーシュ マニア (Viannia) Panamensis: リューシュ薬剤のスクリーニングの GFP の表現を用いた in Vitro アッセイ。
リーシュ マニア Promastigotes (Viannia) panamensis は緑色蛍光蛋白質を表現する p6.5=~-egfp を正常に導入されました。チロシンリン感染リューシュ薬のスクリーニングの in vitro モデルを提供するマクロファージに残った。これはマクロファージに関連付けられた GFP のフローサイト メーターによる既知リューシュ薬、すなわちアムホテリシン B と glucantime に感染した文化の暴露後示されました。GFP の蛍光は、両方のケースで使用される薬剤濃度の増加と感染細胞から徐々 に減少しました。この蛍光アッセイ L. (V.) panamensis によるマクロファージの感染症のための可用性を大幅にリーシュ マニア亜属から異なる Viannia 種の創薬プログラムを容易にします。
リーシュ マニア症の光線力学的治療用リポソームと Acenaphthoporphyrins の関連付け
Acenaphthoporphyrins 光線力学療法のための潜在的な光増感剤が疎水性の彼らの潜在性が制限されます。リポソームは疎水性薬物生体における輸送できる配送車両として広く検討されている.ここ acenaphthoporphyrins 協会と dimyristoyl ホスファチジルコリン (DMPC) と DMPC の混合物から成ってリポソームに成ってリポソームに関する研究 (哲) のコレステロールおよびリポソームの組成が会合定数に与える影響を評価するために 2:1:0.8 モル比で distearoyl ホスファチジルグリセロール (DSPG)。DMPC ののみから成る「リポソーム、小さい monoacenaphthoporphyrin 5.5 x 10 (4) m(-1) 大きい adj-diacenaphthoporphyrin 間最大の協会定数と opp-diacenaphthoporphyrin (ODP) 小さい会合定数 1.8 x 10 (4) と 1.5 x 10 (4) m(-1) でそれぞれならなかった。リポソームの哲と DSPG の追加会合定数の大きさにほとんど影響していません。偏波研究、acenaphthoporphyrins 遠く脂質二重膜に極性非極性相互作用を最小限に抑えるに駆動していることを示しています。共焦点顕微鏡 DMPC リポソームがリーシュ マニア tarentolae の promastigotes に、ポルフィリンを輸送を確認します。DMPC:Chol:DSPG リポソームと関連付けられている化合物は、axenic および細胞内の amastigotes の病原性リーシュ マニア panamensis に対して、in vitro で効果的です。化合物の有効性は、文化の露光を可視光線に強化されています。
リーシュ マニア Tarentolae: in Vitro モデル リューシュ エージェントのスクリーニングとしてユーティリティ。
プライマリ画面リューシュ化合物リーシュ マニア種採用またはどこでも保証できないバイオセイフティ条件下で処理する必要があります人間に病原性を使います。リーシュ マニア tarentolae、gecko Tarentolae 環状紅色から分離された寄生虫人間に病原性考慮されていません。L. Promastigotes tarentolae 以前用いられてきた真核生物の表現システムとしての組換えタンパク質生産リューシュ薬への耐性に関与する遺伝子の増幅。このリーシュ マニア種リューシュ薬のスクリーニングでの使用を検証するには、L. tarentolae の axenic と細胞内 amastigotes の感度リーシュ マニア種によって人間のリーシュ マニア症の使役示した感度を比較しました。いくつかの哺乳類の細胞に感染する能力を確認しながら L. tarentolae axenic amastigotes として成長する能力がまず述べる。L. tarentolae amastigotes 化合物リューシュ活動のための in vitro スクリーニングのための適切なモデルを提供します。
免疫不全患者におけるリーシュ マニア （リーシュ マニア) メキシカーナによる輸血内臓にリーシュ マニアを症: 症例報告。
輸血リーシュ マニア症内臓と皮膚 leishmaniases の風土病地域で増加する問題です。
ジメチルとジエチル Carbaporphyrin ケタール リーシュ マニア症皮膚の治療でのユーティリティの in Vitro および in Vivo の研究。
Carbaporphyrin ケタール ketal-置換インデン リングによって典型的なポルフィリン環状のピロール環に置換したポルフィリン化合物であります。それは最近これらの化合物が in vitro リーシュ マニア tarentolae に対して効果的であることを実証されました。彼らは可視光にさらされているときその in vitro 効果が増加します。彼らは光増感剤として活性酸素種 (ROS) の生産を仲介することのできる行動します。次のこの証拠、有効性およびジメチルとジエチル carbaporphyrin ケタールの細胞毒性に （CKOMe と CKOEt、それぞれ) 病原性リーシュ マニア種と露光を可視光線 (2 と 4 h) を使用して生体外で決定しました。様々 な病原性リーシュ マニア種に対する有効性は、マイクロモルの範囲内であるに決定されました。