쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

Summary

여기서 우리는 금 본위 것으로 보인다 orthotopic 쥐 뒷다리 - 사지 이식 절차를 설명

Abstract

복합 조직 allotransplantation (CTA)는 이제 손, 팔 또는 숫자의 손실 후에 유효한 치료 옵션을 나타내고 재건 수술의 새로운 치료 법인되고 있습니다. 그러나, 장기적으로 높은 선량 다중 약물 치료는 광범위한 immunosuppressive 응용 프로그램을 halters 심각한 부작용의 위험을 베어링, 그래프트 생존을 보장하기 위해 필요합니다. 이 분야에 더 이상 진행은 기본적인 면역학 및 복합 조직 이식의 국소 빈혈 reperfusion의 부상의 이해에 따라 달라질 수 있습니다.

지금까지 쥐에 orthotopic 뒷다리 이식은 재건 이식 (RT)에 대한 선호하는 설치류 모델을했습니다, 그러나, 그것은 vasculature의 reattachment, 뼈, 근육과 신경에게 대한 특별한 microsurgical 기술을 필요로 매우 까다로운 절차입니다.

우리는 뒷다리 사지 이식을 밀고하는 신속하고 안정적​​인 접근을 제공하는이 모델에 대한 혈관 커프 문합 기술을 도입했습니다. 이 기술은 간소화하고 단축 수술을 성공적으로 높은 생존과 낮은 합병증 속도로 작업을 수행하기 위해 기본적인 microsurgical 경험 외과 수 있습니다. 기술은 물론 면역뿐만 아니라 국소 빈혈 reperfusion의 부상 (이리) 연구에 적합한 것 같습니다.

Protocol

기증자 운영 및 힌드 - 림브 하베스트

1. 수술 절차에 대한 microsurgical 악기 살균 집합이 활용됩니다. 외과 수술의 시작하기 전에 변경해야 멸균 장갑을 포함하여 적절한 복장을 착용해야합니다.
2. 생쥐가 pentobarbital의 intraperitoneal 주사 (50mg/kg IP)와 anesthetized이며 전체 수술을 통해 안정적인 동물 체온을 용이하게 가열 작업 현장에 배치 부정사.
3. 작업의 제기 피부 절개하기 전에 각 모두 세 번 살균이며, 살균제 및 알코올. 밖으로 건조에서 동물 각막을 방지하기 위해 눈이 수술하기 전에 안과 연고 (Vidisic)와 윤활 있습니다.
4. 피부 절개는 약 사타구니 인대의 수준에서 오른쪽 사타구니에 걸쳐 이루어집니다. 대퇴 혈관이 양극성 소작과 무딘 절개 무료 해부되며 깊은 지점은 8-0 실크 출혈도 잡았 있습니다.
5. 헤파린의 300μl (50 IU)를 방지 응고에 대한 성기 정맥을 통해 주입합니다.
6. 대퇴 혈관이 사타구니 인대의 수준에 출혈도 잡았 그리고 묶인에 말초 절단됩니다.
7. 뒷다리가로 플러시됩니다 심심풀이 (4 ° C) 오분 이상의 대퇴 동맥을 통해 HTK 솔루션 (5ml).
8. 모든 근육 그룹이 급격하게 가위로 나누어져 있으며, osteotomy은 대퇴골의 말초 셋째 수준에서 본 회전 전기와 함께 수행됩니다.
9. 수확 사지 그러면 이식까지 보존 및 냉장 창고 얼음처럼 차가운 HTK 솔루션 20mL에 빠져들 수 있습니다.

