Summary
一种技术是植入四个描述
Abstract
从主要神经和肌肉的录制
Protocol
1。电极的制作
- 要创建的电极，用剪刀切了一块搪瓷涂层0.001英寸直径的不锈钢丝约2英尺长。每个线端连接一个小球的腻子，折了一半的线，和自旋创建一个双绞线的两端，称为差分电极。
- 胶带两端的导线，以防止解开。四个差分电极，使用不同的颜色为每个用于识别目的的差分电极（图1A）的磁带。
- 在另一端的差分电极一起离开两英寸，两个扭无捻一端和1英寸。重复其余的差分电极对（图1B）。
- 扭在一起，使两个差分电极两套确保两端保持无捻。托起电极装配和家庭硅酮胶，适用于四个差分电极交界离开两端自由。恒和让胶干燥至少4小时（图1C）。
- 隔离分支，奠定一个单位，可移动，表面上的电极装配了一块木头。风扇的两端，并用胶带固定。使用的塑料小片提升，只是在它分支的电极组件，并确保与磁带。
- 在解剖显微镜下，使用硅酮胶钳大衣分行。 1英寸长的两端，将里面的动物，所以他们应该有一个非常薄外套的胶水。让胶干燥至少3个小时。
- 一个差分电极1英寸长的结束，缩短到两厘米。在每根导线，取出硅胶和搪瓷1厘米。卷曲成一个记录挂钩裸线。弯曲线和离钩，这将作为地线。重复余下的三个电极。
- 选择一个2英寸的四个电极。使用钳刮硅和搪瓷2线，露出光秃秃的不锈钢丝1厘米。焊接金两条线的每个接头。使用一块实验室磁带，以确保年底和保持地面和录音引脚之间的分离。重复余下的三个电极。
- 连接电缆的硅酮胶1 - 2cm的球，约1.5英寸钩端锚内动物的电极。晾干至少一小时（图1D）。
图1电极的制造。 （一）单一的差分电极组成一个折叠和双绞线，其两端用胶带固定。 （b）两个差电极绞在一起，留在两端无捻空间。应使用不同颜色的磁带或另一个标志，以确定两端。 （三）所有四个差分电极组合成一个单一的电极形成一个单独的分支，在每年年底个人电极标有不同颜色的胶带，单电缆的装配。 （四）最终形成的电极组件。在左边，有卷曲的录音和每个差分电极接地线的挂钩。在右侧，金连接器的针脚已被焊接的导线连接到放大器。硅酮胶锚球也被放在对大会的左侧。
2。植入动物的制备
- 选择健康的动物，重约350 -450克。响应小块的海藻，动物应每隔3至5秒生成的叮咬。电极植入手术应采取大约一个小时。
- 麻醉的动物，30％W / V等渗MgCl 2的注入。为了防止损失的血淋巴和MgCl 2的 ，注射部位可以涂在强力胶，然后取出针。
图2示意图固定电极植入的动物是如何，切口的位置（一个栏表示） 。 - 麻醉动物在解剖它的脚托盘下来。面对动物的头，鳃区转移到你的左等动物的部分在其一侧，扶着走。牵制前的触角（图2）。
- 放置在托盘上的阶段，在解剖显微镜。螺旋桨在约20度角，托盘垫高头部和收集血淋巴在尾部，远离切口。
- 使用夹层剪刀，一个切口开始略有你的眼点的权利，并延长1至1.5厘米前方。使用托盘的边缘，按住切口开放拉钩（图2，注意轮纹病表明切口附近的酒吧）。
- 要揭露颊质量，使用forceps到解除清晰膜下方的皮肤，并用剪刀削减主要切口相匹配的开放。塔克拉钩膜边缘。
3。电极植入
- 将一个显微电极装配和移动到动物的切口。
- radular神经是最困难的访问，首先要走近。有两个选项访问radular神经。
- 第一个选项，这是可取的，是寻找下颊神经节之间BN1型和BN2。如果是可见的radular神经的一个分支，用细尖镊子弯曲成钩解除分支（图3，RN的循环下标为1节）。
- 如果以上的肌肉的radular神经的一个分支，第二个选择是通过旁边的一个小切口在I2基地颊神经节（图3，下方标有2的肌肉RN）的结缔组织访问。在I2切口必须经过两层I2的肌肉。不放的肌肉直钳切口的边缘和使用的钩钳拉出一个护士分公司。
- 钩钳的神经，虽然使用不同的镊子操纵电极上神经钩。
- 使用的显微提高挂钩，使神经远离颊大规模向上抬起，并清除任何其他神经或组织。不要过分紧张的神经。
- 关闭多余的液体用注射器使用一个金擦拭或吸入干电极。水紧张，可能会导致神经崩溃本身，或水封下形成的神经。在这两种情况下，该地区应完全干燥，应用胶之前。
- 应用强力胶小的钩基底部的神经联系是民建联。应用生理盐水或血淋巴中海兔下降到设定的强力胶。当胶水湿都不应移动之间的电线和神经胶块电气连接。
- 再次干钩。混合佳银胶上的冰袋。
- 使用一针应用少量佳银胶尖，完全覆盖任何暴露的钩线，但没有地线。
- 允许胶水设置为5分钟左右，如果它拉离钩部分调整胶水。胶水设置时不再枝与引脚的感动（图4显示了最终的配置）。
- 一旦radular神经电极设置，可以访问的I2肌肉。在BN1型和BN2之间的区域，使用的钩钳，挂钩和2 I2的肌肉带，轻轻向上拉动的乐队分开的肌肉休息。连接电极，使用相同的步骤。
- 2和3颊神经，很容易访问和连接电极具有相同的程序。
- 一旦所有的电极连接，滑动电极装配到动物的硅锚。
- 关闭缝合切口周围的突起电极电缆，里面的动物饲养锚。强力胶针，以确保良好的密封。
- 在另一端电极插入成小块状发泡胶金连接器的提示。返回动物恢复一夜之间充气隔离容器中的主坦克。
图3。被称为颊大规模的海兔喂养仪器图。显示颊神经（BN1，BN2，BN3），radular神经（RN）的退出颊神经节的底部，然后下方的肌肉掉价，和电极连接的I2肌肉的位置。
