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Articles by Zui Pan in JoVE
JoVE General
生細胞におけるストア作動性カルシウムエントリの蛍光ベースの測定：培養癌細胞から骨格筋線維に
1Department of Physiology and Biophysics, Confocal Microscopy and Cell Imaging Core, Robert Wood Johnson Medical School, 2Department of Physiology and Biophysics, Robert Wood Johnson Medical School, 3Muscle Biology Research Group-MUBIG Schools of Nursing & Medicine, University of Missouri-Kansas City
ストア作動性Caの範囲
Other articles by Zui Pan on PubMed
Mg29を欠い筋細胞におけるストア作動性カルシウムチャネルの機能不全
細胞膜（PM）小胞体または筋小胞体（ER / SR）の細胞内カルシウムストアの枯渇後の細胞外カルシウムの仲介容量性エントリに置かストア作動性カルシウムチャネル（SOC）。 PMとER / SRの間に親密な相互作用は、このカルシウムシグナル伝達経路の操作に不可欠である。 Mitsugumin 29（MG29）は、PMと骨格筋のSR間の接合部に位置しシナプトフィジン-FAMILY-関連タンパク質である。ここでは、骨格筋でのSOCを識別し、MG29とSRに位置するリアノジン受容体（RyR）がその規制を特徴付ける。 mg29の標的削除は、接合部の膜構造を変化させるSOCとSRのカルシウムの恒常性の重度の機能障害を引き起こし、疲労刺激する筋肉の感受性を増加させます。 SOCの深刻な機能不全は、SOCの活性化がPMとSRの間そのままの相互作用を必要とし、RyRsのコンフォメーション変化にリンクされていることを示す、タイプ1とタイプ3 RyRs両方を欠いている筋細胞で識別されます。欠陥のあるSOCは、短期的な興奮収縮連関に取るに足らないと思われるのに対し、SOCを介して低速の累積カルシウム流入が長期的なカルシウムの恒常性に重要であるなど、その減少のSOC活動は集中的な運動の条件の下で筋肉疲労を誇張する。
FKBP12とカルシニューリンとの間のCa（2 +）依存性相互作用は骨格筋のCa（2 +）放出チャネルの活性を調節する
カルシニューリンは、Ca（2 +）と多様な細胞機能を持つカルモジュリン依存性プロテインホスファターゼである。ここでは、マウス骨格筋から派生したC2C12細胞株ではカルシニューリンとリアノジン受容体（RyR）との間の物理的および機能的相互作用を検討した。免疫沈降実験では、RyRとカルシニューリンとの間の関連が強いのCa（2 +）依存性を示すことを明らかにした。この協会は、Ca（2 +）カルシニューリンとFK506結合蛋白質（FKBP12）、RyRのアクセサリーサブユニットとの間の依存性相互作用が含まれます。 C2C12細胞ではカフェイン誘発性のCa（2 +）放出（CICR）強化カルシニューリンのシクロスポリン、阻害剤の前処理。この効果は、FK506およびラパマイシン、RyRからFKBP12の解離を引き起こすことが知られている2つの薬物のものと同様であった。 C2C12細胞におけるカルシニューリンの恒常的活性型の過剰発現、DeltaCnA（391から521）は（カルシニューリンからの最後の131個のアミノ酸の欠失）、CICRの減少となりました。 CICRの活性の低下の一部はさらにシクロスポリンAによる前処理、内因性カルシニューリン阻害剤（カイン）の過剰発現またはCICRのアップレギュレーションをもたらしたC2C12細胞におけるカルシニューリンの不活性な形（DeltaCnA（H101Q））により回収した。一緒に、我々のデータは、カルシニューリン、FKBP12と、RyRの間で三量体相互作用は、RyRチャネル活性の調節に重要であり、筋肉の収縮と弛緩のシグナル伝達（2 +）のCaに重要な役割を果たしていることを示唆している。
ストア作動性Ca2の規制に関するカルセクエストリンから逆行性シグナル+骨格筋内のエントリ
カルセクエストリン（CSQ）が横紋筋細胞の筋小胞体の内腔に高容量のCa（2 +）結合タンパク質の存在（SR）であるとの相互作用を介してリアノジン受容体のCa（2 +）放出チャネル活性を調節することが示されている他のタンパク質は、SRに存在する。によってカフェインおよび電圧誘発Ca（2 +）放出マウス骨格筋管C2C12強化で、ここでは、野生型CSQまたはジャンクション結合領域（デルタジャンクションCSQアミノ酸86から191）を欠いているCSQ変異体の過剰発現を示すカルシウム欠損する変異CSQの過剰発現のに対し、SRのCa（2 +）の負荷を増加させる（2 +）結合、アスパラギン酸リッチドメイン（アミノ酸352から367、デルタASP-CSQ）が反対の効果を示した。タプシガルギンによってSRのCa（2 +）の枯渇が開始され、ストア作動性Ca（2 +）C2C12筋管のエントリ（SOCE）。デルタASP-CSQでトランスフェクト筋管がSOCEの正常な機能を示したのに対し、SOCEの大きなコンポーネントは、野生型CSQまたはデルタジャンクションCSQの過剰発現によって抑制された。これらの結果は、過剰発現の条件の下でCSQのアスパラギン酸が豊富なセグメントは、SOCEメカニズムを妨げる構造的な相互作用を維持することができることを示しています。このような逆行性活性化メカニズムは、おそらくSRの接合部位で行われています。
筋細胞における接合部の膜構造およびストア作動性カルシウムエントリー
ストア作動性Ca2 +チャネル（SOC）は、細胞膜（PM）の細胞外Ca2 +の小胞体や筋小胞体の細胞内Ca2 +ストア（ER / SR）は、次の枯渇。仲介容量性エントリに位置するそれは、増殖、アポトーシス、遺伝子調節と運動性を含む細胞シグナル伝達プロセスの様々な重要な役割を果たしている。骨格筋では、表面膜上のL型Ca2 +チャネルは、電圧刺激に応答して活性化の遅い速度を有するため、細胞外Ca2 +のエントリをサポートしていません。最近の研究では、筋細胞におけるSOCの存在のための機能の証拠を提供してきました。骨格筋の三つ組接合に位置して膜タンパク質 - SOCの深刻な機能不全は、筋SR膜上にあるリアノジン受容体のいずれかを欠く細胞、またはmitsugumin 29で識別されます。これらの結果は、SOCの活性化がPMとSRの間そのままの相互作用を必要とし、リアノジン受容体のコンフォメーション変化にリンクされていることを示しています。 SOCを介してCa2 +の累積的なエントリは、細胞内Ca2 +ストアの補充のためのメカニズムを提供しますが、また、Ca2 +の集中的な運動と疲労の条件の下で筋収縮のために必要に追加できるだけでなく。 ER / SRとPMの適切なカップリングは、心筋、骨格筋やダイアド接合のトライアドの接合部では、励起誘導される細胞内Ca2 +放出膜のでなく、ストア枯渇開始した容量性Ca2 +流入のためにだけでなく、不可欠である。
ストア作動性カルシウムチャネルの活性化逆行
ストア作動性Ca2 +のエントリは、IP3受容体またはリアノジン受容体RyR/Ca2の持続活性化+小胞体/小胞体のリリースチャネル（ER / SR）を後に枯渇し、細胞内·小胞体のCa2 +ストアから補充するための重要なメカニズムを表しています。最近の研究では、アクティベーションプロセスRyRの構造変化に結合されるように見える筋細胞におけるストア作動性Ca2 +チャネル（SOC）の存在を実証した。細胞膜（PM）居住SR-位置してRyRによるSOCの調節は、SRとPMの間に接合膜構造の整合性を必要とします。 RyRをやり取りしたり、ERまたはSR内腔のCa2 +のバッファ容量に影響を与えるタンパク質はまた、SOCのアクティベーションプロセスに参加しています。カルセクエストリン（CSQ）とカルレティキュリン（CRT）が内腔のカルシウムのための高緩衝能力+を示すカルボキシル末端の非常に負に帯電領域と、SR / ER-常駐タンパク質である。 CSQとCRTは、細胞内Ca2 +放出のプロセスを調節するだけでなく、SOCの機能を調節するための逆行性シグナルを提供するかもしれないだけでなく。 CSQ、RyRとSOC間の機能的相互作用は、Ca2 +の重要な役割筋肉の収縮と開発にシグナル伝達を果たすことができる。 SOCのCRTの表現と操作の間に緊密なリンクがアポトーシスに感度が低下するが、SOCの変化した機能と相関する可能性のある特定の癌細胞に存在しています。
