Summary
अज्ञातहेतुक रोगों में अनुकूली प्रतिरक्षा के माइक्रोबियल लक्ष्य की पहचान एंजाइम से जुड़े immunospot परख का उपयोग करके पूरा किया जा सकता है.
Abstract
अनुकूली रोगक्षमता रोगज़नक़ों के intracellular निकासी के लिए एक महत्वपूर्ण घटक है. पता लगाने और इंसानों में इन प्रतिक्रियाओं यों की क्षमता एक महत्वपूर्ण नैदानिक उपकरण है. एंजाइम से जुड़ी immunospot परख (ELISPOT) एचआईवी संक्रमण, प्रत्यारोपण के साथ उन के रूप में immunosuppressed आबादी, और स्टेरॉयड का उपयोग सहित माइक्रोबियल प्रतिजनों के खिलाफ सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की पहचान करने की क्षमता के लिए लोकप्रियता प्राप्त कर रहा है. इस परख करने के लिए विशिष्ट माइक्रोबियल प्रतिजनों के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के रूप में के रूप में अच्छी तरह से भेद अगर इन प्रतिक्रियाओं TH1 या चरित्र में Th2 हैं यों की क्षमता है. ELISPOT सूजन की साइट के लिए सीमित नहीं है. यह करने के लिए परिधीय रक्त, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से bronchoalveolar lavage, मस्तिष्क रीढ़ की हड्डी में तरल पदार्थ, और जलोदर जैसे सक्रिय भागीदारी की साइटों के भीतर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए आकलन की क्षमता में बहुमुखी है. एक एकल या एकाधिक प्रतिजनों के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच संभव है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से माइक्रोबियल प्रोटीन के भीतर विशिष्ट epitopes. इस परख प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का समय पर पता लगाने के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मेजबान टी कोशिकाओं द्वारा मान्यता प्राप्त प्रतिजनों में भेद की सुविधा. दोहरी रंग ELISPOT assays दो साइटोकिन्स के साथ - साथ अभिव्यक्ति का पता लगाने के के लिए उपलब्ध हैं. इस तकनीक के लिए हाल ही में अनुप्रयोगों extrapulmonary तपेदिक के निदान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से संक्रामक प्रतिजनों के autoimmune रोग के लिए योगदान की जांच शामिल हैं.
Protocol
निम्नलिखित प्रोटोकॉल के लिए, हम ब्याज की कोशिकाओं के रूप में परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear (PBMC) का उपयोग करें. हालांकि, इस प्रोटोकॉल के अन्य प्रकार की कोशिकाओं के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. बाँझ तकनीक का उपयोग कर एक टिशू कल्चर हुड में परख प्रदर्शन.
दिन 1: प्लेट और कक्ष की तैयारी
- बाहर एक ELISPOT थाली ले लो और यह हुड में खुला.
- थाली 1X पीबीएस के 150 μL एक multichannel pipettor का उपयोग कर के साथ 3 बार धो, यदि उपलब्ध है, अन्यथा एकल अच्छी तरह से pipetting स्वीकार्य है.
- जलाशयों के एक पैकेज ले लो और यह हुड में खुला.
- कब्जा एंटीबॉडी के दो μg / एमएल, मानव विरोधी इंटरफेरॉन γ, 11 को 1X पीबीएस के MLS. जोड़ें अच्छी तरह भंवर. एक जलाशय एंटीबॉडी मिश्रण स्थानांतरण.
- प्रत्येक अच्छी तरह multichannel का उपयोग में कोटिंग समाधान के 100 μL रखें.
- Parafilm में थाली लपेटें.
- रातोंरात फ्रिज में थाली प्लेस. प्लेटें सप्ताह के लिए अच्छे हैं. अंगूठे का नियम है कि अगर वहाँ अभी भी कुओं में तरल छोड़ दिया है, थाली में इस्तेमाल किया जा सकता है.
सेल तैयार
यदि PBMCs ताजा कर रहे हैं तो कोशिकाओं गिनती और रातोंरात सेते 37 ° C 5% सीओ 2 के साथ . PBMC के लिए तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत, कक्षों की विगलन आवश्यक है. प्रोटोकॉल है निम्नानुसार है:
- 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान तक लगभग पूरी तरह thawed में कक्षों की cryovial पहले गला लें.
- तुरंत R10 मीडिया के 5 एमएल resuspend.
