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A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

University of Washington

&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708; NL7 &#x6709;&#x4EBA;&#x5BF9;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; flavocytochrome b(558)&#xFF0C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A;&#x9632;&#x5FA1;&#x548C;&#x708E;&#x75C7;&#x3002;NL7 &#x627F;&#x8BA4; gp91(phox) flavocytochrome b(558) &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x900F;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; NL7 &#x7ED1;&#x5B9A; &#xFF08;gp91(phox) &#x7684; 498)EKDVITGLK(506) &#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x5728;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#xFF0C;NL7 &#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5916;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x548C;&#x4E86;&#x8FB9;&#x9645;&#x5F71;&#x54CD;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x886C;&#x5E95;&#x7C73;&#x51EF;&#x5229;&#x65AF;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;K(m))&#x3002;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708; NL7 &#x6CA1;&#x6709;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684; p47(phox)&#x3001; p67(phox) &#x6216; Rac &#x548C;&#x4E0A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x6E38;&#x79BB;&#x56E0;&#x5B50;&#x6613;&#x4F4D; gp91(phox) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5176;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x540E;&#x590D;&#x6742;&#x7684; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;, &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708; NL7 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x7684;&#x8D85;&#x6C27;&#x4EE3;&#x3002;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x7389;&#x7C73;&#x785D;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6A21;&#x677F;&#x4E0A; gp91(phox) &#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x8868;&#x660E;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684; NADPH &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684; p47(phox) &#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x5206;&#x79BB;&#x5230; NL7 &#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x8FD9;&#x6837;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; &#xFF08;498)EKDVITGLK(506) &#x90E8;&#x5206;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728; gp91(phox) &#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x533A;&#x57DF;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x886C;&#x5E95;&#x6216;&#x6E38;&#x79BB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

&#x5173;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE; flavocytochrome b558 &#x529F;&#x80FD;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x3002;

mAb NL7 was raised against purified flavocytochrome b(558), important in host defense and inflammation. NL7 recognized the gp91(phox) flavocytochrome b(558) subunit by immunoblot and bound to permeabilized neutrophils and neutrophil membranes. Epitope mapping by phage display analysis indicated that NL7 binds the (498)EKDVITGLK(506) region of gp91(phox). In a cell-free assay, NL7 inhibited in vitro activation of the NADPH oxidase in a concentration-dependent manner, and had marginal effects on the oxidase substrate Michaelis constant (K(m)). mAb NL7 did not inhibit translocation of p47(phox), p67(phox), or Rac to the plasma membrane, and bound its epitope on gp91(phox) independently of cytosolic factor translocation. However, after assembly of the NADPH oxidase complex, mAb NL7 bound the epitope but did not inhibit the generation of superoxide. Three-dimensional modeling of the C-terminal domain of gp91(phox) on a corn nitrate reductase template suggests close proximity of the NL7 epitope to the proposed NADPH binding site, but significant separation from the proposed p47(phox) binding sites. We conclude that the (498)EKDVITGLK(506) segment resides on the cytosolic surface of gp91(phox) and represents a region important for oxidase function, but not substrate or cytosolic component binding.

Functional epitope on human neutrophil flavocytochrome b558.

mAb Tn7 a &eacute;t&eacute; soulev&eacute;e contre b(558) flavocytochrome purifi&eacute;, important dans l&#39;inflammation et de la d&eacute;fense de l&#39;h&ocirc;te. Tn7 reconnu la sous-unit&eacute; b(558) de gp91(phox) flavocytochrome par immunoblot et neutrophiles perm&eacute;abilis&eacute;es et membranes neutrophiles. La cartographie des &eacute;pitopes par analyse de phage display a indiqu&eacute; que Tn7 lie (la r&eacute;gion 498)EKDVITGLK(506) de gp91(phox). Dans un essai acellulaire, Tn7 inhibe in vitro d&#39;activation de la NADPH oxydase de mani&egrave;re dose-d&eacute;pendante et avait des effets marginaux sur la constante de Michaelis de substrat oxydase (K(m)). mAb Tn7 ne fait pas inhiber la translocation de p47(phox), de p67(phox) ou de Rac &agrave; la membrane plasmique et li&eacute; son &eacute;pitope sur gp91(phox) ind&eacute;pendamment de translocation du facteur cytosolique. Toutefois, apr&egrave;s le montage de la NADPH oxydase complexe, mAb Tn7 li&eacute; l&#39;&eacute;pitope mais n&#39;a pas inhib&eacute; la production de superoxyde. En trois dimensions de mod&eacute;lisation du domaine C-terminal de gp91(phox) un mod&egrave;le de r&eacute;ductase de nitrate de ma&iuml;s sugg&egrave;re tout pr&egrave;s de l&#39;&eacute;pitope Tn7 pour le site de liaison de NADPH propos&eacute;, mais la s&eacute;paration significative depuis les sites de liaison p47(phox) propos&eacute;e. Nous concluons que le (498)EKDVITGLK(506) segment se trouve sur la surface cytosolique de gp91(phox) et repr&eacute;sente une r&eacute;gion importante pour la fonction oxydase, mais pas de substrat ou de liaison de composant cytosolique.

&Eacute;pitope fonctionnel sur b558 flavocytochrome neutrophiles humains.