トロンビン誘導ラット心臓由来胚心筋細胞の Ca 2 + 動態: 蛋白質合成と細胞増殖との関係。
種々 の細胞血清プロテアーゼ, トロンビン増加増殖率と応答します。非分裂産後の哺乳類心筋細胞ではただし、細胞肥大トロンビンを誘導します。両方の成長の応答は初期 ca 2 + シグナリングと関連付けられています。本研究は ca 2 + 動態トロンビン胚心筋細胞分裂誘導を特徴づけるようなダイナミクス肥大や過成長をサポートするかどうかを確認するために行った。主はリリースの S (E) R から生じた ca 2 + ca 2 + の隔離し、が ca 2 + 店舗数分のみ永続化を即時、大きな単位で無料のトロンビン芽を答えた H9c2 ラットは 1 h 内補充されました。トロンビンは数時間の全体的な蛋白合成の率も増加しました。セル低の細胞外 ca 2 + のトロンビンを最初の 1 時間中に培養した場合この並進アップ - 遺伝子の転写に必要な規制が廃止されました。プロテアーゼ血清剥奪とドキソルビシン処理に起因する毒性に対して保護作用を授与しました。ただし、トロンビンどちら細胞肥大アルギニンバソプレッシン、また過形成、成長因子 (PDGF-BB） が血小板由来が観察されると見られているようで h9c2 誘発。バゾプレッシンおよび PDGF-BB と比較して、細胞外液、およびより迅速な S （メール） の r. 補充する簡単な ca 2 + シグナル伝達、少し陽イオン運動トロンビンを昇格Ca 2 + シグナルとトロンビンと成長応答これらの胚心筋細胞でこの ca 2 + の主要なを維持するのに十分ではないシグナルに依存するこのレポートに示す並進運動刺激によって生成ことを締結しました。
MG29とリアノジン受容体の共発現は、アポトーシス細胞死に至る：エフェクトを介した細胞内Ca2 +放出によって
細胞内Ca2 +ホメオスタシスの摂動は、細胞増殖とアポトーシスの過程を調節することが示されている。私たちの以前の研究では、mitsugumin 29（MG29）、シナプトフィジン-関連タンパク質は骨格筋の三つ組接合にローカライズされたことを示し、ストア作動性Ca2 +流入のプロセスを調節することにより、筋肉のカルシウムの重要な役割+シグナル伝達を提供しています。ここではMG29とリアノジン受容体（RyR）/ Ca2 +放出チャネルとの間の機能的相互作用を報告します。精製されたMG29タンパク質は脂質二重膜に組み込まれRyR/Ca2 +放出チャネルの活性を高めます。チャイニーズハムスター卵巣細胞でMG29とRyRの共発現は、細胞の生存率に有意な効果を示すだけではどちらのタンパク質の発現にもかかわらず、細胞内Ca2 +ストアの枯渇から生じるアポトーシス細胞死につながる。一過性発現の研究では、小胞体のRyRの存在は、細胞内小器官に原形質膜からMG29の保持につながります。 MG29とRyRの間にこの機能の相互作用は、筋細胞のCa2 +シグナル伝達プロセスにおいて重要な意味を持つことができます。我々のデータはまた、細胞内Ca2その摂動を示す+恒常性は、アポトーシスの開始に重要なシグナルとして機能することができます。
アポトーシスの間にシトクロムCの核内移行
ミトコンドリアからのシトクロムcの放出は、アポトーシス中における重要なイベントです。リリースシトクロムcは、カスパーゼ依存性アポトーシスシグナルを活性化することが示されています。本稿では、カスパーゼ非依存性の核アポトーシスにおけるシトクロムcの新しい役割についての証拠を提供しています。我々は、免疫と細胞内の両方の分画で明らかなように、アポトーシス誘導時にミトコンドリアから放出されるシトクロムcは、徐々に核に蓄積することが明らかになった。シトクロムc、アセチル化ヒストンH2Aの核内蓄積と平行がH2Aを変更されていないませんが、核から細胞質へ放出されました。単離核にシトクロムcの精製に加え、アセチル化の優先的な放出をrecapitulatedが、脱アセチル化ではなく、ヒストンH2A。シトクロムcは、クロマチン凝縮を誘導することが発見されました。これらの結果は、シトクロムcの核内蓄積が直接クロマチンのリモデリングに関与している可能性を示唆している。我々の結果は、核のアポトーシスを誘導におけるシトクロムcの新たな役割の証拠を提供しています。
ヒト有機アニオントランスポーター4の機能のグリシン残基の役割
ヒト有機アニオントランスポーター4（hOAT4）は、抗HIV治療薬、抗腫瘍薬、抗生物質、抗高血圧剤、及び抗炎症剤を含む、臨床的に重要な薬物の身体の処分に重要な役割を果たす有機イオントランスポーターのスーパーファミリーに属しています。そこで、本研究では、hOAT4関数で保存されたグリシン残基の役割を調べた。我々は、セリンに6グリシン残基のそれぞれを（位置11、241、383、388、400、466で）突然変異誘発し、その機能特性は、の取り込み[3 H]エストロンを測定することにより、COS-7細胞で分析した硫酸塩。我々の結果は、変異体のG11S、G383S、G388S、G466Sと、野生型hOAT4のものと同等の輸送活性を示したことを示した。対照的に、突然変異体G241SとG400Sはほぼ完全にトランスポート機能を失った。我々は、さらに、アラニン、バリン、ロイシンを含む側鎖の様々なサイズを有するアミノ酸、これらの残基を突然変異誘発によるのGly-241とGly-400を特徴とする。我々は、位置241と400でますます大きな側鎖がますますhOAT4機能障害ことを実証した。非透過性のビオチン化試薬を用いて細胞表面ビオチン化は、Gly-241とGly-400の変異が細胞表面にトランスポーターの輸送を妨害することを示した。変異型トランスフェクトした細胞の免疫蛍光分析は、これらの結果を確認した。位置241と400の大きな側鎖を有するアミノ酸の置換V（max）を減少し、Kの増加をもたらした（M.）これらの結果はGly-241とGly-400は両方の形質膜へのトランスポーターを標的とする上で重要であることを示唆している基質結合インチこれはhOAT4の重要なアミノ酸残基の最初の同定および特徴であり、有機イオントランスポーターファミリーの構造と機能の関係に重要な洞察を提供することがあります。
ヒト有機アニオントランスポーター4のヒスチジン残基の変異解析（hOAT4）
ヒト有機アニオントランスポーター4（hOAT4）は、抗HIV治療薬、抗腫瘍薬、抗生物質、抗高血圧と抗炎症剤を含む、臨床的に重要な薬物の身体の処分に重要な役割を果たしている有機アニオントランスポーターファミリーに属しています。 COS-7細胞における有機アニオンエストロン硫酸のhOAT4介在輸送はヒスチジン修飾試薬DEPC（ジエチルピロカーボネート）によって阻害された。したがってhOAT4の機能のヒスチジン残基の役割は部位特異的突然変異誘発により調べた。 hOAT4のすべての5つのヒスチジン残基は単独であるいは組み合わせてアラニンに変換されました。彼-47の単一の置換、またはトランスポート活性が50-80％減少につながったHis-47/52/83またはHis-47/52/83/305/469（H-以下）の同時交換。これらの変異体の全細胞の発現は野生型hOAT4のそれと類似していたものの、これらの変異体の減少した輸送活性は、細胞表面発現の減少量と相関していた。これらの結果は、位置47、47/52/83というより機能47/52/83/305/469障害膜発現でその変異を示唆している。 hOAT4のヒスチジン変異体のほとんどはDEPCによる阻害に対して感受性であったが、我々はまた、あることを示し、H469A（彼-469 - >アラ）は、この試薬による阻害に対して完全に非感受性であった。したがって、彼の-469の修正は、DEPCによってhOAT4の抑制のために責任があります。
タンパク質の折り畳み、ターゲット膜、ヒト有機アニオントランスポーターHOAT4の基質結合のN-結合型グリコシル化の役割