- 225 x जी पर 5 मिनट के लिए स्पिन
- R10 मीडिया के 5 एमएल में फिर Resuspend और व्यवहार्य कोशिकाओं का उपयोग trypan नीले गिनती.
- 2 x 10 6 R10 मीडिया में कोशिकाओं / एमएल एकाग्रता लाओ.
- 37 पर रातोंरात रेस्ट 2 डिग्री सेल्सियस के साथ 5% सीओ .
दिन 2: की स्थापना - अप प्लेट
- नमूना पहचान संख्या, अच्छी तरह से स्थितियों, और तारीख के साथ लेबल थाली ढक्कन.
- थाली बाँझ 1x पीबीएस के 150 μL डंप और दाग विधि का उपयोग कर के साथ धो 6 बार. प्लेट नहीं छप जबकि डंपिंग सावधान रहें. इस प्लेट के कुओं बैंगनी बारी के लिए कारण सकता है.
- प्रत्येक अच्छी तरह से करने के लिए R20 की 100 μL जोड़ें.
- 37 पर थाली ° सी 1 घंटे के लिए सेते हैं.
- जबकि प्लेट incubating है, कोशिकाओं है कि रात भर विश्राम थे गिनती.
- 5 मिनट के लिए 1500 rpm पर सेल निलंबन स्पिन. सतह पर तैरनेवाला छानना और गोली resuspend इतनी है कि आप R10 मीडिया में 1ml प्रति 1x10 6 कोशिकाओं के अंतिम एकाग्रता है.
- 1 घंटे ऊष्मायन के बाद निकालने के लिए, R20 डंप और दाग विधि का उपयोग कर. प्लेट नहीं छप जबकि डंपिंग सावधान रहें.
- सेल के समाधान के 100 μL (10 5 कोशिकाओं) एक अच्छी तरह से जोड़ें. दो प्रतियों में इसी कुओं के लिए उपयुक्त पेप्टाइड्स और / या प्रतिजनों जोड़ें. एक नया विंदुक टिप हर बार जब आप पेप्टाइड काम कर समाधान में जाने का उपयोग करें. सामान्य पेप्टाइड एकाग्रता 10-40 μg / एमएल है. के बाद से पेप्टाइड्स भिन्न है, प्रत्येक अन्वेषक पेप्टाइड्स टाइट्रेट इष्टतम परिणाम प्राप्त करना चाहिए.
- नकारात्मक नियंत्रण कुओं में, केवल कोशिकाओं (नहीं पेप्टाइड्स) को जोड़ने
- सकारात्मक नियंत्रण कुओं में, phytohemagglutinin (10 μg / एमएल, सिग्मा पीएचए) जोड़ें.
- 37 पर रातोंरात सेते डिग्री सेल्सियस (~ 18 घंटे) के साथ 5% सीओ 2 .
दिन 3: प्लेट का विकास
- प्लेट 150 μL डंप और दाग विधि का उपयोग 1xPBS के साथ 6 बार धो.
- Multichannel pipettor प्लेट का उपयोग कर के प्रत्येक अच्छी तरह से 100 μL पीबीएस जोड़ें.
- 15 मिनट के लिए फ्रिज में थाली रखो.
- रेफ्रिजरेटर से बाहर थाली ले लो और यह टिशू कल्चर हुड में जगह.
- बायोटिन एंटीबॉडी समाधान तैयार
- 11mL पीबीएस 0.5 μg / बायोटिन एंटीबॉडी के एमएल (MAB 7 - बी -6 - एक) जोड़ें.
- भंवर को अच्छी तरह से मिश्रण समाधान.
- यदि समाधान एक multichannel का उपयोग कर जोड़ने की योजना बना, यह एक जलाशय में डालना.
- यह wastebasket में flicking द्वारा पीबीएस त्यागें. प्लेट नहीं छप जबकि डंपिंग सावधान रहें.
- समाधान के एक कुएँ में 100 μL रखें.
- कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए ऊतक संस्कृति हुड में थाली सेते हैं.
- 150μL डंप और दाग विधि का उपयोग कर 1xPBS के साथ थाली 6 बार धोएं. 6 वें धोने, थाली पर पीबीएस छोड़ जब तक आप streptavidin एंटीबॉडी तैयार किया है.
- Streptavidin एंटीबॉडी तैयार.
- 11mL पीबीएस (1:2000 कमजोर पड़ने) 5.5 μ एल streptavidin एंटीबॉडी (streptavidin ALP) जोड़ें.
- भंवर को अच्छी तरह से मिश्रण समाधान.
