Un Papel Esencial Para DNA Metiltransferasa DNMT3B En La Supervivencia De La Célula De Cáncer

The Journal of Biological Chemistry. Aug, 2002  |  Pubmed ID: 12015329

Metilación anormal y asociados silenciamiento de genes supresores de tumores es una característica común de muchos tipos de cáncer. La observación de la metilación persistente en células cancerosas humanas que carecen de la metiltransferasa de mantenimiento DNMT1 sugiere la implicación de otros metiltransferasas del ADN en el silenciamiento del gen de cáncer. Para probar esta hipótesis, hemos evaluado la metilación y expresión génica en células de cáncer específicamente agotado de DNMT3A o DNMT3B, de novo metiltransferasas que se expresan en los tejidos adultos. Aquí hemos demostrado que el agotamiento de DNMT3B, pero no DNMT3A, inducida apoptosis de células cancerosas humanas pero las células no normales. DNMT3B agotamiento reactivado la expresión génica de metilación-silenciado pero no indujo global o desmetilación de satélite juxtacentromeric como hizo agotamiento específico de DNMT1. Además, el efecto del agotamiento DNMT3B fue rescatado por expresión exógena de cualquiera de las variantes de empalme DNMT3B2 o DNMT3B3 pero no DNMT1. Estos resultados indican que DNMT3B tiene una selectividad del sitio significativo que es distinto de DNMT1, regula el silenciamiento del gen aberrante y es esencial para la supervivencia de la célula de cáncer.

DNMT1 Es Necesaria Para Mantener La Metilación CpG Y Silenciamiento En Células Cancerosas Humanas Del Gen Aberrante

Nature Genetics. Jan, 2003  |  Pubmed ID: 12496760

Transcripcional de silenciamiento por metilación de Isla CpG es un mecanismo frecuente de supresión de gen supresor tumoral en cáncer. Experimentos genéticos han definido la importancia de la metiltransferasa de ADN Dnmt1 para el mantenimiento de la metilación en las células de ratón y su papel en la neoplasia. En células de cáncer de vejiga humana, depleción selectiva de DNMT1 con inhibidores antisentidos se ha demostrado para inducir la desmetilación y reactivación del gen supresor tumoral silenciado CDKN2A. Por el contrario, concentrado en interrupción de DNMT1 alelos en células humanas de cáncer de colon producción clones que retuvo la metilación de Isla CpG y asociados gen supresor tumoral silenciamiento, mientras que los clones de HCT116 con la inactivación de ambas DNMT1 y DNMT3B mostró niveles muy inferiores de metilación del ADN, lo que sugiere que las dos enzimas son altamente cooperativas de HCT116. Utilizamos una combinación de genética (antisentido y siRNA) y farmacológicos (5-aza-2'-desoxicitidina) inhibidores de transferasas de metilo de ADN para estudiar la contribución de los isotipos DNMT a metilación de la célula cancerosa. Depleción selectiva de DNMT1 usando antisentido o siRNA dio lugar a la menor actividad metiltransferasa de mantenimiento celular, desmetilación global y gene-específico y reexpresión de genes supresores en células cancerosas humanas. Agotamiento específico de DNMT1 pero no DNMT3A o DNMT3B potenciada notablemente la capacidad de aza-5-2'-desoxicitidina para reactivar los genes supresores silenciado, indicando que la inhibición de la función de DNMT1 es el principal medio por el cual 5-aza-2'-desoxicitidina reactiva genes. Estos resultados indican que DNMT1 es necesaria y suficiente para mantener la metilación global y aberrante metilación de Isla CpG en células cancerosas humanas.