我々はまた、/収集と処理/ N-結合型糖鎖の修飾はヒト有機アニオントランスポーターhOAT4の機能的成熟に役割を果たしているかを評価するための新しいアプローチを使用していました。グルタミンをアスパラギンに変異さとツニカマイシン処理によってhOAT4におけるオリゴ糖の獲得の阻害は変異体のチャイニーズハムスター卵巣（CHO）-LECグリコシル化処理の異なる段階で欠陥のある細胞の一連の野生型hOAT4の式と組み合わせた。私たちは、突然変異誘発によるグリコシル化部位の破壊およびツニカマイシン処理によるグリコシル化の阻害の両方の細胞表面にターゲットすることができませんでした非グリコシル化hOAT4、をもたらしたことを明らかにした。対照的に、糖部分の異なる構造形態を運ぶ変異CHO-LECの細胞で合成されたhOAT4は、（Lec1細胞のマンノースに富んだ、Lec8細胞におけるシアルLec2細胞内の酸欠、シアル酸/ガラクトース欠損）のトラフィックをすることができました細胞表面へ。しかし、CHO-Lec1細胞で発現hOAT4は、親のCHO細胞で発現と比較して、その基板の有意に低い結合親和性を持っていた。本研究ではオリゴ糖の追加/取得する新しい情報を提供しますが、追加されたオリゴ糖の処理がhOAT4の膜挿入に参加していません。マンノース豊富な型からの複合型に追加されたオリゴ糖の処理は、基板のhOAT4の結合親和性を高めるために重要である。グリコシル化は、したがって、特にin vivoでhOAT4機能を調節するための手段として役立つかもしれません。
前立腺癌細胞アポトーシス誘導 TGF β バックスの過剰発現の感受性を高めます。
NRP 154 ラットの前癌の背側前立腺から派生した発癌性上皮細胞線です。これらの細胞は、TGF-β 誘発アポトーシスに絶妙に敏感です。対照的に、NRP 154 細胞は異なるどこバックス アポトーシスのユビキタスの刺激として機能する非腫瘍細胞、外因性のバックス蛋白の過剰発現を維持できることを見つけます。安定バックス過剰 NRP 154 細胞 TGF-β 誘発アポトーシスに感度の向上を示します。TGF-β 誘発アポトーシスの程度胸の谷間と高い相関バックスのアミノ末端で表示します。我々 のデータは、前立腺癌細胞が高レベルの翻訳後修飾を介して起動できる潜在バックスをホストできることを示します。
制御されていないカルシウムは、哺乳類の骨格筋ジストロフィーのためのシグナルとして作用スパークス
ほとんどの興奮性細胞は細胞膜や小胞体や筋小胞体との間の協調の相互作用を介して細胞内Caの厳密な制御（2 +）を維持します。静止筋小胞体のCa（2 +）放出機構は生存率と骨格筋の正常な機能にとって不可欠である。ここでは、微妙な膜の変形は、Ca（2 +）が無傷の哺乳類の骨格筋で火花誘発することを示している。自発的Ca（2 +）の火花が可逆的に浸透圧ショックにより誘導され、行使する正常な生理学的応答に関与することができます。壊れやすい膜の整合性ジストロフィー筋では、ストレス誘導性のCa（2 +）火花は、本質的に不可逆である。また、MDX筋肉に適度な運動は、Ca（2 +）スパーク応答を変更します。従って、膜変形誘発Ca（2 +）はカルシウム（2 +）シグナル伝達の生理学的および病態生理学的調節において重要な役割を持っており、ストア作動性Ca（慢性的な活性化との接続で制御されていないのCa（2 +）スパーク活動火花2 +）のエントリは、哺乳類の骨格筋のジストロフィー信号として機能することができます。
によってApcmin / +マウスにおける腸管腫瘍形成の抑制（ - ） - エピガロカテキン-3-ガレート、緑茶の主要カテキン
本研究は、緑茶の2つの主要な成分の効果を調査するように設計されています（ - ） - エピガロカテキン-3-ガレート（EGCG）とカフェインは、APC（分/ +）マウスの腸管腫瘍形成、人間のための認識モデルマウスに腸癌、有効成分の抑制作用に関与の可能なメカニズムを解明する。飲料液中の0.044パーセントの用量でカフェインが腸に対して全く阻害活性を有していなかった我々は、飲料液中の0.08％0.16％用量でEGCgの経口投与が有意に37％または47％で、小腸腫瘍の形成を減少させたことがわかった腫瘍形成。別の実験では、小腸腫瘍を0.02％〜0.32％の用量範囲でEGCgの経口投与により用量依存的に抑制された。 E-カドヘリンレベルの増加をもたらし、小腸腫瘍における核β-カテニン、c-Mycの、ホスホ-AKT、およびホスホ - 細胞外シグナル制御キナーゼ1/2（ERK1 / 2）のレベルを減少させたEGCgの経口投与。 EGCGとHT29ヒト大腸癌細胞の治療は、（異なる時点で12.5または20マイクロモル/ L）また、核から細胞質と細胞膜のβ-カテニンの転座を誘発し、58％に27％、E-カドヘリンのタンパク質レベルを増加とc-MycおよびサイクリンD1（20マイクロモル/ L、24時間EGCG）減少した。これらの結果は、EGCGが効果的に可能性がある異常な核のβ-カテニンと活性化AktとERKシグナルを含む発癌性イベントの減衰を介して、APC（分/ +）マウスでは腸の腫瘍形成を抑制したことを示しています。
脱共役ストア作動性Ca2 +エントリーとJunctophilin遺伝子を黙らせることで小胞体からの改変されたCa2 +放出
Junctophilin（JP）は、細胞表面と効率的な興奮収縮連関を確保する筋細胞の細胞内膜の間の密接な接触を仲介する。ここでは、JP発現の減少によって筋小胞体の細胞膜と端末槽（SR）の横細管（TT）陥入によって形成されたトライアドの接合構造のその混乱に欠陥がカルシウムにつながる+筋細胞の恒常性を示しています。 JP1とJP2の遺伝子の両方に対して小さなヘアピン干渉RNA（shRNA）をしてアデノウイルスを用いて、骨格筋線維のJPSの急性抑制を達成することができます。 shRNAの処理の筋肉はおそらくSRからTTに切り離さ逆行性シグナル伝達によるものである変形トライアド接合と低ストア作動性Ca2 +流入（SOCE）を示す。 JPのノックダウンでも、SRカルシウムの減少を引き起こす+ストレージと変更されたカフェイン誘発性Ca2 +放出、SRのCa2 TT膜の直立歩行の調節+放出機構を示唆している。我々のデータは、JPSは、全体的な細胞内Ca2 +筋細胞の恒常性を制御するのに重要な役割を果たしていることを示しています。我々は、JPSの発現の変化は、特定の筋肉の疾患や加齢に伴う表現型の変化のいくつかを根底にあると推測している。
プレセニリン2のループペプチドは、細胞内Ca2 +ホメオスタシスを乱すとアポトーシスを加速
アポトーシス細胞では、22アミノ酸プレセニリン-2ループペプチド（PS2-LP、プレセニリン2のアミノ酸308から329）は、カスパーゼ3によってプレセニリン2のカルボキシル末端断片の切断を介して生成されます。 。アポトーシスの進行にPS2-LPの影響は、しかし、知られていない。ここでは、HIV-TATとの融合タンパク質として導入時にPS2-LPは、ミトコンドリア依存性細胞死経路の強力な誘導因子であることを示している。生化学的および機能的研究は、TAT-PS2-LPは、イノシトール1,4,5 - 三リン酸受容体と活性化Ca（2 +）の小胞体からのリリースと対話することができますことを実証している。これらの結果は、細胞内CaのPS2-LP-媒介性変化（2 +）恒常性は、アポトーシスの加速にリンクされている可能性があります。したがって、PS2-LPの機能を標的とするがんや変性疾患の治療に有用な治療手段を提供することができます。
ブチル化ヒドロキシアニソールは、HepG2細胞におけるERKとJNKシグナル伝達経路と相まってNRF2経由です介在遺伝子発現を調節する