さらに、carbaporphyrin ケタール リポソーム製剤のカプセル化の効果がテストされました。可視光 （光線力学的効果） への露出に有効性が強化されましたがリポソーム配信その毒性を減少しました。ひと U937 細胞とハムスターの腹腔マクロファージの細胞毒性レベル 9 に 0.3 μ M と 7 に 330 μ M の範囲であった。In vivo でテストしたとき、リーシュ マニア症皮膚のハムスター （Mesocricetus 移行) モデルを用いた CKOMe 化合物は、一度動物の組織では、代謝、感光性と思われるない有効成分を生成することを示唆して、暗闇でも活躍しました。寄生負荷なし顕著な毒性作用を減少したので削減病巣の大きさ, 病理組織学的解析とスメアは化合物の生体内での有効性を確認しました。
新しいアプリケーションを展開されたポルフィリン: Sapphyrin と Heterosapphyrins リーシュ マニア原虫の阻害剤として。
リーシュ マニア症の治療の潜在的なエージェントとして Sapphyrins と関連ポルフィリノイド大環状化合物のシリーズを行った。化合物の効果を in vitro リーシュ マニア tarentolae または L. panamensis amastigotes と promastigotes との孵化に評価しました。その有効性は細胞内 l. panamensis に対しても検討した.化合物の細胞毒性は U937 人間 promonocyte 細胞株を用いた in vitro 評価しました。有効性と毒性の存在そして不在の化合物の光線力学的活動を評価するために可視光で評価しました。Sapphyrin と 2 つの関連 heterosapphyrins 特にリーシュ マニア原虫の阻害剤として有効であることが示されました。光線力学的効果は活性酸素種の形成に起因する可能性がありますみられました。（（生産 1)O(2)) された決定エタノール溶液で (1)O(2) 燐光。 の直接測定による一重項酸素の利回り共焦点レーザー顕微鏡は、sapphyrin と関連する大環状化合物によるリーシュ マニア細胞がとられ、彼らの存在がミトコンドリア活性酸素の形成を誘導することを示した。Sapphyrins 抗がん剤として広く検討したし、我々 はここでリーシュ マニア原虫に対する活性を示します。
リーシュ マニア属リューシュ薬の in Vitro および in Vivo でのスクリーニングにおける緑色蛍光蛋白質レポーター方式の改善。
リーシュ マニア症の治療に対する新しい治療法の開発では、新しい高スループット スクリーニング リューシュ活性化合物、in vitro および in vivo のための方法論が必要です。ライブ イメージング、高感性、特異性、柔軟性を提供していますのでレポーターの遺伝子は GFP としていくつかのモデルでの薬物のスクリーニングのため最も約束と広く使われているツールの 1 つになっている;さらに、GFP レポーターの遺伝子のスクリーニング アッセイとして使用する従来の試金を提示すべての欠点を排除し、また他のレポーターの遺伝子を使用してこれらの技術的な問題を発見します。レポーター遺伝子スクリーニング アッセイ リーシュ マニア原虫の薬物でとして、GFP のユーティリティ同質性に依存し、系統、GFP の安定性を導入します。統合ベクトルを用いた旧世界リーシュ マニア種における GFP の安定発現を実証されている;ただし、レポートまだこの方法論の成功の新世界種について存在しません。シーケンス相同組換えによるコーディング GFP 18 s RNA には染色体の 1 つのコピーを置き換えます、統合ベクターから GFP タンパクを発現する新世界リーシュ マニアの世代を報告します。我々 も統合の GFP 発現文化選択的圧力なしまたはハムスター感染アッセイでの使用中に数ヶ月後安定して均一 transfected 寄生虫であることを証明します。蛍光の系統に起因する遺伝子操作両方 in vitro および in vivo での感染実験中に見てどこの in vitro, in vivo および in vivo 薬物スクリーニング アッセイ以来ない病原性または感染性にばらつき ex 役立ちます。薬物検査の安定した蛍光リーシュ マニア菌株の使用に基づいての試金のため、ここで説明プラットフォーム フローサイトメトリーを結合し、蛍光顕微鏡より敏感より特定で従来の試金の化合物の評価に対する潜在的なリューシュ アクティビティと共に使用して通常よりも高速です。
生体外でそして生体内エーテル脂質 Edelfosine リーシュ マニア属のものに対して、中央銀行耐性寄生虫の有用性。
Leishmaniases は以上 20 のリーシュ マニア原虫種による病気熱帯無視の複雑などの利用可能な治療のアーセナルの不足、不十分な状態です。五価 antimonials （中央銀行） は現在世界中、リーシュ マニア症に対する最初の行の薬物療法しますが、これらの化合物への抵抗がますます報告されます。アルキル lysophospoholipid 類縁体 (アルプス) 化合物の家族リューシュ アクティビティを構成し、そのメンバー、miltefosine、内臓や皮膚リーシュ マニア症に対する最初の経口治療薬として承認されています。ただし、その臨床使用は、in vitro 薬剤耐性を開発するうつ伏せで l. braziliensis、l. メキシカーナなど、いくつかのリーシュ マニア種を感染患者における以下の印象的な効率により挑戦できます。
