Summary
हम चूहों, हटाने और मस्तिष्क के सेक्शनिंग, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से immunoperoxidase धुंधला हो जाना, राल एम्बेडिंग, और ultrathin मस्तिष्क वर्गों के सेक्शनिंग के transcardiac छिड़काव के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. इन प्रक्रियाओं के पूरा होने पर, immunostained सामग्री संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के साथ परीक्षा के लिए तैयार है.
Abstract
संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर) microglial, oligodendrocytic, astrocytic, और neuronal subcellular (dendrite, वृक्ष के समान रीढ़ की हड्डी, अक्षतंतु, अक्षतंतु टर्मिनल, perikaryon) डिब्बों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से उनके intracellular organelles cytoskeleton है और दृश्यमान करने के लिए अत्यंत उपयोगी है, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में उच्च स्थानिक संकल्प. के रूप में प्रस्तुत, मंदिर के साथ संयुक्त, पूर्व एम्बेडिंग immunocytochemistry कुछ विशिष्ट सुविधाओं और पहचान मानदंड (जैसे, microglial perikarya और प्रक्रियाओं, जब microglia Iba1 विशिष्ट मार्कर (आयनित कैल्शियम बाध्यकारी एडाप्टर एक अणु के खिलाफ एक एंटीबॉडी का उपयोग कर के साथ सेलुलर तत्वों की भेदभाव की अनुमति देता है यहाँ)), सेलुलर तत्वों की neurotransmitter सामग्री (जैसे, serotonergic) और उनके घुलनशील या झिल्ली बाध्य प्रोटीन की ultrastructural स्थानीयकरण (जैसे, 5 HT1A और EphA4 रिसेप्टर्स) की पहचान. यहाँ, हम acrolein लगानेवाला, हटाने और मस्तिष्क के सेक्शनिंग, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से immunoperoxidase diaminobenzidine धुंधला (थपका), राल एम्बेडिंग, और ultrathin मस्तिष्क वर्गों के सेक्शनिंग के साथ चूहों के transcardiac छिड़काव के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन. इन प्रक्रियाओं के पूरा होने पर, immunostained सामग्री मंदिर के साथ परीक्षा के लिए तैयार है. जब कड़ाई से प्रदर्शन किया, इस तकनीक का इष्टतम ultrastructural संरक्षण और immunocytochemical पता लगाने के बीच एक उत्कृष्ट समझौता प्रदान करता है.
Protocol
1. पशु छिड़काव
- छिड़काव से पहले दिन में तैयार:
- फॉस्फेट बफर के 2 एल (पीबी, 100 मिमी, पीएच 7.4) और सोडियम की 1 एल फॉस्फेट buffered खारा (पीबीएस, 0.9% 50 मिमी पंजाब में NaCl, पीएच 7.4) दोहरा आसुत जल में. पीबीएस और 1L पंजाब के 4 डिग्री सेल्सियस स्टोर ये छिड़काव और पूर्व एम्बेडिंग immunocytochemistry के लिए उपयोग किया जाएगा.
- 1L (पीएफए, 7.4 पीएच) के 4.0% paraformaldehyde लगानेवाला समाधान है, जो 6 चूहों के छिड़काव सक्षम हो जाएगा. उस प्रयोजन के लिए, एक धूआं हुड के नीचे 1 पीबी के एल गर्मी. दानेदार paraformaldehyde (पीएफए) के 40 ग्राम वजन और पंजाब समाधान में डालना जब यह 60 डिग्री सेल्सियस तक पहुँचता है जब समाधान पूरी तरह भंग पीएफए, कमरा (आरटी) 4 और तापमान की दुकान करने के लिए शांत ° सी. के साथ स्पष्ट है, - छिड़काव के दिन पर, पंजाब में 3.5% acrolein समाधान के एक धूआं हुड के नीचे 500 एमएल तैयार करते हैं. फिर, 3.5% acrolein और 4.0% पीएफए समाधान फिल्टर पेपर का उपयोग फिल्टर.