多くの天然および合成の癌化学予防化合物が第II相解毒や抗酸化ストレス応答性遺伝子の強力な誘導物質である。フェーズⅡ/抗酸化遺伝子の発現は、発癌の予防に重要な役割を果たします。多くのフェーズⅡ/抗酸化物質の遺伝子上にある酸化防止剤応答エレメント（ARE）、転写因子NRF2と結合し、多くの天然および合成がん化学予防化合物によって誘導されるこれらのフェーズⅡ/抗酸化遺伝子発現の活性化のために必要とされる。本研究では、誘導及びNRF2依存の転写活性であり、ARE-ブチルヒドロキシアニソールの調節における細胞外シグナル制御キナーゼ（ERK）およびc-Jun N末端キナーゼ（JNK）の潜在的な役割（BHA）を調べたHepG2細胞における媒介性ヘムオキシゲナーゼ-1（HO-1）タンパク質の発現。転写活性とHO-1蛋白質発現は、依存HepG2細胞におけるBHAによる治療後に用量を増加したされています。用量 - 反応とタイムコース実験では、BHAは、Nrf2の蓄積を増加させることを示し、併用KEAP1のタンパク質レベルを低下させた。我々は次のMAPKのリン酸化を検討し、BHAが大幅にERK1 / 2とJNK1 / 2のリン酸化レベルを増加させることが見つかりました。重要なのはBHA-誘導は、転写活性は生化学的阻害剤とそのドミナントネガティブ変異体を用いたERKとJNKシグナル伝達の阻害によって抑制されたものとします。共焦点顕微鏡技術を用いて、BHAによる治療は、細胞質にKEAP1によって隔離Nrf2のリリースを示し、そのNRF2は、核内に移行した。重要なのは、ERKとJNKシグナルのcDNAをトランスフェクションも同様にKEAP1質隔離からNRF2をリリースし、核内にNRF2の転位経路。一緒に、これらの結果は、ERKとJNKシグナル伝達経路は、BHA誘起され、媒介遺伝子発現と同様に、HepG2細胞におけるNrf2の核移行のNRF2依存的な調節に重要かつ積極的な役割を果たしていることを強く示唆した。
肝細胞増殖因子 (HGF) 系ラット卵巣と HGF ラット卵巣顆粒膜細胞 in Vitro における抗アポトーシス効果のタバコプロトプ。
肝細胞増殖因子 (HGF) は顆粒膜細胞 (GC) ステロイドを調節し、非卵巣細胞でアポトーシスを抑制します。仮説は、このようにステロイドを媒介とアポトーシスを抑制する、卵巣 HGF 卵胞形成をサポートする開発されました。後者を調査するには、抗アポトーシス アクション HGF の Gc および幼若ラットから単離した包でテストされました。結果は HGF はアポトーシス インジケーター染料、ヨ プロ 1 を使用して視覚化として GC と卵胞の培養におけるアポトーシス抑制を示した。免疫組織化学ウマ絨毛性性腺刺激ホルモン (eCG) で卵胞中 HGF、c に会ったの分布と HGF の活性化 (HGFA) 蛋白質を調査するために使用された-ラットをプライミングします。免疫陽性 HGF コンテンツ前卵胞内の最大の Gc のだった。心電図次大から胞状卵胞高架 HGF が莢膜細胞と Gc。 c に会ったに強い染色 Gc に先読み小前卵胞内で観察されたと比較すると間質細胞で染色した;次の心電図、c に会ったのレベルだった Gc で低下が、莢膜細胞と間質細胞内で増加しました。Hgfa 新機動戦記は卵胞膜、間質, および非プライミングとプライミング卵巣の Gc に含まれています。心電図次 HGFA 卵胞膜細胞および Gc で大から胞状卵胞内に比較して気道より明らかであった。HGF、c に会ったと HGFA のプレゼンス前卵胞の潜在的 in vitro 発生する in vivo 観察された抗アポトーシス効果 HGF の有効にするでしょう。高度な卵胞は HGF の c に会ったの細胞分布の変化と卵巣 HGF システム ホルモン in vivo で調整されることを示唆 HGFA につながった。
グランザイム B のタイプ 2 ヘルパー T 細胞の T 細胞受容体が誘導する細胞死は重要です。
CD95L T 細胞受容体 （TCR） が必要ですが-誘発細胞死 (TCR ICD) T ヘルパー 1 セルで、TCR-ICD Th2 細胞を仲介する分子メカニズムは知られています。我々 同族 ligands ブロックは活性化 Th2 細胞のアポトーシスに及ぼす影響を有しなかったので死の受容体 Th2 細胞の TCR ICD には関与されていないが見つかりました。さらに、カスパーゼ Th2 細胞の TCR ICD に積極的に関与されていないことを示した。しかし、グランザイム B (GrB) 活性の阻害がない Th1 細胞、Th2 細胞で TCR ICD 廃止。同様から GrB 欠損マウス由来 Th2 細胞 TCR ICD に抵抗力があったし、GrB 欠乏または GrB 活性阻害したがって Th2 サイトカインの生産を強化します。GrB 欠損マウスはアレルゲン吸入誘発喘息に対する感受性の増加を展示しました。したがって、GrB は Th2 細胞の TCR ICD で重要な役割を果たしています。
イソチオシアネートの作用機序：ARE-調節遺伝子の誘導は、ERKとJNKの活性化とNrf2のリン酸化と核移行に関係している
第II相解毒とストレス応答性遺伝子のアップレギュレーションは、がんの予防に重要な役割を果たすと考えられており、多くの天然化合物は、これらの遺伝子の強力な誘導物質であることが示されている。これまでの研究では、これらの遺伝子に見られる抗酸化応答要素（ARE）、転写因子NRF2に拘束されることを示し、化学予防化合物が、酸化ストレスによる活性化に応答する。本研究では、細胞外シグナル制御キナーゼ（ERK）およびc-Jun-NH（2） - キナーゼフェネチルイソチオシアネートの調節（JNK）（PEITC）誘導とNRF2依存するアクティビティの役割を調査し、 ARE-ドリブンヘムオキシゲナーゼ-1（HO-1）PC-3細胞における遺伝子発現。活動であり、HO-1の発現が強くPEITCによる治療後に増加した。 PEITCはまた、核内にERK1 / 2とJNK1 / 2のリン酸化とKEAP1によって隔離からNrf2の原因となったリリース、およびその後の転座を増加させた。重要なのは、NRF2はまたERKやJNKのトランスフェクションの後、これらの活性化ERKとJNKが核内にNRF2と共局在し、その核に移行した。 ERKとJNKシグナル伝達の活性化にも活動であり、HO-1発現の上昇をもたらした。重要なのは、PEITC誘起されるアクティビティは、ERKとJNKシグナル伝達の阻害によって抑制された。 in vitroでキナーゼアッセイは、ERK2とJNK1の両方が直接グルタチオンS-トランスフェラーゼ-NRF2蛋白質をリン酸化することができることを示した。一緒に、これらの結果は、強くPC-3細胞のPEITC治療は順番に、核への移行をリン酸化するNRF2とを誘導し、ERKとJNKを活性化するモデルを示唆している。核NRF2アクティブに要素であり、HO-1を含むストレス応答遺伝子の発現を誘導する。
筋肉の老化は妥協のCa2 +スパークシグナリングおよび偏析細胞内Ca2 +放出に関係している
細胞内Ca2ための恒常的な能力を減少さ+（[Ca2 +の] i）の運動は、筋肉の老化時にサルコペニアと収縮機能障害の進行の根底にある可能性があります。我々は高齢化に関連付けられている骨格筋におけるCa 2 +恒常性に2つの変化を報告します。 Ca2 +のカルシウムの元素単位である火花、+筋小胞体からのリリースでは、まだ膜構造の変形によって、動的な方法で活性化する、若い筋肉に休息条件の下で沈黙している。のCa2 +の火花の動的な性質は、高齢者の骨格筋で失われたように表示されます。孤立した筋肉の準備に繰り返し電圧刺激を用いて、高齢者の骨格筋の正常な興奮収縮プロセスからuncouplesことが分離された[Ca2 +の] iの予備を識別します。同様の表現型は、筋膜の微細構造とCa2 +シグナル伝達の維持に関与しているmitsugumin-29（MG29）と呼ばれるシナプトフィジン-ファミリータンパク質のために思春期の筋肉がnullの場合、観測されている。高齢者の骨格筋でMG29の発現低下と相まって、この発見は、MG29式は老化時に骨格筋のCa 2 +恒常性を維持する上で重要であることを示唆している。
Azumoleneは、骨格筋リアノジン受容体に結合ストア作動性カルシウムエントリのコンポーネントを抑制する
ダントロレンは、悪性高熱時に生成され、昇格筋形質ののCa（2 +）、揮発性麻酔薬によって引き起こされる薬理遺伝学の危機を軽減します。 1型リアノジン受容体（RYR1）、骨格筋筋小胞体のCa（2 +）放出チャネルへのダントロレンの特異的結合が実証されているが、RYR1チャネル機能の直接のダントロレンの抑制のための証拠はほとんどない。最近の研究で示唆され、ストア作動性Ca（2 +）エントリ（SOCE）は骨格筋の機能に寄与するが、この経路上のダントロレンの効果が検討されていません。ここでは、タプシガルギンによって誘導されるSOCEコンポーネントが影響を受けません。一方azumolene、等しい効力ダントロレンアナログが、カフェインとリアノジンによってRYR1の活性化に結合SOCEのコンポーネントを阻害することを示しています。我々のデータは、azumoleneは、骨格筋でSOCEするシグナル伝達、細胞の2つのメカニズムRYR1から独立したと1つの結合されているものを区別することを示唆している。