Funktionelle Epitop auf humanen neutrophilen Flavocytochrom B558.

mAb NL7 &egrave; stata sollevata contro b(558) flavocytochrome purificata, importanti per l&#39;infiammazione e la difesa ospite. NL7 riconosciuto la subunit&agrave; gp91(phox) flavocytochrome b(558) da immunoblot e associati a membrane dei neutrofili e permeabilized neutrofili. Epitope mapping da analisi di phage display indicato che NL7 associa (regione 498)EKDVITGLK(506) di gp91(phox). In un saggio senza cellula, NL7 inibito in vitro attivazione della NADPH ossidasi in modo concentrazione-dipendente e aveva effetti marginali sulla costante di Michaelis substrato ossidasi (K(m)). mAb NL7 non inibire la traslocazione di p47(phox), p67(phox) o Rac per la membrana plasmatica e associato suo epitopo su gp91(phox) indipendentemente dalla traslocazione Fattore citosolico. Tuttavia, dopo il montaggio del complesso NADPH ossidasi, mAb NL7 associato l&#39;epitopo ma non inibiscono la generazione del superossido. Tridimensionale modellazione del dominio C-terminale del gp91(phox) su un modello di mais nitrato reduttasi nelle immediate vicinanze dell&#39;epitopo NL7 suggerisce il sito dell&#39;associazione NADPH proposto, ma significativa separazione dai siti di legame p47(phox) proposto. Concludiamo che il (498)EKDVITGLK(506) segmento risiede sulla superficie citosolica della gp91(phox) e rappresenta una regione importante per la funzione ossidasi, ma non il substrato o associazione componente citosolico.

Epitopo funzionale su b558 flavocytochrome neutrofili umani.

mAb NL7 &#x7CBE;&#x88FD;&#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30C1;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; b(558)&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9632;&#x885B;&#x3084;&#x708E;&#x75C7;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NL7 gp91(phox) &#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30C1;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; b(558) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x8868;&#x793A;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0; NL7 &#xFF08;gp91(phox) &#x306E; 498)EKDVITGLK(506) &#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3002; &#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3001;NL7 NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E; in vitro &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x30DF;&#x30AB;&#x30A8;&#x30EA;&#x30B9;&#x5B9A;&#x6570; (K(m))&#x3002; &#x9650;&#x754C;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;mAb NL7 p47(phox)&#x3001;p67(phox)&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Rac &#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7; gp91(phox) &#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; NADPH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F8C; mAb NL7 &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E; gp91(phox) &#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x785D;&#x9178;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; NL7 &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x63D0;&#x6848; p47(phox) &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x306E; NADPH &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3001;&#xFF08;498)EKDVITGLK(506) &#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; gp91(phox) &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x95A2;&#x6570;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x57FA;&#x677F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x3072;&#x3068;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30C1;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; b558 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3002;

mAb nl7&#xC774; &#xC815;&#xD654; flavocytochrome b(558), &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NL7 gp91(phox) flavocytochrome b(558) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; immunoblot&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; permeabilized &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD638; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Epitope &#xB9E4;&#xD551; &#xD45C;&#xC2DC; NL7 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; (gp91(phox)&#xC758; 498)EKDVITGLK(506) &#xC601;&#xC5ED;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; NL7 &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xC9C8; Michaelis &#xC0C1;&#xC218; (k(m))&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD55C;&#xACC4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD588;&#xB2E4;. mAb NL7 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;, p47(phox), p67(phox), &#xB610;&#xB294; Rac&#xC758; &#xC804; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC54A;&#xC558;&#xACE0;&#xC758; &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504; cytosolic &#xC694;&#xC18C; &#xC804; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; gp91(phox)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD; &#xD6C4; mAb nl7&#xB294; epitope &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; superoxide&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC625;&#xC218;&#xC218; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0;&#xB294; gp91(phox)&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xB294; NL7 epitope&#xC758; &#xADFC;&#xC811; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; p47(phox) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC81C;&#xC548;&#xB41C; NADPH &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xB860;&#xC740; (498)EKDVITGLK(506) &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; gp91(phox)&#xC758; cytosolic &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xACE0; &#xAE30;&#xD310; &#xB098; cytosolic &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD638; flavocytochrome b558&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

mAb NL7 fue levantado contra b(558) flavocytochrome purificada, importante en la inflamaci&oacute;n y la defensa del hu&eacute;sped. NL7 reconoce la subunidad de b(558) de flavocytochrome de gp91(phox) por el immunoblot y obligados a permeabilized neutr&oacute;filos y membranas de neutr&oacute;filos. Mapeo epitopo por an&aacute;lisis de phage display indica que NL7 se une la (regi&oacute;n 498)EKDVITGLK(506) de gp91(phox). En un ensayo acelulares, NL7 inhibe la activaci&oacute;n in vitro de la NADPH oxidasa de manera dependiente de la concentraci&oacute;n y ten&iacute;a efectos marginales en la constante de Michaelis de sustrato de oxidasa (K(m)). mAb NL7 no inhiben la translocaci&oacute;n de Rac, p67(phox) o p47(phox) a la membrana plasm&aacute;tica y consolidado su epitope a gp91(phox) independientemente de la translocaci&oacute;n del factor citos&oacute;lico. Sin embargo, despu&eacute;s del montaje de la NADPH oxidasa complejo, mAb NL7 hab&iacute;a obligado el epitopo pero no inhiben la generaci&oacute;n de super&oacute;xido. Tridimensional de modelado del dominio c-terminal de gp91(phox) en una plantilla de ma&iacute;z nitrato reductasa sugiere cerca del epitopo de NL7 para el sitio de uni&oacute;n de NADPH propuesto, pero separaci&oacute;n importante de los sitios de uni&oacute;n de propuestas p47(phox). Concluimos que el (segmento 498)EKDVITGLK(506) reside en la superficie citos&oacute;lica de gp91(phox) y representa una importante funci&oacute;n de oxidasa, pero no sustrato o componente citos&oacute;lico de la regi&oacute;n.