- यदि समाधान एक multichannel का उपयोग कर जोड़ने की योजना बना, यह एक जलाशय में डालना.
- कुओं में शेष पीबीएस त्यागें और प्लेट दाग.
- प्रत्येक अच्छी तरह से streptavidin समाधान के 100 μL जोड़ें.
- कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए ऊतक संस्कृति हुड में थाली सेते हैं.
- प्लेटें पीबीएस डंप और दाग विधि का उपयोग कर के साथ 6 बार धोएं. 6 वें धोने, थाली पर पीबीएस छोड़ जब तक आप रंग समाधान बना दिया है.
- अंधेरे में कार्य करें. Alkaline फॉस्फेट सब्सट्रेट समाधान (alkaline फॉस्फेट सब्सट्रेट किट चतुर्थ BCIP / एनबीटी) तैयार करें:
- सब्सट्रेट अभिकर्मक 1 से 11 एमएल Tris बफर, अच्छी तरह से भंवर के 4 बूँदें जोड़ें. Tris बफर, अच्छी तरह भंवर सब्सट्रेट 2 अभिकर्मक के 4 बूँदें जोड़ें. Tris बफर, अच्छी तरह भंवर सब्सट्रेट 3 अभिकर्मक के 4 बूँदें जोड़ें.
- शेष पीबीएस त्यागें और प्लेट दाग.
- रंग समाधान के 100 μL multichannel प्लेट का उपयोग कर के प्रत्येक अच्छी तरह से करने के लिए जोड़ें.
- रंग की 5 से 10 मिनट के विकास के बाद प्रकाश पर मुड़ें.
- रंग अभिकर्मकों थाली पर रहने के लिए जब तक स्पॉट बैंगनी बारी शुरू और काफी गहरे हैं अनुमति दें. यह कहीं भी 5 से 20 मिनट से लेना चाहिए. सब्सट्रेट समाधान भी लंबे समय पर नहीं छोड़ क्योंकि ऐसा करने से उच्च पृष्ठभूमि के कारण सकता है सावधान रहो.
- ELISPOT थाली नल का पानी के साथ 3 बार धोएं.
- के बारे में एक घंटे या रात भर के लिए सूखी छोड़ दें.
- थाली पढ़ें या तो स्वयं या ELISPOT प्लेट पाठक के साथ.
- एक बॉक्स में थाली दूर प्रकाश जोखिम स्टोर से.
प्रतिनिधि परिणाम:
ELISPOT माइक्रोबियल प्रतिजनों के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया quantitate बनाया गया है. हर जगह एक ही उत्तरदायी सेल इंगित करता है, ब्याज की cytokine व्यक्त. स्पॉट मैन्युअल रूप से या एक ELISPOT प्लेट रीडर का उपयोग कर गिना जा सकता है.
आकलन है कि ELISPOT सही ढंग से प्रदर्शन किया गया है ब्याज की cytokine की पृष्ठभूमि के उत्पादन के लिए नकारात्मक नियंत्रण की जांच के साथ शुरू करना चाहिए. नकारात्मक नियंत्रण कुओं में एक करने के लिए कोई स्पॉट देखने की उम्मीद, हालांकि एक छोटी सी पृष्ठभूमि (बैंगनी रंग) मौजूद हो सकता है है. आमतौर पर, वहाँ अच्छी तरह से प्रति पांच स्थानों की एक औसत से कम होना चाहिए. सकारात्मक नियंत्रण कुओं पुष्टि है कि प्रतिक्रिया सही ढंग से प्रदर्शन किया गया है, और है कि कोशिकाओं प्रतिजनी उत्तेजना के लिए उत्तरदायी हैं. सकारात्मक नियंत्रण कुओं में आप एक गहरे बैंगनी पृष्ठभूमि स्पॉट (Fig1) के संगम के कारण देखने की उम्मीद करेंगे. कोई सफेद पृष्ठभूमि के लिए कम होना चाहिए. यदि सकारात्मक नियंत्रण और नकारात्मक नियंत्रण के नमूने उपयुक्त हैं, एक तो ब्याज की प्रतिजन युक्त कुओं की गणना कर सकते हैं. एक "suboptimal परिणाम" उच्च (कुओं बैंगनी हैं) पृष्ठभूमि, नहीं धब्बे या बहुत कुछ धब्बे, रिक्त बीच, खराब परिभाषित धब्बे या मिला हुआ स्पॉट से परिलक्षित होगा. समस्या निवारण युक्तियों की एक सूची प्रदान की जाती है (तालिका 1).