外部ループの決定とヒト有機アニオントランスポーターHOAT1のN末端とC末端の細胞オリエンテーション
OAT（有機アニオントランスポーター）ファミリー仲介環境有害物質の多様な配列と臨床的に重要な薬物の吸収、分布および排泄。 OATの機能障害が有意に腎、肝、神経や胎児毒性や病気に貢献しています。 hOAT1（ヒトOAT1）の位相モデルを確立する最初のステップとして、我々は外部ループとN-は、このトランスポーターのC末端の細胞の配向を調べた。免疫蛍光研究と部位特異的化学標識を組み合わせたアプローチがこのような目的のために使用された。 N-とトランスポーターのC末端の両方が同定培養細胞で発現mycタグhOAT1の免疫蛍光顕微鏡は、細胞質内に位置していた。アルギニンと予測され細胞外ループIのLys59の交換は、膜透過性のNHS（N-ヒドロキシスクシンイミド）-SS（ジチオ） - ビオチンの細胞外培地中に存在することで標識のために主にアクセスできませんでした変異体（K59R）となりました。この結果は、ループは、私は細胞膜の外側に直面していることを示唆している。推定される細胞外ループIII、外リジンを欠いている変異K59RのVおよびVIに導入し、単一のリジン残基は、これらの推定細胞外ループの細胞外ドメインであることを示唆し、膜透過性のNHS-SS-ビオチンと容易に反応タンパク質。これらの研究は、細胞外ループとN末端とhOAT1のC末端の細胞方向の最初の実験的証拠を提供した。
JPH2エンコードされたJunctophilin-2の変異は、ヒトの肥大型心筋症に関連付けられている
Junctophilin-2（JPH2）junctophilinsの心臓の特定のメンバー、物理的に形質L型カルシウムチャネルとカルシウム誘発性カルシウム放出のための筋小胞体のリアノジン受容体を近似する上で重要な接合膜複合体タンパク質の新た特徴ファミリです。 JPH2ノックアウトマウスは破壊され、カルシウムトランジェント、変更された接合膜複合体形成、心筋症、および胚致死を示した。さらに、JPH2遺伝子の発現はマウス心筋症モデルでダウンレギュレートされています。この目的のために、我々は、ヒトの肥大型心筋症（HCM）の病因のための新たな候補遺伝子としてJPH2を探った。 JPH2の、ポリメラーゼ連鎖反応を用いた高速液体クロマトグラフィーを変性させ、直接DNA配列決定、包括的なオープンリーディングフレーム/スプライスサイト変異解析は、HCMと388とは無関係の患者から得られたDNA上で行った。 HCM関連JPH2変異は免疫細胞化学、細胞の形態計測測定、生細胞共カルシウムイメージングを用いた設計と機能的に特徴付けられた。三新たなHCM-感受性突然変異：S101R、Y141HとS165Fは、キーの機能ドメインに局在する、HCMと388分の3とは無関係の患者で発見され、1000エスニック整合基準対立遺伝子に存在しなかった。機能的には、それぞれの人間の突然変異は、（i）タンパク質の細胞内カルシウムシグナル伝達におけるjunctophilin-2と、（ii）摂動の再編、及び（iii）著しい心筋細胞肥大を引き起こした。分子と機能的な証拠が不良junctophilin-2の関与が、カルシウムは、HCMのための新たな病原性のメカニズムとして、シグナリングとJPH2の遺伝的欠陥に関連付けられた最初のヒトの疾患として、HCMを確立し、破壊した。そのような拡張型心筋症などの他の心筋症に対する感受性があるかどうか、JPH2ワラント調査の突然変異によって授与することができます。
TRICチャネルは細胞内ストアのCa2 +ハンドリングに必須である
細胞のシグナル伝達は、効率的なCa2 +のCa2 +放出チャネルを介して細胞内ストアからの動員だけでなく、Ca2 +放出によって生成される一時的な負電位のバランスをとるために筋/小胞体膜を通過するイオンのカウンターの動きを予測する必要があります。推定される対イオンチャネルの分子識別は不明であるのに対し、Ca2 +放出チャネルは、15年以上前にクローニングした。ここでは、差動動物の細胞型における細胞内貯蔵上に発現されている2つのTRIC（三量体の細胞内陽イオン）チャネルのサブタイプが報告されます。 TRICサブタイプは、弾丸のような構造を持つ3つの提案された膜貫通セグメント、およびフォームのホモ三量体が含まれています。 TRIC準備を精製した電気生理学的測定は、一価陽イオン選択性チャネルを識別します。胚性心不全に苦しんでTRIC-ノックアウトマウスでは、変異体心筋細胞は、細胞内Ca2 +ハンドリングに重度の障害を示しています。 TRIC欠乏骨格筋筋小胞体は減少K +透過性と同様に、変更されたCa2 + 'スパーク'シグナリングおよび電圧によって誘発されるCa2 +放出を示しています。従って、TRICチャネルは細胞内ストアからのCa2 +放出に同期機能カウンターイオンチャネルとして機能する可能性があります。
テールアンカーBfl1のドメインとHCCS1ターゲットミトコンドリア膜透過性は、アポトーシスを誘導する
多くのBCL2ファミリーのタンパク質は、それらのC末端テールアンカードメインが細胞膜をターゲットとしています。 Bfl1は抗とアポトーシスの両方の活動との双方向機能のBCL2ファミリータンパク質であり、両親媒性の尾部アンカーペプチド（ATAP、残基147から175）が含まれているユニークな特性を持つています。ここでは、ATAPはミトコンドリアに特異的にターゲット、およびBaxやBakのを必要としないカスパーゼ依存性アポトーシスを誘導することを示している。突然変異誘発研究では、ATAPの配列に隣接するリジン残基がミトコンドリア膜へのペプチドの標的に関与し、ATAPの両親媒性の性質に寄与する荷電残基は、そのアポトーシス機能に重要になっていることを明らかにした。 ATAPシーケンスは、ATAPの近くに追加のミトコンドリア標的シグナル（MTS）が含まれている別の腫瘍抑制遺伝子、HCCS1、存在しています。我々は、ATAPとMTSの両方が癌細胞の治療に細胞死を誘導する治療用ペプチドとして使用することができることを提案する。
TACE の膜貫通ドメインは、外部ドメイン蛋白質を放出を調節します。
多数の膜タンパク質は、彼ら ectodomains のリリースを引き起こす腫瘍壊死因子-α 変換酵素によって （TACE） 裂かです。アダム （disintegrin と金属プロテアーゼ ドメイン） の家族の一員、TACE には外部ドメインを流す役割がまだ完全に解決されるいくつかの無触媒ドメインが含まれています。ここでは、我々 分子工学と機能解析を結合することにより TACE の膜貫通ドメイン (TM) の機能を探検しました。細胞膜には一種 (GPI) によって固定されている無料の TM TACE コンストラクト-l-セレクチンの細胞欠けている内因性 TACE 活動およびバインディング ポリペプチド放出成長因子-α (TGF-α）、腫瘍壊死因子-α (TNF-α) の変換の復元に失敗しました。プロラクチン受容体または血小板由来増殖因子受容体 （ⅱ 相試験） の持つ TACE TM の置換はまた TGF-α の脱落が、TNF-α、L-セレクチンの開裂に及ぼす影響はなかったの深刻な損失で起因しました。TM TGF-α での置換と l-セレクチンの TGF-α のプロラクチン受容体 TM と ⅱ 相試験を運んで TACE 変異によって放出が有効。一緒に取られて、私達の観察は、TACE のアンカレッジ TM を通じての脂質二重膜に効率的な胸の谷間は基板の広いスペクトルのため必要であることと TACE TM のアミノ酸シーケンス TACE 基板間規制の特異性では、役割を果たすことを示唆しています。
Baxの過剰発現は、前立腺癌細胞におけるストア作動性カルシウムエントリのダウンレギュレーションを誘導する