Ep&iacute;topo funcional en b558 de flavocytochrome de neutr&oacute;filos humanos.

RNA &#x65B9;&#x5F0F;&#x6B63;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51B7;&#x6C14;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x524D; mRNA &#x526A;&#x63A5;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x6709;&#x529B;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4F53;&#x5185;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8D70;&#x5411;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x810A;&#x9AD3;&#x6027;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x75C7; (SMA) &#x662F;&#x7531; SMN1 &#x635F;&#x5931;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;&#x53EB;&#x505A; SMN2 &#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x526F;&#x672C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x751F;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x4E8E;&#x526A;&#x63A5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x66FE;&#x62A5;&#x9053;&#x51CC;&#x5389; SMN2 &#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x53CD;&#x5F0F;&#x526A;&#x63A5; RNA (tsRNA)&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x51CF;&#x5C11;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7EDE;&#x63A5;&#x5904;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7ADE;&#x4E89;&#x589E;&#x5F3A;&#x53CD;&#x5F0F;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x5355;&#x77E2;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8868;&#x793A; SMN tsRNA &#x548C;&#x62FC;&#x63A5;&#x7AD9;&#x70B9;&#x963B;&#x585E;&#x4E49; (&#x9EBB;&#x751F;-tsRNA&#xFF09;&#x3002;&#x9EBB;&#x751F;&#x592A;&#x90CE; tsRNA &#x77E2;&#x91CF;&#x5927;&#x5927; SMN &#x6C34;&#x5E73;&#x521D;&#x7EA7;&#x7684; SMA &#x75C5;&#x4EBA;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;SMA &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5185;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0; SMN &#x4F9D;&#x8D56;&#x4F53;&#x5916; snRNP &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x9EBB;&#x751F;&#x592A;&#x90CE; tsRNA &#x6218;&#x7565;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x7684;&#x53CD;&#x5F0F;&#x526A;&#x63A5;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x53CD;&#x5F0F;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; SMN2 &#x8A8A;&#x672C;&#x53CD;&#x5F0F;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x5355;&#x77E2;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

RNA modalities are developing as a powerful means to re-direct pathogenic pre-mRNA splicing events. Improving the efficiency of these molecules in vivo is critical as they move towards clinical applications. Spinal muscular atrophy (SMA) is caused by loss of SMN1. A nearly identical copy gene called SMN2 produces low levels of functional protein due to alternative splicing. We previously reported a trans-splicing RNA (tsRNA) that re-directed SMN2 splicing. Now we show that reducing the competition between endogenous splices sites enhanced the efficiency of trans-splicing. A single vector system was developed that expressed the SMN tsRNA and a splice-site blocking antisense (ASO-tsRNA). The ASO-tsRNA vector significantly elevated SMN levels in primary SMA patient fibroblasts, within the central nervous system of SMA mice and increased SMN-dependent in vitro snRNP assembly. These results demonstrate that the ASO-tsRNA strategy provides insight into the trans-splicing mechanism and a means of significantly enhancing trans-splicing activity in vivo.

Development of a single vector system that enhances trans-splicing of SMN2 transcripts.

Modalit&#xE9;s d&#x26;#39;ARN sont en d&#xE9;veloppement comme un moyen puissant pour r&#xE9;orienter les &#xE9;v&#xE9;nements pathog&#xE8;nes d&#x26;#39;&#xE9;pissage de pr&#xE9;-ARNm. Am&#xE9;liorer l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de ces mol&#xE9;cules in vivo est essentiel &#xE0; mesure qu&#x26;#39;ils progressent vers les applications cliniques. L&#x26;#39;amyotrophie spinale (SMA) est caus&#xE9;e par la perte de SMN1. Une copie du g&#xE8;ne presque identique appel&#xE9; SMN2 produit de faibles niveaux de prot&#xE9;ine fonctionnelle en raison de l&#x26;#39;&#xE9;pissage alternatif. Nous avons rapport&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment un &#xE9;pissage trans-ARN (tsRNA) qui re-dirig&#xE9; SMN2 &#xE9;pissage. Nous allons maintenant montrer que la r&#xE9;duction de la concurrence entre les sites d&#x26;#39;&#xE9;pissures endog&#xE8;nes am&#xE9;lior&#xE9; l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de trans-&#xE9;pissage. Un syst&#xE8;me de vecteur unique a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;labor&#xE9; qui a exprim&#xE9; le tsRNA SMN et une &#xE9;pissure place blocage antisens (ASO-tsRNA). Le vecteur ASO-tsRNA niveaux significativement plus &#xE9;lev&#xE9;s dans les SMN des fibroblastes primaires de patients SMA, au sein du syst&#xE8;me nerveux central de souris SMA et a augment&#xE9; SMN-d&#xE9;pendants in vitro snRNP assemblage. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que la strat&#xE9;gie ASO-tsRNA donne un aper&#xE7;u du m&#xE9;canisme de trans-&#xE9;pissage et un moyen de renforcer de mani&#xE8;re significative l&#x26;#39;activit&#xE9; trans-&#xE9;pissage in vivo.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un syst&#xE8;me unique qui am&#xE9;liore Vecteur Trans-&#xE9;pissage de SMN2 Transcriptions