Reclutamiento MEF2 Dependiente Del Factor De Transcripción HAND1 Resulta En Activación Sinérgica De Promotores De Destino

The Journal of Biological Chemistry. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16043483

Proteínas de mano son miembros de la familia del factor de transcripción de hélice-bucle-hélice básica tejido restringidos que desempeñan un papel fundamental en la diferenciación celular y organogénesis incluyendo desarrollo placentario, cardiovascular y craneofacial. Sin embargo, las bases moleculares que subyacen a la acción del desarrollo de las proteínas de la mano sigue siendo indefinida. Dentro del embrión, HAND1 se detectó primero en el corazón en desarrollo donde llega a ser restringida a los compartimentos ventriculares izquierdos y atriales, un patrón idéntico del Nppa gene, que codifica el factor atrial natriurético, el mayor producto secretor del corazón. Divulgamos por este medio que cardiaca atrial natriurético factor promotor interviene directamente por HAND1, lo que es el primer objetivo transcripcional de HAND1 conocido. La acción de HAND1 no requiere heterodimerization con clase I factores básicos de hélice-bucle-hélice o atascamiento de la DNA a través de elementos de la caja. En su lugar, HAND1 es reclutado al promotor mediante interacción física con proteínas MEF2. Resultados de la interacción MEF2/HAND1 en activación sinérgica de promotores MEF2 dependiente y MEF2 sitios de Unión son suficientes para mediar esta sinergia. MEF2 Unión a ADN no es mayor en presencia de HAND1. En cambio, cooperatividad probable resultado de corecruitment de coactivadores como proteína CREB. La proteína relacionada HAND2 también puede sinergizar con MEF2. Así, mano proteínas actúan como coactivadores desarrollo celular específico de la familia MEF2 de factores de transcripción. Estos resultados un novedoso mecanismo de acción de la mano en el corazón de identificar y proporcionan un paradigma general para comprender el mecanismo de acción de la mano en la organogénesis.

Boc Es Un Receptor Para Sonic Hedgehog En La Dirección De Axones Commissural

Nature. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 17086203

En la médula espinal, sonic hedgehog (Shh) es secretada por la placa de piso para controlar la generación de distintas clases de neuronas ventrales en el eje dorsoventral. Estudios genéticos e in vitro han demostrado que Shh también más adelante actúa como un derivado del midline quimioatrayentes para commissural axones. Sin embargo, el receptor(s) responsable de Shh atracción sigue siendo desconocido. Aquí mostramos que dos proteínas relacionadas con el Robo, Boc y Cdon, se unen específicamente a Shh y por lo tanto son receptores de candidato para la acción de Shh como un ligando de orientación del axón. Boc se expresa por las neuronas commissural e interrupciones específicas de Boc en ratón da lugar a la desviación de axones commissural hacia la placa. Caída mediada por RNA-interferencia de Boc deteriora la capacidad de axones commissural rata de virar hacia una fuente ectópica de Shh in vitro. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que Boc es esencial como un receptor para Shh en dirección commissural axon.

[Sonic Hedgehog Y Boc: Una Historia Muy Atractiva Sobre Axones]

Médecine Sciences : M/S. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18272068

DSCAM Guias Axones Embrionarios Por Netrin-dependiente Y - Funciones Independientes

Development (Cambridge, England). Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18948420

En desarrollo de axones son atraídos a la línea media del CNS por proteínas de Netrin y otras señales aún no identificados. Netrin señales son transduced en parte por Frazzled (Fra) / receptores DCC. Análisis genético en Drosophila indica que receptores no identificados adicionales son necesarios para mediar la respuesta atractiva a Netrin. Análisis del nervio de Bolwig revelan que Netrin mutantes tienen un fenotipo similar a mutantes de síndrome de Down Cell Adhesion Molecule (Dscam). Netrin y Dscam mutantes pantalla dosis sensibles interacciones, sugiriendo que el Dscam podría actuar como un receptor de Netrin. Mostramos utilizando estudios de superposición de células que Netrin se une a volar y vertebrado Dscam y que Dscam une a Netrin con la misma afinidad como DCC. En la línea media del CNS, encontramos que DSCAM y su paralog Dscam3 actúan redundante para promover el cruce de la línea media. Nocaut genético simultánea de los dos genes Dscam y el receptor Netrin fra produce un defecto de cruce de línea media que es más fuerte que la eliminación de las proteínas Netrin, sugiriendo que las proteínas Dscam también funcionan en un camino paralelo al Netrins. Además, la sobreexpresión de Dscam en axones que normalmente no atraviesan la línea media es capaz de inducir midline ectópico cruzando, consistente con una función de receptor atractivo. Nuestros resultados apoyan el modelo que Dscam proteínas funcionan como receptores de atractivos para Netrin y también actúan paralelamente a Frazzled/DCC. Además, los resultados sugieren que las proteínas Dscam tienen la capacidad de responder a varios ligandos y actúan como receptores para una localización atractiva línea media no identificados. Estas funciones en la dirección del axón tienen implicaciones para la patogenesia de síndrome de Down.