图4。附着到神经（或肌肉）和地方粘单电极的示意图。请注意，钩卷曲绝缘地区与神经（或肌肉），挂靠在与强力胶的地方，直接接触，从流体介质使用佳- SIL和电气绝缘。还要注意deinsulated接地电极尖端接触到流体介质。
4。记录
- 在加气的容器中驯化的动物，而至少1.5小时的录音设备。而动物acclimating验证，所有电极的工作和噪音水平低，监测信号。
- 使用一台摄像机，记录摄食行为，而使用电脑从神经和肌肉电极记录信号。而它同时Axosc额外的通道在电脑上记录使用方波信号，控制在相机视图中的一个数字计数器同步的视频和电极录音OPE。
- 取食行为引起莫顿和Chiel 1993年中所描述的技术。
虽然无脊椎动物不需要由一个机构使用动物及护理委员会的正式批准，我们已确保的海兔所有的治疗，最大限度地减少伤害和痛苦的动物，并完成所有的手术技巧，而动物完全麻醉。
代表性的成果
图5（一）从肌肉（量角器肌肉I2）的四通道同时录音，并从三个颊神经（radular神经，护士，颊神经2，BN2，颊神经3，BN3）在一个吞咽反应。 （b）从静止画面同步视频录制的自由表现的动物，因为它吞下一个预切紫菜条（宽0.5厘米），已在0.5厘米的白色条纹间隔标记，因此，它的运动可以很容易地可视化动物饲料。
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Discussion
这些录音成功的一个关键的创新是结合成一个电缆的电极。已使用过的两个电极录音，而是扩大到四个独立的电极在手术后粘连的形成，往往无法正常进食运动动物。结合成一个电缆的电极，降低了大部分内的动物，从而降低免疫反应的电极，使动物更自由地移动。
此过程中的创新等方面的强力胶和佳- SIL的组合，连接电极的神经或肌肉。在此之前，只有强力胶使用，但两个胶水的组合更可靠，并可以持续数天的时间比强力胶，它打破了在3天左右下降时，接触到水。
我们已经表明，它有可能录制或个人识别的神经元细胞体的刺激外电极植入完好，动物行为[沃曼和Chiel，1995年;路等，2008]。我们在本文中所描述的多个电极技术，因此可以用于同时记录和操作的4个不同的鉴定神经元或神经细胞，肌肉和神经的组合的活动。
我们一直在使用的技术与四个电极，但很可能会为一些额外的电极。此外，在一份未公开的的实验，这些电极是用来记录pudental大鼠神经，表明这种技术的某些方面可以在脊椎动物和人类有用。
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Acknowledgments
我们非常感谢来自美国国立卫生研究院（NS047073 HJC）的支持。我们也感谢凯瑟琳凯尔佳柏实，鼓励我们为我们的应用程序中使用它与她的早期实验。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Enamel coated stainless steel wire | California Fine Wire Company | 0.001D, coating h | |
| Household Silicone II Glue | GE Healthcare | ||
| Kwik-Sil Adhesive | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Duro Qwik-Gel superglue | Henkel Corp | ||
| A-M Systems model 1700 amplifier | A-M Systems | Filter settings:100-1000Hz nerves,10-1000Hz I2 muscle | |
| Axoscope 10.1 | Molecular Devices | ||
| Gold Connector Pins | Bulgin | SA3148/1 | |
| Gold Connector Sockets | Bulgin | SA3149/1 |
References
- Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia. J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).
- Morton, D. W., Chiel, H. J. In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia. J Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).
- Warman, E. N., Chiel, H. J. A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes. J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).
- Ye, H., Morton, D. W., Chiel, H. J., J, H. nbsp;Neuromechanics of multifunctionality during rejection in Aplysia californica. J. Neurosci. 26, 10743-10755 (2006).