RNA-Modalit&auml;ten entwickeln als ein leistungsstarkes Mittel zur pathogenen Pre-mRNA-Splei&szlig;en-Veranstaltungen zu leiten. Verbesserung der Effizienz dieser Molek&uuml;le in-vivo ist entscheidend, wie sie Schritt f&uuml;r klinische Anwendungen Schritt. Spinale Muskelatrophie (SMA) wird durch den Verlust des SMN1 verursacht. Eine fast identische Kopie gen SMN2 genannt produziert geringe funktionelle Protein durch alternatives Splei&szlig;en. Zuvor berichteten wir ein Trans-Splei&szlig;en RNA (TsRNA), das Splei&szlig;en SMN2 umgeleitet. Jetzt wir, dass die Verringerung zeigen erweitert der Wettbewerb zwischen endogenen Spleisse Standorten die Effizienz der Trans-Splei&szlig;en. Einem einzigen Vektor-System wurde entwickelt, die das SMN-TsRNA und &quot;Antisense ein Splei&szlig;-Website blockieren&quot; (ASO-TsRNA) ausgedr&uuml;ckt. Der ASO-TsRNA-Vektor deutlich erh&ouml;hte SMN Niveaus in prim&auml;re SMA Patienten Fibroblasten, innerhalb des zentralen Nervensystems von SMA-M&auml;usen und erh&ouml;ht SMN-abh&auml;ngigen in Vitro-SnRNP-Assembly. Diese Ergebnisse zeigen, dass die ASO-TsRNA-Strategie bietet Einblick in die Trans-splicing-Mechanismus und ein Mittel Trans-Splei&szlig;en Aktivit&auml;t in-vivo deutlich zu verbessern.

Entwicklung eines einzigen Vektor-Systems, das Trans-Splei&szlig;en der SMN2-Transkripte erh&ouml;ht.

Modalit&agrave; di RNA sono in via di sviluppo come un potente mezzo per re-indirizzare gli eventi di splicing pre-mRNA patogeni. Migliorare l&#39;efficienza di queste molecole in vivo &egrave; fondamentale come si muovono verso le applicazioni cliniche. Atrofia muscolare spinale (SMA) &egrave; causata dalla perdita di SMN1. Un gene copia quasi identica denominato SMN2 produce bassi livelli di proteina funzionale a causa di splicing alternativo. Abbiamo segnalato in precedenza un RNA trans-splicing (tsRNA) che re-indirizzato SMN2 splicing. Ora mostriamo che riducendo la concorrenza tra i siti di impiombature endogeno migliorato l&#39;efficienza del trans-splicing. Un sistema unico vettore &egrave; stato sviluppato che ha espresso il tsRNA SMN e un antisenso blocco splice-sito (ASO-tsRNA). Il vettore di ASO-tsRNA significativamente elevati livelli di SMN in primari fibroblasti di pazienti SMA, all&#39;interno del sistema nervoso centrale dei topi SMA e aumentato SMN-dipendente in vitro snRNP assieme. Questi risultati dimostrano che la strategia di ASO-tsRNA fornisce la comprensione del meccanismo trans-splicing e un mezzo per migliorare significativamente la trans-splicing attivit&agrave; in vivo.

Sviluppo di un sistema singolo vettore che migliora la trans-splicing delle trascrizioni SMN2.

RNA&#x306E;&#x30E2;&#x30C0;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x76F4;&#x63A5;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;pre-mRNA&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x810A;&#x9AC4;&#x6027;&#x7B4B;&#x840E;&#x7E2E;&#x75C7;&#xFF08;SMA&#xFF09;&#x306F;SMN1&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SMN2&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x307B;&#x307C;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;RNA&#xFF08;tsRNA&#xFF09;&#x304C;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;SMN2&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x9593;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7CFB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF08;ASO-tsRNA&#xFF09;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;SMN tsRNA&#x3068;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ASO-tsRNA&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;SMA&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x5185;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;SMA&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;SMN&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x3001;in vitro snRNP&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;SMN&#x4F9D;&#x5B58;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;ASO-tsRNA&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SMN2&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

RNA modalities &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xC811;&#xD569; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB54C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADFC;&#xC721; &#xC9C8; &#xCC99;&#xC218; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (SMA) smn1&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SMN2 &#xB77C;&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4; &#xC811;&#xD569; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xAE09;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC811;&#xD569; RNA (tsRNA) SMN2 &#xC811;&#xD569; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC774;&#xC81C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xAC10;&#xC18C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC0DD; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC04;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC811;&#xD569;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; SMN tsRNA &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4;-&#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xCC28;&#xB2E8; antisense (&#xC544;&#xC18C;-tsRNA) &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC18C;-tsRNA &#xBCA1;&#xD130; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; SMA &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xAC8C;&#xC7AC;, SMA &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; SMN &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; snRNP &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; SMN &#xC885;&#xC18D; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xC18C; tsRNA &#xC804;&#xB7B5; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC811;&#xD569; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD06C;&#xAC8C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC811;&#xD569; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D;.

