一个小鼠膀胱癌原位模型

Summary

膀胱肿瘤是建立在通过导管插入术，局部烧灼，和随后粘附癌细胞烧伤网站的微创时尚雌性小鼠。

Abstract

在这个简单的过程，是建立在膀胱肿瘤女C57小鼠，通过使用的导管插入术，局部烧灼，和随后的细胞黏附。他们的膀胱后transurethrally插管和排水，动物再次插管允许不进入膀胱的铂丝插入尿道或膀胱损坏。聚四氟乙烯导管作为绝缘体的电线，将进行电流进入膀胱，创建一个烧伤。电灼单位是用来提供2.5W的电线外露端，燃烧掉胞层，并为癌的细胞悬浮液中，通过随后的导尿，膀胱交付的附着位点。细胞仍然在膀胱90分钟，后导管和膀胱自然流失。通过超声监测肿瘤发展。特别注意的是导管技术在影随行。

Protocol

1。动物

1. 女C57BL/6J小鼠（ 小家鼠 ）验证传染性外寄生虫，寄生虫体内寄生虫和抗体，17小鼠病毒供应商在发货前。老鼠被安置在杜兰大学AAALAC认证的动物设施，实验动物的照顾和使用指南。
2. 具体来说，小鼠组（4-5小鼠/笼）安置在独立通风聚碳酸酯cageswith microisolation硬木床上用品的过滤器顶部。他们提供自由采食颗粒灭鼠食品和自来水。
3. 小鼠被允许在研究开始前的7天，以适应环境。

2。细胞

1. 小鼠移行细胞癌的细胞线MB49是用于生产的膀胱肿瘤。
2. 辅以10％小牛血清，100单位/ ml青霉素，100个单位/ ml链霉素的贝科的改良Eagle培养基培养细胞。
3. 文化是保持在37 ° C和5％的CO ₂与媒体变化，每两至三天。

3。原位肿瘤动物模型

滴入这里描述的膀胱肿瘤模型是由Gunther等人所描述的程序修改。

1. 麻醉诱导的2％异氟醚氧（MWI / VetOne，经络，编号，猫＃501017），并保持在0.75-1.25％。 （多种动物可以治疗的同时，将需要增加异氟醚的水平。）为预防角膜干燥，眼用人工泪液眼药膏润滑。保持身体的热量加热垫下的一纸悬垂。
2. 下背部的皮毛被裁剪，以促进与金属接地板上的接触，并剃光面积electroconduction凝胶涂层。
3. 每个鼠标然后分别放置在背recumbancy到一个金属接地板上，膀胱插管transurethrally一个润滑的24号，3 / 4英寸，针静脉导管使用与拆除钢丝。
4. 膀胱排出的尿液，和铂丝通过导管插入尿膀胱留下裸露的电线导管的两端 - 约2毫米的导管lumenal结束。铂金，因为氧化物质的电阻丝。
5. 一个2.5瓦的电流约0.5秒，然后应用膀胱电灼单位设置凝血接触线的外观部分。
6. 电线，然后移动到第二个位置在膀胱和另一个2.5瓦电荷。
7. 电线被删除，和100μLMB49细胞在1 × 10 ⁶细胞/毫升是通过导管注入膀胱通过1ml注射器的浓度。
8. 注射器的导管相连，以防止细胞悬浮液流出，插管小鼠是在麻醉状态下保持90分钟，让细胞附着烧伤网站。
9. 100-200μl无菌生理盐水的管理是通过IP注射恢复之前给每个鼠标。
10. 在潜伏期末导管和动物被允许恢复加热垫，直到扶正反射返回，在这一点的老鼠都返回自己的家乡笼。

4。超声

1. 肿瘤可增长3-5天前的小鼠进行超声检查膀胱，以监测肿瘤的生长。
2. 对于初次超声检查，动物麻醉后，如上面所述。小鼠放置在背recumbancy，腹部皮肤准备裁剪皮草。
3. 一个24号静脉导管插入transurethrally进入膀胱。此时，膀胱可排水和收集尿液作进一步的分析。
4. 100μL无菌生理盐水注入通过导管进入膀胱，以改善膀胱超声能见度。
5. 超声传导凝胶应用于腹部，超声检查，以评估膀胱壁及管腔。

5。代表性的成果：

肿瘤组织将开始出现后innoculation的3-5天。在我们的经验，在一组12只小鼠，50％或更多的常规膀胱内可检测的组织肿块（0.5 - 1.0μL，用V =π/ 6 · L · W · H）第五天。当使用MB的49细胞，肿瘤将继续增长和安乐死将由24天，如果得不到治疗的老鼠。建议安乐死，当老鼠成为昏睡或恶病质，显示竖起皮毛，hunching，无响应的行为，或者当他们失去其初始体重的20％。/ P>

肿瘤生长迅速，后达到200毫克以上^，3表面质量，因为在发展中国家的肿瘤细胞增殖速度比什么服务可以通过血管生成的血液供应，将有坏死的中心。通过hematurea的水平，这大概与快速发展肿瘤内血管生成，也可以间接监测肿瘤的进展。这是一贯指出，未经处理的荷瘤小鼠的尿液中含有14天的血。红血细胞的浓度增加，随着时间的推移，这些小鼠，收集尿液量减少。超过50毫克的肿瘤也可以相对轻松地摸到，通常14天innoculation。

Discussion

这种建立在雌性小鼠原位膀胱肿瘤的微创的方法也可以应用于其他类型的细胞比MB49，虽然不同的结果应当预见。当使用较少侵略性的肿瘤细胞，功率略有增加（使用0.5瓦的增量来建立新的最佳），将产生一个更适合肿瘤细胞附着的面积，和膀胱注入细胞孵育时间较长，将产生更大的金额细胞附着在烧伤网站（未发表数据）。虽然有些协议建议通过²电灼，提供10瓦的发电量应该被视为一个上限，也许可以完全避免。交付细胞浓度的增加，也可以用于其他类型的细胞时增加成功的机会。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57Bl/6J mice	Jackson Laboratory	000664	3-5-wk-old
Polycarbonate cages and ventilated rack	Lab Products	Super Mouse 750	327mm x 190mm x 143mm
Hardwood Bedding	Harlan Laboratories	Laboratory –grade SaniChips
Rodent diet	Harlan Laboratories	Rodent Diet 2019
IV Catheter	MWI Veterinary Supply	009231	24 G x ¾ in.
Electrocautery unit	Bovie Medical Corporation	Aaron 900
Ultrasound unit	Sonosite	180 Plus (Vet)
MB49 cell line	Wake Forest University Baptist Medical Center	N.A.
DMEM	Invitrogen	21063-029
Fetal Bovine Serum	Gemini Bio Products	100106 500A57B
Penicillin-Streptomycin	Invitrogen	15140-163