Traitement streptophzocine: Un modèle zebrafish de type 1 diabète sucré

Overview

Cette vidéo décrit la technique de création d’un modèle de poisson zèbre pour le diabète sucré de type 1 avec l’aide du médicament Streptozocin, pour étudier la pathophysiologie des complications diabétiques et de la mémoire métabolique.

Protocol

1. Génération de poisson zèbre avec diabète sucré, DM Fish

1. Préparer à la fois la récupération et les réservoirs d’eau anesthésiques. L’eau de récupération est une eau de poisson normale. Pour l’eau anesthésique ajouter suffisamment de 2-phénoxyéthanol de sorte qu’une dilution de 1:1,000 dans l’eau normale des poissons est atteint.
2. Préparer une solution de 0,3 % (dans une hotte de fumée) de streptophzocine (STZ) en ajoutant 6 mg de STZ à 2 ml de chlorure de sodium à 0,09 % et placez immédiatement la solution sur la glace. Cela fournira suffisamment de solution d’injection pour l’injection d’environ 20 poissons en 20 min. Si vous dépassez la barre des 20 minutes, arrêtez-vous et faites une nouvelle solution STZ avant de procéder. Dans un tube séparé aliquot assez solution saline pour contrôler les poissons. Une fois que le STZ est solubilisé toutes les étapes ultérieures ne nécessitent pas l’utilisation du capot de fumée.
3. Remplissez une seringue de 1/2 cc munie d’une aiguille de calibre 27 1/2 avec le STZ ou des solutions de contrôle garantissant qu’aucune bulle d’air n’est emprisonnée.
4. Anesthésier chaque poisson individuellement en plaçant le poisson dans de l’eau anesthésique, et attendre que son mouvement de nage cesse (1-2 min).
5. Une fois anesthésié brièvement placer le poisson sur une serviette en papier pour absorber tout excès d’eau, placer le poisson dans le bateau de peser et mesurer la masse du poisson.
6. Placer le poisson sur une surface ferme (couvercle de boîte de Pétri) pour injection.
7. Injecter le STZ ou la solution de contrôle dans la cavité péritonéale du poisson en insérant l’aiguille au-delà du biseau dans l’aspect postérieur du péritoine ventral.
8. 0,35 mg/g (350 mg/kg) de STZ doit être livré à chaque poisson et le volume de la solution de 0,3 % requise peut être calculé de la manière suivante.
   1. Multipliez la masse de poisson (g) par 0,35 pour produire la quantité de STZ en mg requise.
   2. diviser le produit généré ci-dessus par 3 pour produire le volume de la solution de 0,3% nécessaire à l’injection en μl.
      Échantillon : Pour un poisson de 0,5 g : a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) 0,0175/3 = 0,058 ml = 58 μl.
      Le même volume sans le STZ serait injecté pour un poisson de contrôle. Une feuille pour les volumes à injecter par masse de poisson doit être générée et utilisée pour une référence rapide.
9. Après l’injection placer les poissons dans le réservoir d’eau de récupération et de les surveiller pour l’activité normale de natation. Une fois que cela a été réalisé, les poissons sont transférés dans un réservoir de vie normal qui est maintenu à la plage de température réduite de 22 °C - 24 °C. Cette température réduite est essentielle pour une induction efficace de l’hyperglycémie (diabète sucré, DM).
10. Bien que l’hyperglycémie soit détectée dans les 24 heures qui suivent la première injection, afin d’induire un état prolongé d’hyperglycémie très élevée, le poisson zèbre a besoin d’une phase d’induction d’injection fréquente suivie d’injections hebdomadaires d’entretien comme indiqué ci-dessous.

Semaine 1 : 3 injections (jour 1, 3, 5), semaine 2 : 1 injection (jour 12), semaine 3 : 1 injection (jour 19), semaine 4 : (jour 21) Effectuer un essai d’intérêt.

À ce stade, le poisson zèbre sont considérés comme ayant été dans un état prolongé d’hyperglycémie et présentent les complications diabétiques de la rétinopathie, la néphropathie et aussi altéré la régénération des nageoires. Ceux-ci sont appelés poissons DM. En outre, si désiré le poisson peut être maintenu dans l’état hyperglycémique avec des injections hebdomadaires d’entretien. On devrait s’attendre à environ 5 % de décès au cours de ce processus.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.