SMN2 &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xC758; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC811;&#xD569;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Modalidades de ARN se est&#xE1;n desarrollando como un medio poderoso para re-dirigir los eventos de splicing de pre-mRNA de pat&#xF3;genos. Mejorar la eficiencia de estas mol&#xE9;culas in vivo es fundamental, ya que se mueven hacia las aplicaciones cl&#xED;nicas. La atrofia muscular espinal (SMA) es causada por la p&#xE9;rdida de SMN1. Un gen copia casi id&#xE9;ntica llamada SMN2 produce bajos niveles de prote&#xED;na funcional, debido a splicing alternativo. Hemos informado anteriormente de un empalme de trans-ARN (tsRNA) que re-dirigido SMN2 empalme. Ahora nos muestran que la reducci&#xF3;n de la competencia entre los sitios de empalmes end&#xF3;genos aument&#xF3; la eficiencia de trans-empalme. Un sistema &#xFA;nico vector que se ha desarrollado expres&#xF3; la tsRNA SMN y un sitio de empalme bloqueo antisentido (ASO-tsRNA). El vector de ASO-tsRNA significativamente elevados los niveles de SMN en la ense&#xF1;anza primaria fibroblastos de pacientes con AME, en el sistema nervioso central de ratones SMA y el aumento de SMN dependiente de la in vitro snRNP asamblea. Estos resultados demuestran que la estrategia de ASO-tsRNA proporciona la penetraci&#xF3;n en el mecanismo de trans-empalme y un medio de mejorar significativamente trans-empalme actividad in vivo.

Desarrollo de un sistema &#xFA;nico vector que mejora la trans-empalme de SMN2 Transcripciones

&#x810A;&#x9AD3;&#x6027;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x75C7; (SMA) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x75BE;&#x75C5;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;-1 (SMN1)&#x3002;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;SMN2&#xFF0C;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x6240;&#x6709; SMA &#x60A3;&#x8005;&#x4EA7;&#x751F;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x4F4E;&#x3002;&#x867D;&#x7136; SMN2 &#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x6B63;&#x5E38;&#xFF0C;&#x5168;&#x957F; SMN&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 90%&#x7684; SMN2 &#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x526A;&#x63A5;&#x53CA;&#x7F16;&#x7801;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6700;&#x540E;&#x7F16;&#x7801;&#x5916;&#x663E;&#x5B50; (&#x5916;&#x663E;&#x5B50; 7) &#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;SMN2&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x7ED1;&#x5B9A; SMN &#x5916;&#x663E;&#x5B50; 7 &#x548C;&#x8C03;&#x5236; SMN2 &#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x53CC;&#x529F;&#x80FD; Rna&#x3002;&#x8981;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7684; RNAs &#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x53CD;&#x4E49;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DF2;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x548C;&#x5236;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x6B64;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x53CC;&#x529F;&#x80FD; Rna&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6709;&#x4E00;&#x4E8C;&#x6298;&#x7684; SMN &#x8BF1;&#x5BFC;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; &#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x548C;&#x62DB;&#x8058;&#x7684; SR &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7; SR &#x62DB;&#x8058;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7684; RNA &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7684; RNAs &#x6709;&#x6548;&#x589E;&#x52A0; SMN &#x4EBA;&#x4E3B; SMA &#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x94C5;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x4F5C;&#x4E3A; 2&#39;-O-&#x7532;&#x57FA; RNAs &#x5408;&#x6210;&#x4E86;&#xFF0C;&#x5E76;&#x88AB;&#x76F4;&#x63A5;&#x6CE8;&#x5165;&#x7684; SMA &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x5355; RNA &#x6CE8;&#x5C04;&#x90FD;&#x80FD;&#x975E;&#x6CD5; SMN &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x548C;&#x6574;&#x4E2A;&#x810A;&#x67F1;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x513F; SMA &#x5C0F;&#x9F20;&#x9C81;&#x68D2;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;&#x5728;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684; SMA &#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E73;&#x5747;&#x5BFF;&#x547D;&#x5EF6;&#x957F;&#x7684;&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2; RNAs &#x5206;&#x5A29;&#x540E;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x6280;&#x672F;&#x5DF2;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD;&#x5230; SMA &#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x9002;&#x4E8E;&#x591A;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x524D; mRNA &#x526A;&#x63A5;&#x3002;

&#x53CC;&#x5B98;&#x80FD;&#x56E2;&#x7684; Rna &#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x810A;&#x9AD3;&#x6027;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x75C7; SMN &#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;