ストア作動性Ca2 +の細胞外カルシウムの間にチャネル制御ホメオスタシス+貯水池と細胞内Ca2 +貯蔵および前立腺上皮細胞など、幅広い分野でアポトーシスに重要な役割を果たしている。最近の研究では、アンドロゲン非依存性前立腺癌の取得アポトーシス耐性の性質がストア作動性Ca2 +流入（SOCE）の機能低下に関連付けられていることが示されている。この研究は、前立腺癌におけるアポトーシスシグナル伝達カスケードにおけるBaxおよびSOCE間の機能的相互作用を検討した。我々の以前の調査結果は、NRP-154、アンドロゲン非依存性前立腺癌細胞株は、アポトーシスを経ることなく、外因性Baxの過剰発現を維持することができることを示している。ここでは、NRP-154細胞ではBaxの持続的な過剰発現を示すSOCEのダウンレギュレーションにつながると小胞体のCa2 +の内部ストレージを減少させた。縮小SOCEは、細胞生存のための適応機構を表すかもしれませんが、潜在的な状態にあるBaxのレベルはTGF-βとタプシガルギン誘導性アポトーシスにNRP-154細胞の感受性を高めるに増加した。この強化されたアポトーシスは、2 aminoethoxydiphenylホウ酸（2-APB）、SOCEの阻害剤によって減少またはSOCEが部分的にしか活性化される条件の下で反転させることができます。我々の結果は、前立腺癌のアポトーシスにおけるBaxおよびSOCE間の機能的相互作用を実証し、この相互作用を改善する前立腺癌の治療の意味を持つという概念をサポートしています。
有機アニオントランスポーターOAT1は、ダイナミンとクラスリン依存性経路を介して構成的およびプロテインキナーゼC調節人身売買を受ける
有機アニオントランスポーター1（OAT1）は、環境毒素や臨床的に重要な薬の多様な配列のボディ処分を仲介する。したがって、このトランスポーターの調節を理解することは深遠な臨床的な意義を持っています。我々は以前OAT1活動は速度論的にトランスポーターの基質親和性K（m）を大幅に変更せずに最大輸送速度V（最大）の減少として明らかにしたプロテインキナーゼC（PKC）の活性化によってダウンレギュレートされたことを示している。現在の研究では、OAT1は、恒常的に内在化および細胞膜にリサイクルすることが認められ、PKC活性化はOAT1リサイクルに影響を与えることなく、OAT1ナリゼーションを加速させた。我々はさらにOAT1発現細胞にコンカナバリンA、細胞からのK（+）の枯渇や、ダイナミン-2またはEps15のドミナントネガティブ変異体のトランスフェクションした細胞を、すべてのブロックのクラスリン依存性エンドサイトーシス経路の処理を示した、大幅に構成およびPKC調節OAT1内在化をブロックされています。我々は最終的にOAT1は、細胞表面で、トランスフェリン、クラスリン依存性エンドサイトーシスのマーカーと共局在とEEA1陽性の早期エンドソームことを示した。一緒に、我々の知見は、細胞膜とリサイクルの間に（i）のOAT1恒常的にトラフィックがエンドソームことを初めて実証し、（ii）PKCの活性化は既に存在しOAT1の人身売買を変更することにより、OAT1の活性をダウンレギュレートし、（iii）OAT1の内在化は、を介して部分的に発生します。ダイナミンとクラスリン依存性経路。
MG53は、筋細胞膜の出芽とエキソサイトーシスを調節する
膜のリサイクルとリモデリングは、筋形成時に細胞融合イベントを含む複数の細胞機能に貢献しています。我々はMG53という三モチーフ（TRIM72）ファミリーメンバーのタンパク質を同定し、横紋筋における膜融合とエキソサイトーシスの動的なプロセスを仲介する役割を定義しています。 MG53は、アミノ末端およびカルボキシル末端のSPRYモチーフでTRIMモチーフを含む筋特異的蛋白質である。培養筋芽細胞に緑色蛍光タンパク質-MG53融合構築物の生細胞イメージングもののMG53は、それがしっかりと細胞内小胞と筋線維膜に関連付けられていない膜貫通セグメントが含まれていないことを示した。 MG53強化された小胞輸送の過剰発現および筋線維膜から出芽MG53の発現を妨げ筋芽細胞の分化のRNA干渉媒介性ノックダウン。共発現の研究では、MG53活動がカベオリン3の機能的相互作用によって調節されていることが示された。我々のデータは、横紋筋における膜輸送との融合を調節するTRIMファミリー蛋白質の新しい機能を明らかにした。
細胞膜修復機構のMG53核形成·アセンブリー
ダイナミック膜の修復とリモデリングは細胞の整合性とを仲介する効率的な細胞機能を維持する元素のプロセスです。ここでは、MG53、筋肉特有の三モチーフファミリータンパク質（TRIM72）は、筋線維膜修復機構の構成要素であると報告している。 MG53は、細胞内小胞に関連付けるホスファチジルセリンと対話することへのトラフィックと筋線維鞘の膜と融合。欠陥のある細胞膜修復能力に関連付けられているMG53ショー進行性筋疾患の減少、運動能力の場合はnullマウス。筋線維膜の損傷は、損傷部位にMG53を含む小胞の動員、その結果、細胞外の酸化環境とMG53オリゴマーのエントリにつながります。小転した後、細胞外Caのエントリ（2 +）は、膜を再シールする小胞の融合を容易にします。我々のデータは、細胞内小胞トランスロケーションとCa（2 +）依存性膜融合は別個の細胞膜損傷の修復に関与する手順と、そのMG53が酸化依存的に細胞膜修復機構の組立を開始することがあることを示します。
Baxのアミノ末端ペプチドは、前立腺癌細胞のアポトーシスを強化するために細胞内Ca2 +ホメオスタシスを乱す
アポトーシスの間に、アミノ末端のBaxのタンパク質分解的切断は約18 kDaの切り捨てバックス（p18Bax）と約3 kDaの（p3Bax）のアミノ末端ペプチドを生成します。一方、広範な研究はほとんどがアポトーシスでp3Baxの機能について知られているが、p18Baxはフルレングスバックス（p21Bax）のそれ以上強化されたアポトーシス誘導機能を有するBH3タンパク質のように振る舞うことが示されている。我々は以前バックスとCa2 +はアポトーシスシグナルを増幅することで相乗的な役割を果たすことが示されていると、そのストア作動性Ca2 +流入（SOCE）が前立腺癌細胞におけるBaxを介するアポトーシスに貢献しています。ここでは、p3Baxはカルシウムの調節に貢献することができるかどうかをテストする+ NRP-154細胞は、腫瘍形成能力を有する前立腺上皮細胞株への組換えp3Baxの配信を容易にするために、膜透過性ペプチドを使用してアポトーシスの間、合図。我々は、人間のimmunodefficiencyウイルス転写タンパク質のアクチベーター（TAT）p3Bax融合ペプチドは、NRP-154細胞におけるタプシガルギン誘導性アポトーシスを高めるSOCE活動を高めると、イノシトール1,4,5 - 三リン酸に敏感な細胞内Ca2 +ストアを増やすことができますを見つける。我々のデータは、p3Baxが細胞外カルシウムのエントリを調節することができることを示しています+したがって、前立腺癌細胞のアポトーシスの増幅を制御している。
生産性の高いクラミジア ‐ トラコマティス鼡径リンパ肉腫 434 感染細胞では、拡張現実感または Autophagic 活動不活化します。
オートファジー細胞成分の低下につながる真核生物の細胞の活動は、成長のニッチを義務づける細胞内細菌コクシエラ顕著と同様に通性細胞内細菌に対する防御機構として機能します。我々 はここ ％30 の細胞内細菌の病原体のクラミジア ‐ トラコマティス鼡径リンパ肉腫を強くクラミジア発達サイクル （感染後 24 h） の途中でオートファジー誘導を示す時間点と最大レベルですが低の全体的クラミジア代謝 （8 h） の前に初期段階ないクラミジア レプリケーションの。オートファジー誘導熱と UV 不活化した小学校体 (EBs、クラミジアの伝染性形式)、または接種から EBs 接種前に削除されていた細胞で明らかではなかった。クロラムフェニ コールとクラミジア開発ブロックも感染 EBs と感染細胞でオートファジー誘導を防止しました。それは、オートファジー代謝ストレス帰結クラミジア レプリケーションへの応答で主にアクティブになりますが表示されます。ただし、オートファジー欠陥 ATG5(-/-) 細胞はオートファジー熟練 ATG5(+/+) 細胞として効率的にクラミジアの開発をサポートしました。
2 型糖尿病の自己抗体はストレス繊維形成と内皮細胞のアポトーシスを誘発します。
黄斑浮腫視覚障害に貢献し、蛋白尿タイプ 2 真性糖尿病の成人の心血管死亡率の増加に関連付けられています。これらの微小血管合併症は、その因果関係を完全に理解されていない血漿蛋白の増加の毛細血管漏出から結果します。
NAADP 2つの細孔チャンネルを通して酸性オルガネラからカルシウムを動員