- माउस संज्ञाहरण के लिए, सोडियम pentobarbital इंजेक्षन (80 मिलीग्राम / किग्रा) 27 साढ़े गेज "सुई के साथ पेरिटोनियम में.
- छिड़काव के दौरान, PBS की 50 एमएल, acrolein के 75 एमएल, और पीएफए के 150 एमएल sequentially माउस संचलन में पारित करेंगे. क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप सेट, पीबीएस के साथ टयूबिंग को भरने और एक अंत में एक 23 गेज ¾ "तितली सुई ठीक छिड़काव समाधान (Pbs, acrolein या पीएफए) में टयूबिंग के दूसरे छोर विसर्जित. क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला की गति सेट 20-25 एमएल / किशोर और वयस्क चूहे के लिए मिनट के लिए पंप के छिड़काव के दौरान, ध्यान से हवा के किसी भी बुलबुले टयूबिंग में बनाने से बचने के.
- जब तक anaesthetized माउस नहीं रह दर्दनाक उत्तेजनाओं, जैसे एक पूंछ चुटकी जवाब आगे बढ़ने से पहले, रुको. एक विच्छेदन ट्रे में पशु लेटाओ और पंजे टेप का उपयोग तय है. चिमटी और कैंची के साथ, त्वचा और सीने में दिल बेनकाब गुहा खुला. मस्तिष्क ischemia कम से कम करने के लिए, छिड़काव करने के लिए तेजी से शुरू की जरूरत है. छोटे कैंची के साथ सही atrium खोलने कट और क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप शुरू. जबकि चिमटी के साथ दिल पकड़े, बाएं वेंट्रिकल के शीर्ष में तितली सुई सम्मिलित करें.
- जब बदलते समाधान, क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप बंद करो, एक समाधान से दूसरे करने के लिए टयूबिंग हस्तांतरण, और पंप तुरंत को पुनरारंभ करें.
- जब पीएफए के 150 एमएल पारित कर दिया गया है, क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप बंद करो. छोटे कैंची का प्रयोग, बंद सिर काट दिया, त्वचा खोलने के, और आंखों के बीच खोपड़ी टूट. छोटी चिमटी, ध्यान से खोपड़ी के छोटे टुकड़े बंद चिप का प्रयोग जब तक मस्तिष्क आसानी से हटाया जा सकता है है. 4 में 2 घंटे के लिए दिमाग पोस्ट - ठीक ° पीएफए में सी. पीबीएस में 3 बार 10 मिनट धो लें.
- तुरंत अनुप्रस्थ में मस्तिष्क (50 सुक्ष्ममापी मोटी वर्गों) बर्फ ठंडा पीबीएस में एक vibratome का उपयोग काटा. एक ठीक ब्रश के साथ, एक गिलास शीशी में पीबीएस युक्त immunocytochemistry के लिए चयनित वर्गों हस्तांतरण. कई वर्षों के लिए स्टोर पर शेष वर्गों cryoprotectant में -20 डिग्री सी (30% ईथीलीन glycol और पीबीएस में 30% ग्लिसरॉल).
2. प्री - एम्बेडिंग immunocytochemistry
- Immunocytochemistry के लिए, वर्गों आज़ादी कांच की शीशियों में चल संसाधित कर रहे हैं. प्रक्रिया के दौरान, एक को ध्यान दे वर्गों बाहर सूखी से बचने की जरूरत है.
- सबसे पहले, एक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग पीबीएस को हटा दें और तुरंत पीबीएस में आरटी पर 30 मिनट के लिए 0.1% सोडियम borohydride के एक ताजा समाधान के साथ बदलें.
- पीबीएस 3 बार 10 मिनट के साथ कुल्ला वर्गों, सभी बुलबुले को हटाने, और पीबीएस के एक अवरुद्ध 0.5 जिलेटिन% और 5% पशु जिसमें माध्यमिक एंटीबॉडी उत्पन्न किया गया सामान्य सीरम (सामान्य बकरी सीरम में समाधान युक्त में आरटी पर 2 घंटे के लिए सेते Iba1 immunostaining की वर्तमान उदाहरण के लिए).