Spinal muscular atrophy (SMA) is a motor neuron disease caused by the loss of survival motor neuron-1 (SMN1). A nearly identical copy gene, SMN2, is present in all SMA patients, which produces low levels of functional protein. Although the SMN2 coding sequence has the potential to produce normal, full-length SMN, approximately 90% of SMN2-derived transcripts are alternatively spliced and encode a truncated protein lacking the final coding exon (exon 7). SMN2, however, is an excellent therapeutic target. Previously, we developed bifunctional RNAs that bound SMN exon 7 and modulated SMN2 splicing. To optimize the efficiency of the bifunctional RNAs, a different antisense target was required. To this end, we genetically verified the identity of a putative intronic repressor and developed bifunctional RNAs that target this sequence. Consequently, there is a 2-fold mechanism of SMN induction: inhibition of the intronic repressor and recruitment of SR proteins via the SR recruitment sequence of the bifunctional RNA. The bifunctional RNAs effectively increased SMN in human primary SMA fibroblasts. Lead candidates were synthesized as 2'-O-methyl RNAs and were directly injected in the central nervous system of SMA mice. Single-RNA injections were able to illicit a robust induction of SMN protein in the brain and throughout the spinal column of neonatal SMA mice. In a severe model of SMA, mean life span was extended following the delivery of bifunctional RNAs. This technology has direct implications for the development of an SMA therapy, but also lends itself to a multitude of diseases caused by aberrant pre-mRNA splicing.

Delivery of bifunctional RNAs that target an intronic repressor and increase SMN levels in an animal model of spinal muscular atrophy.

L&#x26;#39;amyotrophie spinale (SMA) est une maladie des neurones moteurs caus&#xE9;e par la perte de la survie des neurones moteurs-1 (SMN1). Un g&#xE8;ne copie presque identique, SMN2, est pr&#xE9;sent dans tous les patients SMA, qui produit un faible niveau de prot&#xE9;ine fonctionnelle. Bien que la s&#xE9;quence de codage SMN2 a le potentiel pour produire normale, pleine longueur SMN, environ 90% de SMN2 d&#xE9;riv&#xE9;s transcriptions sont &#xE9;pissage alternatif et codent pour une prot&#xE9;ine tronqu&#xE9;e manque la finale de codage exon (exon 7). SMN2, cependant, est une excellente cible th&#xE9;rapeutique. Auparavant, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; ARN bifonctionnels d&#x26;#39;&#xE9;pissage li&#xE9; SMN SMN2 l&#x26;#39;exon 7 et modul&#xE9;e. Pour optimiser l&#x26;#39;efficacit&#xE9; des ARN bifonctionnels, une cible antisens diff&#xE9;rente &#xE9;tait n&#xE9;cessaire. &#xC0; cette fin, nous avons v&#xE9;rifi&#xE9; l&#x26;#39;identit&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;tique d&#x26;#39;un putatifs introniques r&#xE9;presseurs et d&#xE9;velopp&#xE9; ARN bifonctionnels que l&#x26;#39;objectif de cette s&#xE9;quence. Par cons&#xE9;quent, il existe un m&#xE9;canisme de 2 fois de l&#x26;#39;induction SMN: inhibition de la r&#xE9;presseur intronique et le recrutement des prot&#xE9;ines SR par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire de la s&#xE9;quence de recrutement de la SR bifonctionnel ARN. Les ARN bifonctionnels effectivement augment&#xE9; SMN dans des fibroblastes primaires SMA. Candidats de plomb ont &#xE9;t&#xE9; synth&#xE9;tis&#xE9;s comme 2&#x26;#39;-O-m&#xE9;thyle ARN et ont &#xE9;t&#xE9; directement inject&#xE9;s dans le syst&#xE8;me nerveux central de souris SMA. Simple d&#x26;#39;ARN-injections ont pu illicite une induction robuste de la prot&#xE9;ine SMN dans le cerveau et tout au long de la colonne vert&#xE9;brale de souris SMA n&#xE9;onatales. Dans un mod&#xE8;le de grave de SMA, la long&#xE9;vit&#xE9; moyenne a &#xE9;t&#xE9; prolong&#xE9; suite &#xE0; la livraison des ARN bifonctionnels. Cette technologie a des implications directes pour le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une th&#xE9;rapie SMA, mais aussi se pr&#xEA;te &#xE0; une multitude de maladies caus&#xE9;es par aberrante pr&#xE9;-ARNm &#xE9;pissage.

La livraison des ARN bifonctionnels qui visent une Repressor intronique et augmenter les niveaux SMN dans un mod&#xE8;le animal de l&#x26;#39;amyotrophie spinale

