स्ट्रेप्टोजोसिन उपचार: टाइप 1 मधुमेह मेलिटस का एक ज़ेब्राफ़िश मॉडल

Overview

इस वीडियो में मधुमेह की जटिलताओं और मेटाबॉलिक मेमोरी के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के लिए दवा स्ट्रेप्टोजोसिन की मदद से टाइप 1 मधुमेह मेलिटस के लिए जेब्राफिश मॉडल बनाने की तकनीक का वर्णन किया गया है।

Protocol

1. मधुमेह मेलिटस, डीएम मछली के साथ ज़ेब्राफिश की पीढ़ी

1. रिकवरी और एनेस्थेटिक पानी की टंकियों दोनों तैयार करें। रिकवरी वाटर सामान्य मछली का पानी है। एनेस्थेटिक पानी के लिए पर्याप्त 2-फेनोक्सीथेनॉल जोड़ें ताकि सामान्य मछली के पानी में 1:1,000 कमजोर पड़ने की प्राप्ति हो।
2. स्ट्रेप्टोजोसिन (एसटीजेड) के 0.3% समाधान (एक धुएं हुड में) तैयार करें 0.09% सोडियम क्लोराइड के 2 मिलीलीटर में एसटीजेड की 6 मिलीग्राम जोड़कर और तुरंत समाधान को बर्फ पर रखें। यह 20 मिनट में लगभग 20 मछली के इंजेक्शन के लिए पर्याप्त इंजेक्शन समाधान प्रदान करेगा। यदि आप 20 मिनट के निशान से अधिक हैं, तो आगे बढ़ने से पहले एक ताजा एसटीजेड समाधान रोकें और बनाएं। नियंत्रण मछली के लिए एक अलग ट्यूब aliquot पर्याप्त खारा समाधान में। एक बार एसटीजेड को घुलनशील कर दिया जाता है तो बाद के सभी चरणों को धूम हुड उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है।
3. एसटीजेड या नियंत्रण समाधान के साथ 27 1/2 गेज सुई से लैस एक आधा सीसी सिरिंज भरें ताकि यह सुनिश्चित किया जा रहे हो कि कोई हवा के बुलबुले न फंसे।
4. एनेस्थेटिक पानी में मछली रखकर प्रत्येक मछली को व्यक्तिगत रूप से एनेस्थेटाइज करें, और तब तक प्रतीक्षा करें जब तक कि उनकी तैराकी गति (1-2 मिनट) समाप्त न हो जाए।
5. एक बार एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद किसी भी अतिरिक्त पानी को अवशोषित करने के लिए मछली को एक कागज तौलिया पर रखें, मछली को वजन नाव में रखें और मछली के द्रव्यमान को मापें।
6. इंजेक्शन के लिए मछली को एक फर्म सतह (पेट्री डिश ढक्कन) पर रखें।
7. वेंट्रल पेरिटोनम के पीछे के पहलू में बेजल पिछले सुई डालने से मछली के पेरिटोनियल गुहा में एसटीजेड या नियंत्रण समाधान इंजेक्ट करें।
8. एसटीजेड के 035 मिलीग्राम/ग्राम (350 मिलीग्राम/किलोग्राम) को प्रत्येक मछली को दिया जाना चाहिए और आवश्यक 0.3% समाधान की मात्रा की गणना निम्नलिखित तरीके से की जा सकती है।
   1. आवश्यक एमजी में एसटीजेड की मात्रा प्राप्त करने के लिए मछली (जी) के द्रव्यमान को 0.35 से गुणा करें।
   2. μl में इंजेक्शन के लिए आवश्यक 0.3% समाधान की मात्रा उपज के लिए ऊपर उत्पन्न उत्पाद को 3 से विभाजित करें।
      नमूना: एक 0.5 ग्राम मछली के लिए: क) 0.5 x 0.35 = 0.175 बी) .0175/3 = 0.058 मिलीलीटर = 58 माइक्रोन।
      एसटीजेड के बिना एक ही मात्रा एक नियंत्रण मछली के लिए इंजेक्शन दिया जाएगा । प्रति मछली द्रव्यमान इंजेक्ट करने के लिए वॉल्यूम के लिए एक शीट उत्पन्न की जानी चाहिए और त्वरित संदर्भ के लिए उपयोग की जानी चाहिए।
9. इंजेक्शन के बाद वसूली पानी की टंकी में मछली जगह है और सामान्य तैराकी गतिविधि के लिए उन्हें निगरानी। एक बार जब यह हासिल हो जाता है तो मछली को एक सामान्य जीवित टैंक में स्थानांतरित कर दिया जाता है जिसे 22 डिग्री सेल्सियस - 24 डिग्री सेल्सियस की कम तापमान सीमा पर बनाए रखा जाता है। हाइपरग्लिशेमिया (मधुमेह मेलिटस, डीएम) के कुशल प्रेरण के लिए यह कम तापमान महत्वपूर्ण है।
10. हालांकि हाइपरग्लाइसेमिया पहले इंजेक्शन के 24 घंटे के भीतर पता चला है, ताकि बहुत उच्च हाइपरग्लाइसेमिया की एक लंबी स्थिति को प्रेरित करने के लिए जेब्राफिश को लगातार इंजेक्शन प्रेरण चरण की आवश्यकता होती है जिसके बाद साप्ताहिक रखरखाव इंजेक्शन नीचे दिखाए जाते हैं।

सप्ताह 1: 3 इंजेक्शन (दिन 1, 3, 5), सप्ताह 2: 1 इंजेक्शन (दिन 12), सप्ताह 3: 1 इंजेक्शन (दिन 19), सप्ताह 4: (दिन 21) ब्याज की परख करते हैं ।

इस बिंदु पर ज़ेब्राफिश को हाइपरग्लाइसेमिया की लंबी स्थिति में माना जाता है और रेटिनोपैथी, नेचुरोपैथी और बिगड़ा हुआ फिन पुनर्जनन की मधुमेह जटिलताओं को प्रदर्शित करता है। इन्हें डीएम मछली के रूप में संदर्भित किया जाता है। इसके अतिरिक्त यदि वांछित मछली साप्ताहिक रखरखाव इंजेक्शन के साथ हाइपरग्लाइसेमिक राज्य में बनाए रखा जा सकता है। इस प्रक्रिया के दौरान लगभग 5% मौत की उम्मीद की जानी चाहिए।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.