- समाधान अवरुद्ध में प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ 48 घंटे के लिए सेते हैं. Iba1 - immunostaining के लिए, खरगोश विरोधी Iba1 एंटीबॉडी (1:1000) का उपयोग करें.
- पीबीएस 3 बार 10 मिनट के साथ वर्गों कुल्ला और आरटी पर 2 घंटे के लिए समाधान को रोकने में माध्यमिक बायोटिन को संयुग्मित एंटीबॉडी (1:1000) में सेते हैं.
Iba1 - immunostaining के लिए, बकरी विरोधी खरगोश IgGs का उपयोग करें. - पीबीएस 3 बार 10 मिनट के साथ वर्गों कुल्ला और आरटी से कम 1 घंटे के लिए समाधान रोकने में streptavidin हॉर्सरैडिश peroxidase (1:1000) में सेते हैं.
- पीबीएस 10 मिनट के साथ और Tris / एचसीएल बफर खारा के साथ वर्गों कुल्ला (टीबीएस, 50 मिमी, 7.4 पीएच) 2 बार 10 मिनट. लेबलिंग प्रकट करने के लिए, में 0.05% थपका और 0.01% टीबीएस में हाइड्रोजन पेरोक्साइड (समाधान हौसले से तैयार) के साथ वर्गों को सेते हैं. जब धुंधला काले रंग (चित्रा 1 में उदाहरण देखें) है, टीबीएस में rinsing द्वारा प्रतिक्रिया बंद करो. किसी भी मामले में, 5 मिनट की एक अधिकतम के बाद प्रतिक्रिया अंत. टीबीएस 10 मिनट के साथ और पीबी 2 बार 10 मिनट के साथ वर्गों कुल्ला.
3. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए प्रसंस्करण
- पंजाब में एक multiwell संस्कृति एक ठीक ब्रश का उपयोग कर प्लेट में वर्गों का स्थानांतरण. एक नाराज हुड के तहत पंजाब में 1% आज़मियम tetroxide समाधान तैयार करें. संस्कृति की थाली के कुओं से पंजाब निकालें और एक ठीक ब्रश के साथ फ्लैट वर्गों फैल गया. आरटी पर 30 मिनट के लिए 1% आज़मियम में तुरंत विसर्जित वर्गों.
- कांच की शीशियों में वर्गों स्थानांतरण, पीबी 3 बार 10 मिनट के साथ कुल्ला, और 2 मिनट immersions के माध्यम से इथेनॉल की सांद्रता आरोही में निर्जलीकरण: 2 बार 35%, 1 बार प्रत्येक 50%, 70%, 80%, 90%, और 95 %, 3 बार 100%, 3 बार propylene ऑक्साइड द्वारा पीछा किया.
- Durcupan राल तैयार करने के लिए, घटक के 20 ग्राम गठबंधन, घटक बी के 20 ग्राम, घटक सी के 0.6 ग्राम, और एक डिस्पोजेबल बीकर में घटक विकास के 0.4 ग्राम, मिश्रण अच्छी तरह से जब तक रंग एक समान हो जाता है, वजन और एक एल्यूमीनियम में डालना पकवान. यदि आवश्यक हो, राल ब्लॉक molds के embedding के और 48-72 घंटे के लिए 55 डिग्री सेल्सियस ओवन में इलाज में राल गिरने से तैयार किया जा सकता है.
- एक ठीक propylene ऑक्साइड के साथ rinsed ब्रश का प्रयोग, संसेचन के लिए Durcupan राल में propylene ऑक्साइड और विसर्जित कर से वर्गों रातोंरात निकाल आरटी पर.
- अगले दिन डाल, एल्यूमीनियम 10 मिनट नरम करने के लिए राल के लिए एक 55 डिग्री सेल्सियस ओवन में पकवान तौलना. Propylene ऑक्साइड, राल की एक पतली परत के साथ कोट एक ACLAR एम्बेडिंग फिल्म के साथ rinsed ब्रश का प्रयोग, नीचे रखना वर्गों, एक और एम्बेडिंग फिल्म के साथ कवर, और समान रूप से प्रकाश वजन वितरित (के बारे में 2 जी, कांच की शीशियों की प्लास्टिक की टोपियां उदाहरण के लिए) शीर्ष पर राल प्रसार में मदद करने के लिए. राल polymerization के लिए, 48-72 घंटे (55 डिग्री सेल्सियस) के लिए ओवन में सेते हैं.