Spinale Muskelatrophie (SMA) ist eine Motoneuron-Krankheit verursacht durch den Verlust des &Uuml;berlebens Motoneuron-1 (SMN1). Eine fast identische Kopie-gen SMN2, ist in allen SMA-Patienten, die geringe funktionelle Protein produziert. Obwohl die SMN2 kodierende Sequenz das Potenzial hat, normal zu produzieren, in SMN, etwa 90 % der SMN2-abgeleitete Transkripte sind alternativ gesplei&szlig;t und Codieren eine abgeschnittene Protein fehlt die letzte Codierung Exon (Exon 7). SMN2, ist jedoch eine ausgezeichnete therapeutisches Ziel. Zuvor entwickelten wir bifunktionelle RNAs, die SMN Exon 7 und modulierte SMN2-Splei&szlig;en gebunden. Um die Effizienz des bifunktionelle RNAs zu optimieren, wurde ein anderes antisense Ziel erforderlich. Zu diesem Zweck wir genetisch &uuml;berpr&uuml;ft die Identit&auml;t des ein mutma&szlig;liches verband intronic Verdr&auml;nger und entwickelt bifunktionelle RNAs, die diese Sequenz abzielen. Folglich gibt es einen 2-fold Mechanismus der SMN-Induktion: Hemmung der verband intronic Verdr&auml;nger und Rekrutierung von SR-Proteine &uuml;ber die SR-Rekrutierung-Sequenz bifunktionelle RNA. Bifunktionelle RNAs erh&ouml;ht effektiv SMN in menschlichen Fibroblasten f&uuml;r prim&auml;re SMA. Blei Kandidaten wurden als 2&#39;-O-Methyl-RNAs synthetisiert und wurden direkt in das zentrale Nervensystem von SMA-M&auml;usen injiziert. Einzel-RNA-Injektionen konnten illegale eine robuste Induktion von SMN-Protein im Gehirn und in der gesamten Wirbels&auml;ule von Neugeborenen SMA-M&auml;usen. In einem schweren Modell der SMA verl&auml;ngerte mittlere Lebensdauer nach der Zustellung des bifunktionelle RNAs. Diese Technologie hat direkte Auswirkungen auf die Entwicklung einer Therapie f&uuml;r SMA, sondern eignet sich auch f&uuml;r eine Vielzahl von Erkrankungen durch aberrante Pre-mRNA-Splei&szlig;en.

Lieferung von bifunktionelle RNAs, die ein verband intronic Verdr&auml;nger und SMN-Level in einem Tiermodell der spinalen Muskelatrophie erh&ouml;hen.

Atrofia muscolare spinale (SMA) &egrave; una malattia del motoneurone causata dalla perdita di survival motor neuron-1 (SMN1). Un gene copia quasi identica, SMN2, &egrave; presente in tutti i pazienti SMA, che produce bassi livelli di proteina funzionale. Sebbene la sequenza codifica SMN2 ha il potenziale per produrre normale, full-length SMN, circa il 90% delle trascrizioni SMN2-derivati sono splicing e codificare una proteina tronca manca l&#39;esone codifica finale (esone 7). SMN2, tuttavia, &egrave; un eccellente obiettivo terapeutico. In precedenza, abbiamo sviluppato RNAs bifunzionale che associato esone SMN 7 e modulata SMN2 splicing. Per ottimizzare l&#39;efficienza del RNAs bifunzionale, era necessaria una diversa destinazione antisenso. A tal fine, abbiamo verificata l&#39;identit&agrave; di un repressore intronic putativo e geneticamente sviluppato RNAs bifunzionale che questa sequenza di destinazione. Di conseguenza, c&#39;&egrave; un meccanismo di induzione di SMN 2 volte: inibizione del repressor intronic e reclutamento delle proteine SR tramite la sequenza di reclutamento SR del RNA bifunzionale. Il RNAs bifunzionale aumentato efficacemente SMN in fibroblasti umani primari di SMA. I candidati di piombo sono stati sintetizzati come 2&#39;--O metil RNAs e sono stati iniettati direttamente nel sistema nervoso centrale dei topi SMA. Singolo-RNA iniezioni erano in grado di illecito una robusta induzione della proteina SMN nel cervello e in tutta la colonna spinale di topi SMA neonatale. In un modello grave di SMA, durata media della vita &egrave; stata estesa la consegna del RNAs bifunzionale. Questa tecnologia ha implicazioni dirette per lo sviluppo di una terapia di SMA, ma si presta anche a una moltitudine di malattie causate da splicing pre-mRNA aberrante.

Consegna della RNAs bifunzionale che target un repressore intronic e aumentare i livelli di SMN in un modello animale di atrofia muscolare spinale.

&#x810A;&#x9AC4;&#x6027;&#x7B4B;&#x840E;&#x7E2E;&#x75C7;&#xFF08;SMA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;-1&#xFF08;SMN1&#xFF09;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x307B;&#x307C;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;SMN2&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;SMA&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SMN2&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;SMN&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;SMN2&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x7D04;90&#xFF05;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#xFF08;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;7&#xFF09;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x77ED;&#x7E2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SMN2&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;SMN&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;7&#x3068;&#x5909;&#x8ABF;SMN2&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;RNA&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x6A19;&#x7684;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x958B;&#x767A;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x306E;SR&#x52DF;&#x96C6;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;SR&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#xFF1A;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;SMN&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;2&#x500D;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x521D;&#x4EE3;SMA&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;SMN&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x5019;&#x88DC;&#x304C;2&#x26;#39;-O-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;RNA&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;SMA&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;RNA&#x6CE8;&#x5C04;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;SMA&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x810A;&#x67F1;&#x5168;&#x4F53;SMN&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x6CD5;&#x306A;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SMA&#x306E;&#x91CD;&#x75C7;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5BFF;&#x547D;&#x304C;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;RNA&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x5F8C;&#x306B;&#x5EF6;&#x9577;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;SMA&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;pre-mRNA&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x810A;&#x9AC4;&#x6027;&#x7B4B;&#x840E;&#x7E2E;&#x75C7;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;SMN&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0A;&#x3052;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;RNA&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;