चित्रा 1. ELISPOT थाली के एक प्रतिनिधि. प्रत्येक प्लेट एक सकारात्मक नियंत्रण, नकारात्मक नियंत्रण और दो कुओं में कम से कम किए गए ब्याज की पेप्टाइड शामिल करना चाहिए. C9, C10 D9, और D10 सकारात्मक नियंत्रण कुओं कर रहे हैं, के रूप में आप देख सकते हैं वहाँ एक गहरे बैंगनी रंग मिला हुआ कोशिकाओं और शायद ही कोई सफेद पृष्ठभूमि है. नकारात्मक नियंत्रण कुओं G11, G12, H11 और H12 हैं. इन कुओं कोई बैंगनी पृष्ठभूमि और कोई स्पॉट के रूप में की उम्मीद है. स्पॉट G7, जी -8, H7 और H8, माइक्रोबियल पेप्टाइड्स सेलुलर प्रतिक्रियाओं वर्णन, बैंगनी धब्बे एक एकल उत्तरदायी ब्याज की साइटोकाइन व्यक्त सेल का प्रतिनिधित्व करते हैं.
तालिका 1
| अवलोकन | संभावित समस्या | संभव समाधान |
| उच्च पृष्ठभूमि | 1. झिल्ली के दोनों पक्षों ने ठीक से नहीं धोया 2. बहुत सारे कक्षों स्रावित साइटोकाइन 3. प्लेट ठीक से नहीं सूख 4. विकसित थाली पर | 1. आसुत जल के साथ झिल्ली के दोनों ओर रंग विकास के पहले और बाद धो लें. अभिकर्मकों प्लेट के आधार में झिल्ली के माध्यम से लीक है, और हो सकता है इन उच्च पृष्ठभूमि के कारण अगर धुल नहीं सकता. 2. अच्छी तरह से प्रति कोशिकाओं की संख्या कम है, इस अनुकूलन की आवश्यकता होगी 3. पढ़ने से पहले थाली अब ड्राई 4. विकासशील समय कम |
| कोई स्पॉट / बहुत कुछ स्पॉट | 1. कोशिकाओं को पर्याप्त नहीं स्रावित cytokine / ब्याज की प्रोटीन 2. सुनिश्चित करें कि कोशिकाओं को सही ढंग से प्रेरित कर रहे हैं 3. एल के लिए नहीं incubated कक्षपर्याप्त ong या समय लेने के लिए उत्तेजक का जवाब हो सकता है 4. अपर्याप्त रंग विकास 5. प्राथमिक या नहीं पर्याप्त माध्यमिक एंटीबॉडी | 1. कक्षों की संख्या बढ़ाएँ. यह अनुकूलन की आवश्यकता होगी 2. एक उत्तेजक है कि आप जानते हैं कि अपने cytokine / ब्याज की प्रोटीन की अभिव्यक्ति को प्रेरित करेगा - यह भी एक सकारात्मक उत्तेजना नियंत्रण का उपयोग 3. सेल ऊष्मायन समय बढ़ाएँ या अप्रत्यक्ष विधि (पूर्व का इलाज उत्तेजक के साथ कोशिकाओं) का उपयोग करें 4. मॉनिटर एक उपरि खुर्दबीन के साथ रंग विकास और सुनिश्चित करें कि विकासशील अभिकर्मकों सही ढंग से संग्रहीत किया है और खो दिया है गतिविधि नहीं 5. प्राथमिक और / या माध्यमिक एंटीबॉडी की एकाग्रता बढ़ा जा आवश्यकता होगी. यह अनुकूलन की आवश्यकता होगी. |
| खाली क्षेत्रों | 1. नहीं इलाज पूर्व झिल्ली 2. कुछ स्तर पर झिल्ली सूख गया है 3. कक्ष unevenly वितरित | 1. सुनिश्चित झिल्ली पर्याप्त रूप से 70% इथेनॉल (सभी झिल्ली यह तो अपने सप्लायर के साथ जांच की जरूरत नहीं है) के साथ pretreated है. पीबीएस 3X के साथ अच्छी तरह से बाद में धो 2. सुनिश्चित करें झिल्ली सूखी नहीं करता है 3. सुनिश्चित करें आप कक्षों धीरे कुओं में बाहर pipetting से पहले एक अच्छा मुताबिक़ सेल निलंबन मिश्रण |
| खाली केंद्र | 1. धोने से नुकसान | 1. स्वचालित वॉशर (या pipetting) पर फ्लो की दर बहुत अधिक हो सकता है. एक अधिक कोमल धोने प्रक्रिया की आवश्यकता है |