- Polymerization के बाद, वर्गों के शीर्ष पर प्रकाश वजन और एम्बेडिंग फिल्म को हटा दें. एक द्विनेत्री माइक्रोस्कोप के तहत ब्याज क्षेत्रों के वर्ग (2x2 मिमी के बारे में) का चयन करें और ध्यान से उन्हें एक रेजर ब्लेड का उपयोग कर फिल्म से उत्पाद.
- गोंद राल ब्लॉक का उपयोग superglue की नोक पर हित के क्षेत्रों और 1 घंटे के लिए 55 ° सी ओवन में इलाज.
- सेक्शनिंग के लिए तैयार करने में, एक धार के साथ एक समद्विबाहु trapezoid के आकार के लिए राल ब्लॉक ट्रिम.
- एक ultramicrotome और एक गिलास चाकू का प्रयोग, ऊतक की सतह पर गोंद और राल हटा दें. दोहरा आसुत जल के साथ कांच के चाकू की नाव भरें और कुछ अर्द्ध पतली वर्गों (0.5-1 सुक्ष्ममापी मोटी) में कटौती.
- एक परिपूर्ण पाश के साथ एक SuperFrost स्लाइड वर्गों स्थानांतरण. एक गर्म थाली पर 80 डिग्री सेल्सियस 1 मिनट के लिए स्लाइड रखकर वर्गों सूखी. 0.1% toluidine नीले दाग (2 ग्राम सोडियम borate और 200 एमएल दोहरा आसुत जल में 0.2 छ toluidine नीला) के 1 मिनट के लिए कुछ बूँदें साथ कवर. दोहरा आसुत जल के साथ दाग अधिक कुल्ला. एक रोशनी खुर्दबीन के साथ वर्गों की परीक्षा (चित्रा 2) राल से सना हुआ ऊतक भेद करने के लिए सक्षम हो जाएगा.
- काटने ऊतक और राल के बीच सीमा तक वर्गों के बीच तक पहुँच पुनरारंभ. ध्यान दें कि निम्न कार्यविधि में प्रशिक्षण की आवश्यकता है. एक हीरे की चाकू के साथ कांच के चाकू बदलें और दोहरा आसुत जल के साथ नाव भरने. चांदी सोने के ultrathin वर्गों (60-80 एनएम मोटी) के लिए चांदी कट और ध्यान से उन्हें तांबे के जाल ठीक उल्टे चिमटी का उपयोग कर ग्रिड पर इकट्ठा. एक फिल्टर पेपर पर ग्रिड सूखी.
- इसके विपरीत बढ़ाने के लिए, ultrathin वर्गों नेतृत्व साइट्रेट (0.03 छ नेतृत्व और 10 एमएल डबल आसुत पानी 1 में 0.1 एमएल 10N सोडियम हीड्राकसीड साइट्रेट) के साथ दाग जा सकता है. ठीक उल्टे चिमटी का प्रयोग, 2 मिनट के लिए नेतृत्व साइट्रेट की एक बूंद के लिए एक ग्रिड का हस्तांतरण. ग्रिड निकालें और नाजुक 3 दोहरा आसुत जल के लगातार स्नान में कुल्ला. अन्त में, एक फिल्टर पेपर पर ग्रिड सूखी और एक ग्रिड के बॉक्स में इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म परीक्षण (आंकड़े 3-6) तक उन्हें दुकान.
4. प्रतिनिधि परिणाम
चित्रा 1 Iba1 प्रकाश सूक्ष्म स्तर पर अनुभाग से सना हुआ. Iba1 के सेलुलर वितरण microglia, जो immunostaining की विशिष्टता से पता चलता है के लिए प्रतिबंधित है. स्केल बार = 100 सुक्ष्ममापी.
