Summary
De mug middendarm en de speekselklieren zijn belangrijke in-en uitgangen voor vector ziekteverwekkers zoals Plasmodium falciparum en het dengue virus. Deze video toont de dissectie technieken voor het verwijderen van de middendarm en de speekselklieren van Aedes aegypti muggen.
Abstract
De mug middendarm en de speekselklieren zijn belangrijke in-en uitgangen voor ziekteverwekkers zoals Plasmodium parasieten en Dengue virussen. Deze video demonstreert protocol dissectie technieken voor het verwijderen van de middendarm en de speekselklieren van Aedes aegypti muggen.
Protocol
Ontleding van middendarm en speekselklier weefsels van muggen vereist de voorafgaande voorbereiding van 1x fosfaat gebufferde zoutoplossing (1X PBS)-oplossing en de verdoving van de muggen door het onderwerpen aan een temperatuur van 4 ° C, tot geïmmobiliseerd. De muggen blijven verdoofd door het plaatsen in een petrischaaltje dat is koud bewaard op ijs. Andere benodigde materialen zijn: licht microscoop uitgerust met een 10x objectief, pipet, fijne punt pincet, glazen schuif-, naald-tip sondes.
Middendarm dissectie
- Plaats een druppel 1X PBS op een glasplaatje gemonteerd onder de lichtmicroscoop.
- Overdracht van een mug op de voorbereide dia door steken van de mug thorax met een naald-tip sonde.
- Houd de mug met de sonde, gebruik de tang om de tweede tot de laatste abdominale segment te grijpen en trek uit de mug buik in een enkele beweging. De middendarm moet vast blijven zitten aan de geïmmobiliseerde thorax.
- Gooi de buik. Gebruik de tang om de middendarm los te maken van de thorax.
Speekselklier dissectie
- Plaats een druppel 1X PBS op een glaasje gemonteerd onder een lichtmicroscoop.
- Pick-up een mug door stabbling de thorax met een naald-tip sonde.
- Trek mug benen met behulp van uw vingers.
- Breng de mug op de dia.
- Verwijder de kop van de mug met behulp van pincet.
- Houd de mug thorax met de sonde, gebruik een andere sonde voorzichtig naar beneden druk op de thorax.
- De speekselklieren bevinden zich op de voorste deel van de thorax en kan worden geïsoleerd door middel van een naald-tip sonde en verbreken van de bijlagen die de klier te sluiten op de thorax. Intacte speekselklieren bestaan uit drie lobben: twee zijdelingse lobben en een mediale kwab.