| झूठी सकारात्मक | 1. माध्यमिक एंटीबॉडी समुच्चय 2. झिल्ली पर अभी भी कक्ष 3. सेल संस्कृति संदूषण | 1. माध्यमिक एंटीबॉडी फ़िल्टर 2. सभी कोशिकाओं माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन पहले पीबीएस बीच 20 के साथ झिल्ली से धो रहे हैं सुनिश्चित करें. झिल्ली पर छोड़ दिया कक्ष अनियमित आकार के धब्बे देंगे 3. अभिकर्मकों रखें बाँझ और संभव के रूप में साफ के रूप में. सुनिश्चित करें कि अपने सेल संस्कृति तकनीक सड़न रोकनेवाला है. एक मीडिया नकारात्मक नियंत्रण चलाकर झूठी सकारात्मक के लिए जाँच करें. थाली आंदोलन के लिए, खराब परिभाषित धब्बे देख |
| मिला हुआ स्पॉट | 1. गरीब कोटिंग, बहुत अधिक एंटीबॉडी 2. लम्बे समय तक सेल संस्कृति 3. कक्षों पर उत्तेजित | 1. प्राथमिक एंटीबॉडी एकाग्रता में कमी 2. अब कोशिकाओं incubated हैं, और अधिक cytokine / प्रोटीन वे छिपाना होगा. यह बड़ा स्पॉट है कि मर्ज और अप्रभेद्य बन शुरू होगा में परिणाम होगा. 3. सेल संस्कृति कदम ऊष्मायन समय कम. ओवर उत्तेजना cytokine / सेल द्वारा secreted किया जा रहा है प्रोटीन की एक बहुत में परिणाम होगा. इस स्थानों है कि मर्ज और अप्रभेद्य बन शुरू होगा उत्पादन होगा. समय की एक छोटी राशि के लिए संस्कृति मीडिया या संस्कृति में उत्तेजक की राशि कम |
| खराब निर्धारित स्पॉट | 1. पूर्व इलाज नहीं झिल्ली (यदि आपके झिल्ली इस की आवश्यकता है, सप्लायर के साथ की जाँच करें) 2. सेल ऊष्मायन के दौरान प्लेट आंदोलन | 1. झिल्ली किया जाना चाहिए और इथेनॉल या इस फजी, खराब परिभाषित स्थानों में परिणाम कर सकते हैं के साथ पूर्व इलाज. के लिए पाठक इन का भेद करने के लिए मुश्किल हो जाएगा 2. थाली सेल ऊष्मायन के दौरान स्थानांतरित करने के लिए है के रूप में कोशिकाओं है कि स्थानांतरित कर दिया एक से अधिक जगह पैदा करेगा अनुमति न दें. यदि संभव हो तो एक समर्पित इनक्यूबेटर का उपयोग करें कि ऊष्मायन के दौरान नहीं खोला जाएगा. कोशिकाओं को जोड़ने के बाद थाली नल मत |
| सकारात्मक नियंत्रण कुओं कम है | 1. अल्प - streptavidin ALP और / या BCIP / एनबीटी समाधान का उपयोग करने का एक परिणाम है कि कमरे के तापमान पर नहीं लाया है हो सकता है | 1. कुओं को जोड़ने से पहले कमरे के तापमान पर अभिकर्मकों लाओ |
| स्पॉट के घनत्व यह मुश्किल के लिए उन्हें मात्रा ठहराना करने के लिए बनाता है | 1. बहुत सारे कोशिकाओं कुओं को जोड़ा गया | 1. कक्षों की dilutions (यानी, 1 x 10 5 6 x 10 5, 1 x 10 5, 5 x 10 4, 1 x 10 अच्छी तरह से प्रति 4 कोशिकाओं) के लिए कोशिकाओं का इष्टतम संख्या है कि अलग धब्बे के गठन में परिणाम होगा निर्धारित |
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Discussion
ELISPOT परख सबसे महत्वपूर्ण और व्यापक रूप से इस्तेमाल किया assays के रूप में उभरा है मानव में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की निगरानी और अन्य प्रजातियों की एक किस्म है. ELISPOT परख के साथ, प्रतिरक्षा सेल आवृत्तियों सेल आबादी के विस्तार या हेरफेर के बिना एकल कोशिका के स्तर पर मापा जा सकता है. ELISPOT परख व्यापक रूप से संक्रमण, कैंसर, एलर्जी और autoimmune रोग सहित विभिन्न रोगों में विशिष्ट प्रतिजन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए लागू किया गया है. इस परख के आवेदन काफी हद तक पढ़ाई जहाँ प्रतिजन विशेष कोशिकाओं की मात्रा का ठहराव या एंटीबायोटिक एक चिकित्सा के पहले या बाद में तपेदिक जैसे विभिन्न रोग राज्यों में विशिष्ट प्रतिजन के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की तुलना