のCa（2 +）は細胞内ストアからの動員は、イノシトール-1,4,5 - 三リン酸（INSP（3））、サイクリックADPリボース、ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチドリン酸（することにより、哺乳類細胞中で、規制されている重要な細胞シグナル伝達プロセスを表しますNAADP）。 INSP（3）とサイクリックADPリボースは、INSP（3）とリアノジン受容体（INSP（3）RsとRyRs）の活性化により小胞体/小胞体ストアからのCa放出（2 +）を引き起こす。証拠はそのNAADPは、リソソーム関連の酸性の区画からのCa（2 +）を動員して示していますが、これとは対照的に、NAADPによって標的細胞内の店舗やNAADP受容体の分子のアイデンティティの性質は、まだ議論の余地がある。ここでは、発現されたとき二細孔チャンネル（TPCS）はリソソーム膜上に人間のTPC1（またTPCN1として知られています）とチキンTPC3（TPCN3）エンドソーム膜上に発現していると、人間のTPC2（TPCN2）で、NAADP受容体のファミリーを構成することを示しているHEK293細胞インチその後INSPによるCa（2 +）誘発Ca（2 +）放出（3）で増幅され、リソソーム関連の店からTPC2ショーに高い親和性NAADP結合に富む膜、TPC2支えるNAADP誘発Ca（2 +）のリリースサインインをしてください。 NAADPへの応答は、リソソームプロトン勾配を破壊することによってとTPC2式を切除することにより廃止が、小胞体のCa（2 +）の店舗を破壊したり、INSP（3）Rを遮断することによってのみ減衰であった。したがって、TPCは筋/小胞体を経由してさらにCa（2 +）の信号をトリガすることができ酸性オルガネラから、そのリリースのCa（2 +）NAADP受容体を形成します。 TPCはしたがって、動物細胞におけるCa（2 +）シグナルの調節と組織の新たな洞察を提供し、NAADPの生理的役割についての我々の理解を進めていきます。
電圧電位依存性 K + チャネルのリン酸化の自動連想学習制御します。
ここでは、後生動物の線虫行動学習制御で動作する新しいに於いてチャネル キナーゼ複合特性を示します。このチャネル KHT 1 吹き替えの細孔形成サブユニットので構成されます （73% 相同） 人間 Kv3.1 とキナーゼ活性を示すアクセサリーのサブユニット MPS 1。遺伝的， 生化学的および電気生理学的証拠を示す KHT 1 と MPS 1 in vitro 複合体を形成、ネイティブの機械刺激受容 PLM ニューロンとその KHT 1 MPS 1 のキナーゼ作業用基板です。行動の分析をさらには、MPS 1 のキナーゼ作業が反復の機械的刺激に馴化のために特に必要があることを示しています。したがって、非アクティブの MPS 1 バリアント (D178N) を軸受ワームは、通常、体にタッチに対する応答が、ペトリ皿の側にタップなどの反復的な機械的刺激を慣らすのないです。したがって、KHT 1 MPS 1 のリン酸化状態ではリンクに異なる行動応答のようです。非リン酸化状態でチャネル タッチ ニューロンの正常な機能のために必要です。自動リン酸化状態ではチャネル機械的刺激への神経細胞の適応を誘発する行為します。一緒に取られて、これらのデータは電気シグナル伝達神経系での動的な規制の新しいメカニズムを確立します。
トロポミオシン アイソ フォーム 5 抗体と補体 Colonocytes 潰瘍性大腸炎の換散を誘発します。
トロポミオシン (Tm) マイクロ細胞骨格フィラメント蛋白質すべて真核生物の細胞内に存在であります。人間の TM アイソ 5 (hTM5) 大腸上皮細胞で優勢なアイソ フォームです。HTM5 に対する抗体は血清中および潰瘍性大腸炎 (UC) の粘膜がないクローン病 （CD） で発見されます。我々 は抗 hTM5 抗体が病原性であるかどうかを調べた。
規制の人間有機アニオントランスポーター 4 プロテインキナーゼ C と NHERF 1: トランスポーターのエンドサイトーシスを変えます。
人間有機アニオントランスポーター 4 (hOAT4) の臨床的に重要な薬物のボディ処分で重要な役割を果たす有機アニオントランスポーター群の家族に属しています。我々 は以前 hOAT4 の活動がダウン規制 PKC の活性化によって、アップ規制 PDZ タンパク質 NHERF 1 によってであったことを示しています。ここでは、このような規制の基になるメカニズムを調査しました。
相同組み換えと非相同末端結合を介して DNA 損傷の修復におけるカベオリン 1 の関与。
カベオリン-1 （Cav-1), カベオラの主要成分はシグナル分子数と相互作用する 21 24 kDa 積分膜蛋白質であります。足場蛋白として作用して、Cav 1 は発癌性の変容と腫瘍形成、およびがんの浸潤・転移を含む様々 な病態生理学的および生理学的プロセスの調節に重要な役割を果たします。
TBHQによって誘発されるHO-1発現は、HO-1のプロモーター領域にエンハンサーおよびポリメラーゼIIにNRF2結合の制御を通じて、カルシウムによって媒介される
NRF2媒介解毒/抗酸化酵素の誘導は、癌予防のための効果的な戦略である。本研究の目的は、カルシウムの役割を検討したの[Ca（2 +）] NRF2下流の標的遺伝子ヘムオキシゲナーゼのよく知られているフェノール化学予防化合物ターシャリーブチルヒドロキノン（TBHQ）Nrf2の活性化と誘導を調節する（HO- 1）。 TBHQは、単独でNRF2核局在化と用量依存的に誘導されるHO-1 mRNAおよびタンパク質の発現を引き起こした。 RT-PCRとウエスタンブロット法を用いて、HO-1のTBHQ誘発性の転写は、Ca（2 +）依存性であることを示した。のキレートの[Ca（2 +）]（EXT）または〔Ca（2 +）]（イントラ）EGTAまたはBAPTA減衰TBHQによって誘発されるHO-1による。の阻害剤のTBHQのCotreatmentの[Ca（2 +）] - 敏感なプロテインキナーゼCとcamodulinキナーゼはHO-1誘導を減衰しませんでした。 TBHQによって誘導されるNrf2の核内移行は、EGTAまたはBAPTAの処理によって影響を受けませんでした。さらに、EGTAとBAPTA治療はCREBの基底核のリン酸化を減少し、HO-1遺伝子のプロモーターに結合するエンハンサーに結合するだけでなく、ポリメラーゼII TBHQ誘起NRF2-CBP結合およびNRF2の減少となりました。上位の[Ca（2 +）]の変調[はCa（2 +）]（int）をアジュバントとして使用される可能性があることを示すin vitroおよびin vivoの両方で（EXT）拡張HO-1誘導と組み合わせて、さらに、TBHQ化学予防剤の有効性を向上させます。一緒に、我々の結果は、TBHQ誘発性酸化ストレスを介したNRF2転座に加えて、TBHQによってHO-1誘導はまた、Caのシリーズ（2 +）調節のメカニズムに依存するように表示されていることが示された。
ジロイシンソーティング ロール式と関数の人間有機アニオン輸送体 1 (hOAT1)。
人間有機アニオン輸送体 hOAT1 環境毒素と臨床的に重要な薬の抗腫瘍薬、抗生物質、anti-hypertensives、抗 hiv 治療薬、抗炎症薬などの体の処分で重要な役割を果たしています。現在の研究では, hOAT1 式のアミノ末端とトランスポーターの機能でジロイシンソーティング (L6L7) の役割を調べた。同時にアラニン (A) L6L7 を置換します。結果変異トランスポーター L6A/L7A は、細胞表面でその表現の完全な損失のための輸送活性を示さなかった。L6A/L7A の表面表現のような損失は、80 kDa の成熟したフォームと、総セル lysates の突然変異体のトランスポーターの 60 kDa の未熟な形式の劇的な減少の完全な損失と一致していた。これらの細胞のライソゾーム インヒビターの治療は、変異のトランスポーター プロテアソーム経路を通して分解されたことが示唆された突然変異のトランスポーターの発現に及ぼす影響はみられなかったプロテアソーム阻害剤と L6A/L7A を表現する細胞の治療 hOAT1 の未熟な形式が、その成熟したフォームではなく、大幅な増加の結果。小胞体 (ER) 輸送体の変異の蓄積はカルネキシン ER マーカーと L6L7 の coimmunolocalization によって確認されました。さらに、ナトリウム 4-フェニル酪酸 (4PBA) と 2 つの化学シャペロン グリセロールと L6A/L7A を表現する細胞の治療突然変異体のトランスポーターの未熟な形式の出口、小胞体から昇格させることはありません。我々 のデータは、L6L7 が安定性と小胞体輸出 hOAT1 のために重要な示唆されます。