받는 운영 및 이식

1. 쥐 수술 분야에 pentobarbital과 배치 부정사의 intraperitoneal 주사와 함께 anesthetized 있습니다.
2. 피부 절개는 약 사타구니 인대의 수준에서 오른쪽 사타구니에 걸쳐 이루어집니다. 대퇴 혈관이 양극성 소작과 무딘 절개 무료로 해부하고 있습니다.
3. 대퇴 혈관이 가능한 말초로 출혈도 잡았지만, 상복부의 선박 이륙하는 근위 있습니다. 혈관 클램프는 동맥과 정맥에 사타구니 인대의 수준에 배치됩니다.
4. 0.010 mm, 커프스 길이 :; 및 정맥 (커프 직경 안쪽 커프스 - 벽 두께 1.151 mm 폴리에틸렌 커프스는 동맥 (0.912 mm, 커프스 - 벽 두께 : 0.010 mm, 커프스 길이 2.0 mm 커프 직경 내부) 세웠어요 : 2.0 mm). 선박 루멘의 가장자리는 다음 선박 팽창시키는와 함께 뽑아이며 대퇴 동맥과 정맥은 즉석 (약 2mm)의 전신을 통해 everted과 원주 8-0 실크 봉합사로 고정됩니다.
5. 기증자 갈기갈기를위한 공간을 마련하기 위해받는 사지는 근육 그룹의 날카로운 해부와 제거하고 osteotomy는 대퇴골 중간에서 수행됩니다.
6. 기증자 사지는 HTK 솔루션에서 제거하고 이식은 18 게이지 바늘 (길이 : 1.5-2.0 cm)를 사용하여 대퇴골의 osteosynthesis로 시작하는 intramedullary의 막대로.
7. 복부 근육 그룹은 밀접하게 4-0 Vicryl 또는 Prolene 중단 봉합과 approximated 있습니다.
8. 혈관 anastomoses는받는 사람의 정맥 및 커프 복잡한 통해 기증자의 정맥과 동맥을 당기는에 의해 수행됩니다. 원주 8-0 실크 봉합사는 다시 문합을 확보하기 위해 배치됩니다.
9. 정맥 클램프는 동맥 클램프 다음 발표하고, reperfusion는 말초 사지와 도보로 색상의 반환뿐만 아니라 동맥을 통해 타악기 흐름에 의해 시각입니다.
10. 나머지 지느러미 근육 그룹은 4-0 Vicryl 또는 Prolene 중단 봉합과 함께 다시 approximated 수 있습니다.
11. 피부는 4-0 vicryl 또는 prolene 중단 봉합과 함께 닫힙니다.
12. 받는 사람 랫은 가열 패드에 위치 및 복구까지 면밀히 모니터링합니다.
13. 받는 동물은 세 posttransplant 일에 대한 예방 항생제 (Cefazolin, 20 MG / 일, IM) 및 Buprenex를 (0.1 MG / kg, SC)받을 수 있습니다.

Discussion

실험 연구 수십년은 앞서 및 최근 과거에 성공적인 인간의 손으로 이식 활성화합니다. 1978 년, 샤피로 외. 물론 여러 가지 병적인, 생리 및 면역 측면뿐만 아니라, 복합 조직 이식의 기능 결과를 연구에 적합한 쥐에 orthotopic 뒷다리 이식 모델을 개발했습니다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 도입하여, 즉 프로 시저의 가장 어려운 부분 혈관 문합을 수정했습니다. 그것이 높은 생존율 (80-90%)와 프로 시저를 수행하는 기본적인 microsurgical 경험 외과를 단순화하고 수술을 단축하고 있습니다 기존의 봉합 기술에 비해.

봉합 anastomoses, 출혈의 위험, 혈전증, 그리고 작은 꽃자루의 꼬임의 다양성없이 감소하고 있습니다. 이것은 적절한 커프 크기 선택과 최소 수 있지만 혈액이 처음 즉석 통과 루멘과 충돌 사이트에서 수축이나 난기류는 커프 기술의 새로운 잠재적인 위험이있다. 또한, 작은 크기 불일치가 쉽게 다시 다른 직경의 혈관을 suturing에 내재된 위험을 줄일 수, 커프 문합로 처리할 수 있습니다. 성공 커프 문합을위한 가장 중요한 고려 사항 중 일부는 아래에 주어진다 :

1. 의 단일 주사 Pentobarbital (50 MG / kg IP) 90 분 동안 동물을 마취하기에 충분해야합니다. 작업 이상 70-80분 정도 경우에는 15mg/kg IP의 추가 복용이 적용되어야합니다. 마취의 심도는 intraoperatively 발가락 - 핀치 반사 테스트를 반복하여 테스트하실 수 있습니다.
2. 기증자 뒷다리 / 수신자 뒷다리의 osteotomy은 이식 동안 osteosynthesis을 완화하기 위해 대퇴골 중간에서 수행되어야합니다.
3. 즉석 크기의주의 선택은 성공적인 revascularization에 대한 중요한 중요하다.
4. thromboses을 피하기 위해, 헤파린 (50IU)은 이식 살포하기 전에 기증자 일분을 관리해야합니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nembutal®	OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno	Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution	Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors	ASSI	ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps	ASSI	ASSI®JFC-7
Dilator Forceps	ASSI	ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes	River Tech Medical	#17; #19