Streptozocin Tedavisi: Tip 1 Diabetes Mellitus'un Zebra Balığı Modeli

Overview

Bu video, diyabetik komplikasyonların patofizyolojisini ve metabolik hafızayı incelemek için Streptozocin ilacı yardımıyla Tip 1 diabetes mellitus için bir zebra balığı modeli oluşturma tekniğini açıklar.

Protocol

1. Diabetes mellitus, DM Fish ile Zebra Balığı Üretimi

1. Hem geri kazanım hem de anestezik su depolarını hazırlayın. Geri kazanım suyu normal balık suyudur. Anestezik su için yeterli 2-fenoksyethanol ekleyin, böylece normal balık suyunda 1:1.000 seyreltme elde edilir.
2. 2 ml%0,09 sodyum klorüre 6 mg STZ ekleyerek streptozocin (STZ) %0,3'lük bir çözelti (duman kaputunda) hazırlayın ve çözeltiyi hemen buza yerleştirin. Bu, 20 dakikada yaklaşık 20 balığın enjeksiyonu için yeterli enjeksiyon çözeltisi sağlayacaktır. 20 dakika işaretini aşarsanız, devam etmeden önce durun ve yeni bir STZ çözümü yapın. Ayrı bir tüpte aliquot kontrol balıkları için yeterli tuzlu su çözeltisi. STZ çözündüğünde, sonraki tüm adımlar duman davlumbaz kullanımı gerektirmez.
3. 27 1/2 kalibrelik bir iğne ile donatılmış 1/2 cc'lik bir şırıngayı STZ veya kontrol çözümleriyle doldurarak hava kabarcıklarının sıkışmamasını sağlayın.
4. Balıkları anestezik suya yerleştirerek her balığı ayrı ayrı uyuşturun ve yüzme hareketleri bitene kadar bekleyin (1-2 dk).
5. Uyuşturulduktan sonra, fazla suyu emmek için balığı kısa bir süre kağıt havluya yerleştirin, balıkları tartım teknesine yerleştirin ve balığın kütlesini ölçün.
6. Balığı enjeksiyon için sert bir yüzeye (Petri kabı kapağı) yerleştirin.
7. İğneyi eğimin yanından geçirerek ventral peritonun arka yönüne sokarak STZ veya kontrol çözeltisini balığın periton boşluğuna enjekte edin.
8. Her balığa 0,35 mg/g (350 mg/kg) STZ teslim edilmeli ve gerekli %0,3'lük çözeltinin hacmi aşağıdaki şekilde hesaplanabilir.
   1. Gerekli mg'daki STZ miktarını elde etmek için balık kütlesini (g) 0,35 ile çarpın.
   2. μl enjeksiyon için gerekli% 0.3 çözeltinin hacmini elde etmek için yukarıda üretilen ürünü 3'e bölün.
      Örnek: 0,5 g balık için : a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) .0175/3= 0,058 ml = 58 μl.
      STZ olmadan aynı hacim bir kontrol balığı için enjekte edilirdi. Balık kütlesi başına enjekte edilecek hacimler için bir sayfa oluşturulmalı ve hızlı başvuru için kullanılmalıdır.
9. Enjeksiyondan sonra balıkları geri kazanım su tankına yerleştirin ve normal yüzme aktivitesi için izleyin. Bu elde edildikten sonra balıklar, 22 ° C - 24 ° C'lik azaltılmış sıcaklık aralığında tutulan normal bir yaşam tankına aktarılır. Bu azaltılmış sıcaklık, hiperglisemi (diabetes mellitus, DM) verimli indüksiyonu için kritik öneme sahiptir.
10. Hiperglisemi ilk enjeksiyondan 24 saat sonra tespit edilse de, çok yüksek hiperglisemi uzun süreli bir duruma neden olmak için zebra balığı, aşağıda gösterildiği gibi sık enjeksiyon indüksiyon aşaması ve ardından haftalık bakım enjeksiyonları gerektirir.

1. Hafta: 3 enjeksiyon (Gün 1, 3, 5), Hafta 2: 1 enjeksiyon (Gün 12), Hafta 3: 1 enjeksiyon (Gün 19), Hafta 4: (Gün 21) İlgi analizi gerçekleştirin.

Bu noktada zebra balığının uzun süreli hiperglisemi durumunda olduğu ve retinopati, nefropati ve ayrıca yüzgeç yenilenmesinde bozulmanın diyabetik komplikasyonlarını sergilediği düşünülmektedir. Bunlar DM balığı olarak adlandırılır. Ayrıca istenirse balıklar haftalık bakım enjeksiyonları ile hipergliplik durumda tutulabilir. Bu süreçte yaklaşık %5 ölüm beklenmelidir.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.