चित्रा 2. Toluidine नीले दाग प्रकाश सूक्ष्म स्तर पर अर्द्ध पतली अनुभाग. ऊतक और राल के बीच सीमा है जहां immunostaining सबसे तीव्र इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप पर दिखाई देगा ध्यान दें.
चित्रा 3. Ultrathin इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म स्तर पर Iba1 immunopositive microglial perikaryon और प्रक्रियाओं दिखा अनुभाग. Iba1 पॉजिटिव संरचनात्मक तत्वों अपने immunoperoxidase थपका वेग इलेक्ट्रॉन घने द्वारा मान्यता प्राप्त हैं. स्केल बार = 2 सुक्ष्ममापी.
चित्रा 4. Ultrathin इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म स्तर पर विभिन्न आकारों और आकार के Iba1 immunopositive microglial प्रक्रियाओं प्रदर्शित अनुभाग. स्केल बार = 2 सुक्ष्ममापी.
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चित्रा 5 ultrathin एक Iba1 पॉजिटिव चित्रा 4 से microglial प्रक्रिया उच्च बढ़ाई दिखा रहा है, इसके intracellular organelles की पहचान को सक्षम करने अनुभाग. स्केल बार = 1 सुक्ष्ममापी.
चित्रा 6. Ultrathin उच्च बढ़ाई एक Iba1 पॉजिटिव microglial प्रक्रिया और synapses सहित neuropil के पास तत्वों के बीच ultrastructural रिश्तों का खुलासा अनुभाग. स्केल बार = 1μm.
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Discussion
यहाँ हम माउस मस्तिष्क के ऊतकों के immunoelectron माइक्रोस्कोपी है कि इष्टतम ultrastructural संरक्षण और immunocytochemical पता लगाने, जब प्रक्रियाओं को कड़ाई से प्रदर्शन कर रहे हैं के बीच एक उत्कृष्ट समझौता प्रदान करता है के लिए तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया है.
मंदिर के साथ संयुक्त, इस विधि के लिए कुछ विशिष्ट सुविधाओं और पहचान मानदंडों के साथ सेलुलर तत्वों भेद करने के लिए सक्षम बनाता है. विशेष रूप से, Iba1 की धुंधला immunoperoxidase थपका microglial perikarya और प्रक्रियाओं की पहचान neuropil के भीतर, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से उनके आकारिकी, intracellular organelles, और अन्य सेलुलर तत्वों (3-6 आंकड़े) के साथ ultrastructural संबंधों का विश्लेषण करने के लिए सक्षम बनाता है. इसके अतिरिक्त, इस प्रोटोकॉल glial या neuronal तत्वों में घुलनशील या झिल्ली बाध्य प्रोटीन की ultrastructural स्थानों के रूप में के रूप में अच्छी तरह intracellular organelles के साथ अपने सहयोग का विश्लेषण करने की अनुमति देता है. दरअसल, इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ, हम पहले 5-HT1A और neuronal perikarya, dendrites, वृक्ष के समान spines, unmyelinated axons, और वयस्क चूहे raphe dorsalis नाभिक, substantia के endothelial कोशिकाओं में 5-HT1B serotonergic रिसेप्टर्स की ultrastructural स्थानीयकरण से पता चला है नाइग्रा, globus pallidus, और 2 हिप्पोकैम्पस. हम भी EphA4 और EphB2 क्लैथ्रिन लेपित vesicles और माउस और चूहा हिप्पोकैम्पस और प्रमस्तिष्क प्रांतस्था में विभिन्न astrocytic और neuronal तत्वों में tyrosine kinase रिसेप्टर्स की ultrastructural स्थानीयकरण से पता चला है प्रसव के बाद विकास और 3,4,5,6 वयस्कता के दौरान . अन्त में, इस प्रोटोकॉल पूर्व एम्बेड करने के लिए दो एक साथ लेबल प्रोटीन के बीच ultrastructural संबंधों का विश्लेषण करने के लिए, उदाहरण के लिए Vglut1 glutamatergic ट्रांसपोर्टर और वयस्क माउस प्रमस्तिष्क प्रांतस्था 6 अक्षतंतु टर्मिनलों में EphA4 रिसेप्टर के सह स्थानीयकरण immunogold के साथ संयुक्त किया जा सकता है है. इसलिए, इस तकनीक को सफलतापूर्वक कर सकते हैं, अकेले या immunogold लेबलिंग के साथ संयोजन में लागू है, और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के विभिन्न क्षेत्रों सेल प्रकार के भीतर विभिन्न प्रोटीन की ultrastructural विश्लेषण के लिए, प्रसव के बाद जीवन भर स्वास्थ्य और रोग में.