महत्वपूर्ण है के लिए लागू किया गया है. हालांकि, हाल की रिपोर्ट से पता चला है कि इस परख ascitic तरल पदार्थ, मस्तिष्क रीढ़ की हड्डी में तरल पदार्थ या bronchoalveolar lavage के रूप में अलग सेल सामग्री के भीतर प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं की आवृत्तियों का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. संग - हान किम एट. अल. दिखाया है कि पेट तपेदिक के संदिग्ध रोगियों से PBMCs पर ELISPOT परख का उपयोग करके, वहाँ सक्रिय पेट 2 टीबी के निदान के लिए 89% की एक संवेदनशीलता है . यह भी दिखाया गया है कि टी सेल आधारित ELISPOT परख परिधीय रक्त और मस्तिष्कमेरु द्रव mononuclear कोशिकाओं 3 का उपयोग तपेदिक द्वारा केंद्रीय तंत्रिका तंत्र की भागीदारी के संदिग्ध के साथ रोगियों में एक सक्रिय टीबी के निदान के लिए 91 % संवेदनशीलता था. हमारी प्रयोगशाला ELISPOT परख इस्तेमाल सारकॉइडोसिस रोगियों से PBMC में माइक्रोबैक्टीरियल प्रतिजन ESAT-6 के सेलुलर मान्यता का आकलन करने के लिए. इस रिपोर्ट महत्वपूर्ण है क्योंकि यह दिखाता है कि कैसे ELISPOT परख अज्ञातहेतुक 4,5 रोगों में संक्रामक एजेंटों के लिए एक भूमिका चित्रित एक नैदानिक पद्धति के रूप में भी इस्तेमाल किया जा सकता है. इस परख की एक और लाभ यह है यह भी जो बीसीजी टीकाकरण आया है रोगियों में तपेदिक की पहचान की अनुमति देता है. परख स्टेरॉयड का उपयोग और एचआईवी संक्रमण 6 जैसे immunosuppressive शर्तों द्वारा सीमित नहीं है. यह भी मात्रा का ठहराव और मानव इम्यूनो वायरस के लक्षण वर्णन (एचआईवी) विशिष्ट CD8 + टी सेल प्रतिक्रिया 7 में मदद की है . प्रतिक्रियाएँ जैसे Aspergillus 8 fumigatus माइक्रोबियल प्रतिजनों, स्वस्थ विषयों के बीच भी पाया जा सकता है . ELISPOT भी Hantavirus कार्डियोपल्मोनरी 9 सिंड्रोम, के रूप में के रूप में अच्छी तरह के जीर्ण एचआईवी संक्रमण 10 के दौरान टी सेल समारोह का आकलन के बचे से immunodominant प्रतिजनों की पहचान इस्तेमाल किया गया है है. की वजह से इन विट्रो संस्कृति में अल्पकालिक, मापा प्रतिक्रिया निकट vivo टी सेल आवृत्ति में दर्पण. ELISPOT परख 'मानक' जैसे lymphoproliferation दीर्घावधि औसत () परख और साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइट परख (सीटीएल) टी सेल assays के बीच न्यूनतम का पता लगाने की दहलीज है. इस सारांश में अपेक्षाकृत सरल, सस्ता परख की विशाल संभावनाओं का केवल एक सीमित दृश्य प्रदान करता है. इस परख के संभावित अनुप्रयोगों के विस्तार जारी है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
Vanderbilt सीटीएसए 1 अनुदान RR024975 UL1 द्वारा अनुसंधान संसाधन, स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान के लिए राष्ट्रीय केन्द्र से हिस्से में समर्थित है. इस काम एनआईएच R01 83839 HL द्वारा वित्त पोषित किया गया था, R01 65744 ऐ.
Materials
A. Preparation of Media |
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B. Preparation of Tris Buffer |
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C. Materials necessary for ELISPOT analysis: |
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References
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