クラスターの微小血管合併症を有する成人型糖尿病のサブセットの自己抗体から抗血管内皮と Anti-neuronal 効果。
糖尿病神経障害の痛みを伴う、黄斑症、腎症の効果とのサブセットから自己抗体のニューロンをテストするには。
トランスジェニックマウスにおける遺伝子発現の組織特異的および誘導制御のための多彩なシングルプラスミドシステム
我々は、マウスの遺伝子発現の組織特異的および誘導制御のための新規なトランスジェニックシステムを記述します。システムが中断レポーターカセットは、Creリコンビナーゼにより切り出されるまで機能しないまま、短期ヘアピンRNA（shRNA）の転写を制御するテトラサイクリン応答性CMVプロモーターを採用しています。 shRNAの内でダイサーとDroshaのRNase処理部位の挿入は、siRNAの生成が効率的に標的遺伝子をノックダウンすることができます。組織特異的shRNA発現は、Creの組織特異的発現との適切な誘導マウスの使用によって達成されています。我々はjunctophilins（JPS）、筋肉内シグナル伝達、膜の微細構造とCa（2 +）の維持に不可欠な遺伝子の発現を調節するためにこのシステムを適用した。 JPSの誘導と可逆的ノックダウンはDox非含有水をマウスに供給することによって達成されながら、JPのmRNAに対するshRNAの骨格筋特異的発現トランスジェニックマウスは、ドキシサイクリン（DOX）による治療の前にJP発現の基底の変化を表示されません。筋肉の発達と機能のJPSの重要な役割を持つ一貫したJPS異常な接合膜構造につながったとCa（2 +）は大人の筋線維のシグナリングのドキシサイクリン誘導性ノックダウン。このトランスジェニックアプローチは、このように実行可能なモデル動物の生理学的遺伝子機能を解明するための汎用性の高いシステムを提供し、誘導し、多くの異なる組織の可逆的遺伝子ノックダウンまたは遺伝子の過剰発現のために適用することができます。
ストア作動性Ca（2 +）エントリ（SOCE）は、高齢者の骨格筋でヤングで正常骨格筋収縮に貢献しません
単独で筋萎縮は、正常な老化の間に骨格筋の収縮力の大幅な下落を説明するには不十分である。骨格筋の老化に収縮力を減少させた一つの要因は、反復的な筋収縮を可能にするために十分な空きのCa（2 +）を使用せずに、興奮収縮（EC）の結合が損なわれる可能性があり、骨格筋は自然に弱くなる。生物物理学的アプローチを用いて、我々は以前にそのストア作動性Ca（2 +）エントリ（SOCE）は高齢者の骨格筋ではなく、若い人たちに妥協されることが示された。重要なものの、これまでの研究から欠落しているコンポーネントがSOCE機能が老化の間に収縮機能と相関しているかどうかではありません。ここでは、老化時の骨格筋の収縮機能に細胞外のCa（2 +）の寄与をテストします。まず、SOCEのSRのCa（2 +）放出チャネルを介したCa（2 +）のリリースとアクティベーションの間の結合等級を示しています。 SOCEの阻害は、特に高頻度刺激では、若い骨格筋の収縮力の大幅な削減を生産し、そのような効果は、高齢者の骨格筋で完全に欠席した。我々のデータは、SOCEは、若い健康な骨格筋の正常な生理的収縮反応に寄与しているとSOCEを通じて、不良細胞外Ca（2 +）のエントリが高齢者の骨格筋の減少収縮力特性に寄与することを示しています。
Ca2 +シグナル伝達筋肉のコントロールと心臓の細胞の分子構造
Ca2 +の骨格や心臓筋肉のシグナル伝達が細胞内小器官の筋線維膜とCa2 +放出機構におけるシグナル伝達分子間のクロストークを含む双方向のプロセスです。筋線維膜と筋小胞体（SR）との間の接合膜構造の維持は生理学的プロセスの様々な活性化につながる、SRからのCa2 +の放出に筋鞘に到着した活動電位に変換するためのフレームワークを提供します。カルシウムの活性依存性の変化+ SR内部ストレージ生理学と病態におけるCa 2 +恒常性の維持に重要な役割を果たしている筋線維膜上にストア作動性Ca2 +チャネル（SOC）の活性化のための逆行性信号を提供します。過去30年間の研究の進捗状況は、Ca2 +の制御筋肉や心臓血管生理学のシグナリングのための細胞および分子メカニズムの理解を進めていました。生理的に接合膜の枠組みの形成のための筋線維膜にSR膜をつなぐ "接着剤"、mitsugumin29限りjunctophilin：ここでは、骨格筋および心筋細胞の接合膜複合体に格納されています3つの主要な分子の機能をまとめる筋特異的協調カルシウムを維持するために貢献しシナプトフィジンファミリーのタンパク質は+骨格筋でのシグナリング、およびSRからのCa2 +放出の迅速なプロセスの間にカウンターイオン電流を提供するSR膜上に新たな陽イオン選択的チャネルとしてTRIC。
クラミジア感染によってホスト オートファジーと空胞 ATPase 軸受細胞小器官の規制。
間違いなく最も成功した寄生虫として、クラミジア真核宿主細胞の液胞内のレプリケートを義務づける細胞内細菌であります。クラミジアの液胞に防衛細胞オルガネラ リソソームと融合ないです。我々 は以前クラミジア感染マーカー オートファジー, ライソゾーム機能を必要とする、生来の抗菌活性の増加することを示した。ただし、その p62, リソソームでの劣化オートファジー タンパク質どちらかクラミジア感染、人間の上皮, マウスの芽とマウスのマクロファージ細胞株で変更または増加残ってここで提示された作業を示します。また、分析 3 つのライソゾーム酵素活性に及ぼすクラミジア感染したマクロファージで減少しました。バフィロマイシン A1 （BafA） ライソゾームの機能に必要な空胞 ATPase (vATPase) の特異的阻害剤増加人間の病原体のクラミジア ‐ トラコマティス (L2) 野生型マウス線維芽細胞とマクロファージの成長がオートファジー欠損 ATG5(-/-) 線維芽細胞の成長を阻害します。BafA のみわずかな阻害またはない L2 成長複数の人間の性器上皮細胞線に及ぼす影響を展示しました。L2 とは対照的マウス病原体クラミジア muridarum (MoPn) に一貫して BafA によって、種の起源とオートファジーの状態に関係なくすべての細胞株で抑制された.最後に、L2、ない MoPn より効率的に野生型細胞における ATG5(-/-) の細胞よりもで育った。クラミジア感染症を制御する vATPase 軸受の細胞小器官の 2 種類があることが示唆された： 1 つクラミジア感染細胞人工的にホストの種に適応されていない特定のクラミジア感染しているとき、他オートファジーを通じての防御な役割を再生しながらをサポートします。
非筋肉ミオシンIIAはMG53介在細胞膜修復のために小胞輸送を容易に
細胞膜損傷の修復には、パッチ形成を促進する膜傷害部位に細胞内小胞の協調運動を含む細胞の恒常性と整合性の維持に不可欠なメカニズムです。我々はこれまでに細胞膜修復機構の必須成分としてMG53を同定した。 MG53ため、膜の損傷部位に移行することが細胞内小胞では、モータータンパク質が関与する必要があります。ここでは、非筋肉ミオシンIIA型（NM-IIA）は細胞膜の修復中に小胞輸送を調節するためMG53と相互作用することを示している。これらの細胞におけるNM-IIA式の救助は、MG53媒介膜修復を復元することができます一方、NM-IIA式の欠損細胞では、MG53は、急性傷害部位に転位することはできません。妥協細胞膜の修復はNM-IIA式のRNAiによるノックダウンと細胞で観察された、またはNM-IIA運動機能の薬理学的変化を以下の通りです。一緒に、我々のデータは、MG53介在細胞膜repair.-LIN、P.、朱、H.、蔡、C.、王、X.、曹操、Cの間小胞輸送を促進する主要な細胞骨格モータータンパク質としてNM-IIAを明らかに、シャオ、R.、パン、Z.、Weisleder、N.、竹島、H.、馬、J.非筋肉ミオシンIIAはMG53介在細胞膜修復のための小胞輸送を容易にします。