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप और vibratome का उपयोग, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से तकनीकी सहायता के लिए रोचेस्टर मेडिकल सेंटर के विश्वविद्यालय के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप रिसर्च कोर सुविधा पर करेन एल बेंटले और गेल Schneider के लिए शाओ मिंग लू और हैरिस ए Gelbard धन्यवाद. इस काम एनआईएच (EY019277), व्हाइटहॉल फाउंडेशन, Burroughs Wellcome कोष, और अल्फ्रेड पी. स्लोअन फाउंडेशन AKM करने के लिए से अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था. M.-È.T. एक Fonds डी ला Recherche एन SANTE डु (FRSQ) postdoctoral प्रशिक्षण पुरस्कार क्यूबेक द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium pentobarbital (Nembutal) | OVATION Pharmaceuticals | ||
| Filter paper 315 24 cm | VWR international | 28331-081 | |
| *Acrolein purum (≥95%) | Sigma-Aldrich | 01680 | |
| Sodium borohydride (≥98%) | Sigma-Aldrich | 452173 | |
| *Prilled paraformaldehyde (PFA) (95%) | Sigma-Aldrich | 441244 | |
| Normal goat serum | Jackson ImmunoResearch | 005-000-121 | |
| Rabbit anti-Iba1 primary antibody | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 019-19741 | Stored at -20°C, 1:1 in glycerol |
| Biotin-SP-conjugated AffiniPure F(ab’)2 fragment goat anti-rabbit IgG, Fc fragment specific | Jackson ImmunoResearch | 111-066-046 | Stored at -20°C, 1:1 in glycerol |
| Peroxidase-conjugated streptavidin | Jackson ImmunoResearch | 016-030-084 | Stored at -20°C, 1:1 in glycerol |
| *Osmium tetroxide 4% solution | Electron Microscopy Sciences | 19150 | Light sensitive |
| Propylene oxide (≥99%) | Sigma-Aldrich | 82325 | |
| Polypropylene disposable beakers (50 mL) | Fisher Scientific | 01-291-10 | |
| Aluminium weigh dishes (70 mm) | Fisher Scientific | NC9261784 | |
| Durcupan epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | 14040 | |
| Embedding mold | Electron Microscopy Sciences | 70907 | |
| DPX mountant for histology | Sigma-Aldrich | 44581 | |
| Gelatin subbed slides | VWR international | 100241-864 | |
| ACLAR embedding films (7.8 mm) | Electron Microscopy Sciences | 50425 | |
| Capsule mold | Electron Microscopy Sciences | 70150 | |
| High-performance super glue | Corporate Express | LOC30379 | |
| Perfect loop for ultra thin sections | Electron Microscopy Sciences | 70944 | |
| Superfrost slides | Fisher Scientific | 22-178-277 | |
| Diamond knife ultra 45° (2.5-3.5 mm) | Diatome | ||
| Gelatin from cold water fish skin (~45%) | Sigma-Aldrich | G7765 | |
*One should always work under a fume hood and wear nitrile gloves when handling acrolein, paraformaldehyde, and osmium and should also dispose of their waste properly. |
|||
References
- Venable, J. H., Coggeshall, R. A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy. J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).
- Riad, M. Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain. J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).
- Tremblay, M. E. Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus. J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).
- Tremblay, M. E. Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus. J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).
- Bouvier, D. Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain. J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).
- Bouvier, D. EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain. J Neurochem. , (2010).