&#xADFC;&#xC721; &#xC9C8; &#xCC99;&#xC218; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (SMA) &#xC11C;&#xBC14;&#xC774;&#xBC8C; &#xBAA8;&#xD130; &#xC2E0;&#xACBD; 1 (SMN1)&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xD130; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAC70;&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; SMN2&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; SMA &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xAE09;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SMN2 &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; SMN smn2&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xC758; &#xC57D; 90% &#xBC30;&#xC120; &#xB610;&#xB294; &#xACE0; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD80;&#xC871; &#xCD5C;&#xC885; &#xCF54;&#xB529; &#xC5D1;&#xC190; (exon 7)&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; SMN2, &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; SMN exon 7&#xACFC; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; SMN2 &#xC811;&#xD569; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; bifunctional RNAs &#xAC1C;&#xBC1C;. Bifunctional Rnas&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xC13C;&#xC2A4; &#xB300;&#xC0C1; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1; intronic &#xC9C4;&#xC555;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; bifunctional RNAs &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; SMN &#xC720;&#xB3C4; 2-fold &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;: &#xC5B5;&#xC81C; intronic &#xC9C4;&#xC555; &#xBC0F; SR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; bifunctional RNA&#xC758; SR &#xBAA8;&#xC9D1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Bifunctional Rnas&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; SMA &#xAC8C;&#xC7AC; SMN &#xC99D;&#xAC00;. &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xBA54; 2&#39;-O-&#xD2F8; Rnas&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;&#xC640; SMA &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC911;&#xCD94;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC8FC;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; RNA &#xC8FC;&#xC0AC; &#xBD88;&#xBC95; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; SMN &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB450;&#xB1CC;&#xC640; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; SMA &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xCC99;&#xCD94; &#xCE7C;&#xB7FC;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4;. SMA&#xC758; &#xC2EC;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC218;&#xBA85; bifunctional Rnas&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD655;&#xB300; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; SMA &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD0C8; &#xC120; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xC811;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xBE4C;&#xB824;&#xC900;&#xB2E4;.

&#xCC99;&#xC218; &#xADFC;&#xC721; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D;&#xC758; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; SMN &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; intronic &#xC9C4;&#xC555;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1; bifunctional Rnas&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;.

La atrofia muscular espinal (AME) es una enfermedad de la neurona motora causada por la p&#xE9;rdida de la supervivencia de la neurona motora-1 (SMN1). Un gen copia casi id&#xE9;ntica, SMN2, est&#xE1; presente en todos los pacientes con SMA, lo que produce bajos niveles de prote&#xED;na funcional. Aunque la secuencia de codificaci&#xF3;n de SMN2 tiene el potencial para producir lo normal, de cuerpo entero SMN, aproximadamente el 90% de SMN2 derivados de las transcripciones son empalmados alternativamente y codifican una prote&#xED;na truncada que carece de la final del ex&#xF3;n codificante (ex&#xF3;n 7). SMN2, sin embargo, es un objetivo terap&#xE9;utico excelente. Anteriormente, hemos desarrollado ARN bifuncionales que ataban SMN SMN2 empalme del ex&#xF3;n 7 y modulada. Para optimizar la eficiencia de los RNAs bifuncionales, un objetivo diferente antisentido se requiere. Para ello, se verific&#xF3; gen&#xE9;ticamente la identidad de un supuesto ARN intr&#xF3;nicas bifuncionales represor y desarrollados que se dirigen a esta secuencia. Por consiguiente, existe un mecanismo de 2-pliegue de inducci&#xF3;n SMN: inhibici&#xF3;n del represor intr&#xF3;nica y el reclutamiento de prote&#xED;nas SR a trav&#xE9;s de la secuencia de contrataci&#xF3;n de la SR bifuncional ARN. Los ARNs bifuncionales efectivamente aument&#xF3; SMN en los fibroblastos humanos primarios SMA. Candidatos de plomo se sintetiz&#xF3; como 2&#x26;#39;-O-metil ARN y se inyectaron directamente en el sistema nervioso central de ratones SMA. Single-ARN inyecciones fueron capaces de inducci&#xF3;n il&#xED;cita un s&#xF3;lido de prote&#xED;na SMN en el cerebro y en toda la columna vertebral de ratones SMA neonatales. En un modelo de grave de SMA, la media de esperanza de vida se extendi&#xF3; despu&#xE9;s de la entrega de ARN bifuncionales. Esta tecnolog&#xED;a tiene implicaciones directas para el desarrollo de una terapia de SMA, pero tambi&#xE9;n se presta a una multitud de enfermedades causadas por el aberrante pre-mRNA de empalme.

Article	Year
Functional epitope on human neutrophil flavocytochrome b558. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)\| PubMed ID: 12794137	2003
Development of a single vector system that enhances trans-splicing of SMN2 transcripts. PloS one\| PubMed ID: 18941511	2008
Delivery of bifunctional RNAs that target an intronic repressor and increase SMN levels in an animal model of spinal muscular atrophy. Human molecular genetics\| PubMed ID: 19228773	2009

Travis D. Baughan

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