Sonic Hedgehog Guías Axones a Través De Una Vía De Señalización Noncanonical, Src-familia-cinasa Dependiente

Neuron. May, 2009  |  Pubmed ID: 19447091

Sonic hedgehog (Shh) juega un papel esencial en desarrollo eventos como guía de especificación y axón de destino celular. SHH induce especificación de destino de la célula a través de Shh canónica de señalización, mediada por transcripción. Sin embargo, se desconoce el mecanismo por el cual Shh Guía de axones. Para estudiar esto, hemos desarrollado un ensayo in vitro para la orientación del axón, en el cual las neuronas pueden ser reflejadas al responder a un gradiente definido de una señal química. Disociaron de axones de las neuronas commissural en un gradiente de Shh que se volvió rápidamente hacia el aumento de las concentraciones de Shh. en concordancia con esta respuesta rápida, demostramos que atracción por Shh no requiere transcripción. En cambio, Shh estimula la actividad de los miembros de familia quinasa (SFK) de fuente en una forma dependiente de alisado. Por otra parte, SFK actividad es mediada por Shh Guía de axones commissural, pero no para la inducción de la actividad transcripcional de reportero de Gli. Juntos, estos resultados indican que Shh actúa a través de una vía de señalización noncanonical, actuando rápidamente para guía de axones.

Las Mutaciones En El DCC Causar Movimientos Congénitos Del Espejo

Science (New York, N.Y.). Apr, 2010  |  Pubmed ID: 20431009

Los movimientos de espejo son movimientos involuntarios contralaterales que reflejan los voluntarios ya menudo se asocian con defectos en la línea media de cruce del desarrollo del sistema nervioso central. Se estudiaron dos familias grandes, un franco-canadiense e iraní, en la que los movimientos aislados espejo congénitas se hereda como un rasgo autosómico dominante uno. Se encontró que las personas afectadas lleva a truncar la proteína de mutaciones en el DCC (eliminado en carcinoma colorrectal), un gen en el cromosoma 18q21.2, que codifica un receptor para netrina-1, una proteína difusible que ayuda a guiar el crecimiento axonal a través de la línea media. El análisis funcional de la proteína DCC mutante de la familia canadiense francés reveló un defecto en netrina-1 unión. Así, DCC tiene un papel importante en la lateralización del sistema nervioso humano.

Boc Y Gas1 Cada Uno Forman Complejos De Receptores De Shh Distintas Con Ptch1 Y Son Necesarios Para La Proliferación Celular Mediada Por Shh

Developmental Cell. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21664577

Proteínas Hedgehog (Hh) regulan importantes procesos de desarrollo, incluyendo la diferenciación y proliferación celular. Aunque Patched actúa como el principal receptor de Hh en Drosophila, señalización Hh requiere absolutamente los adicionales Hh proteinas Ihog y Boi. Aquí demostramos que, inesperadamente, progenitores de la neurona del gránulo cerebeloso (CGNPs) que carecen de Boc y Cdon, los vertebrados ortólogos de Ihog y Boi, aún proliferan en respuesta a Hh. Esto es porque en su ausencia, Gas1, una proteína de unión a Hh no está presente en Drosophila, media Hh señalización. Constantemente, sólo CGNPs falta todas las tres moléculas-Boc, Cdon y Gas1-tiene una pérdida completa de la proliferación de Hh-dependiente. De manera complementaria, nos encontramos con que un ligando de Hh mutado que une a Patched1 pero no Boc, Cdon o Gas1 no puede activar Hh señalización. Juntos, esto demuestra un requisito absoluto para Boc y Cdon Gas1 en señalización Hh y revela un requisito distinto para componentes ligando que distingue a los sistemas de receptor de Hh de vertebrados e invertebrados.