Summary
外吸用来衡量新生儿啮齿类动物脊髓的电生理记录电极的制造和使用示范
Abstract
使用新生儿啮齿类动物脊髓中枢模式发生器（CPG）的行为，可以研究神经设计电路和运动的发展。我们证明的方法来制造吸电极，用于检查中央人民政府的活动，或虚构的运动，在解剖啮齿类动物脊髓。被放置在人工脑脊液中的啮齿类动物脊髓和腹侧根绘制成吸电极。通过修改一个市售的吸电极的电极构造。较重的银线，是用来代替市售电极的标准线。为提高耐久性的塑料提示取代商业电极的玻璃尖。我们准备了手工绘制的电极和电极特定大小的管，允许的一致性和可重复性。数据收集，使用的放大器和neurogram数据采集软件。录音内执行一个法拉第笼，以防止机械和电气干扰，分别对空气表。
Protocol
隔离脊髓电生理记录可以揭示遗传和发育的变化的神经电路1。以前，我们表现出一个方法来解剖新生小鼠脊髓2。在这里，我们现在准备吸电极记录在孤立的 3个脊髓虚构运动有用的方法。
塑料管电极的尖端，可以得出一个手工非常精细的提示使用低温酒精灯3-5。塑料管材（PE90，粘土亚当斯Intramedic TM）举行了火焰软化成可塑性形式的油管。由于油管开始融化，变得更加透亮，它是从热源和两端轻轻拉开。从火焰中取出管的时机很重要，以确保塑料不会崩溃或分裂而正在起草。油管薄的部分是用刀片切到所需的内部直径，作为标本的年龄段线的水平决定的。为了便于放置油管O形圈，45 °切割油管用刀片粗末。一个密封圈和O形圈安装在粗末附加电极尖端电极桶。
为了让特定大小的电极，和避免的困难手，拉电极秘诀，电极可使用小管插入一个较厚的管材（PE90）。管材的长度是具体的录音设置的要求，是可变的。我们目前在我们的实验 1-3,5中使用的测量。一个聚四氟乙烯细管（宙斯，小零件）和一个PE90管材10厘米的长度1厘米的长度是用刀片切割。小管的两端应进行检查，以确保他们不会压碎或关闭。他们用昆虫针（精细科学的工具），可以打开。一滴粘合剂（巴顿焊接）被放在PTFE管的中点。 PTFE管和胶画到PE90 PE90管材管口吸。削减45 °油管粗末和套圈和O型圈连接，正如前面。
套圈和BNC接头拧开商业吸电极。 BNC连接器是在二甲苯中浸泡一小时，以去除蜡封。连接器，然后在水中漂洗，晒干。
一个低角度的侧端口必须在桶边。使用本生灯加热一根金属棒，并压入现有的枪管在低角度的侧孔。一个0.010英寸的银线（AM系统）15厘米长度被切断，在漂白水浸泡十五分钟。这样做是为了建立一个氯化银涂层，在第 6信号传导艾滋病。导线是用清水漂洗，晾干，然后到BNC接头的焊接。 BNC连接器及银线插入吸电极桶桶侧面的BNC连接器，以保持足够的房间。吸油管插入端端口2 - 3cm的。硅酮密封胶注入到每桶约2 - 3cm的。 BNC接头螺纹枪管向前推的密封胶的电极。
现在到前端的电极螺纹电极尖端。热缩管，也可以从侧面端口添加到加强吸线。
电极安装附加磁场的立场，并放在附近的录音碟micromanipulators。 BNC同轴电缆连接到一个有线放大器探头。放大器连接到一个适配器（Polyview）是在数据采集软件（Polyview）的PC电脑连接到模拟到数字存储卡（美国国家仪器）。
录制时的电生理数据，它是必要的，以消除一切外界干扰。录音盘，放大器，和头部阶段都被放置在一个法拉第笼，以防止电气和机械干扰，分别对空气表。
代表性的成果：
图1。一个市售的吸电极可以修改加入较重的计银线和一个酒精灯上的一个塑料尖，是手工绘制，或特定大小与市售塑料管材建造。此外，石蜡密封胶是取代硅填缝密封胶更耐用。
图2：一个涉及到空气表吸电极示意图（机械隔离），法拉第笼（电气isolati上），放大器和计算机。应该指出的是，录音盘和第二个理由是引用到空气中的表和法拉第笼参考地面。
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Discussion
可以研究使用孤立的啮齿类动物脊髓神经系统的发育。在神经递质的存在，虚构的运动可以产生脊髓在图案的电气活动 1,3形式。这些节奏的阵阵生产0.2〜0.5 Hz时，在左，右和屈，伸交替图案。在不同的发展阶段，这项活动的稳定性和模式有所不同1。基因突变，也可以扰乱了这一活动的 3,5,7的图案。这项活动的转基因和发育的研究提供了组织的中枢模式产生电路的见解和告知的神经系统发育的研究，一般。
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Disclosures
没有利益冲突的声明。
Acknowledgments
塞缪尔百福是在索尔克生物研究所的基因表达实验室教授和霍华德休斯医学研究所研究员。这项工作是由克里斯托弗和Dana里夫基金会的支持。乔Belcovson，肯特Schnoeker和迈克沙利文在索尔克研究所的多媒体资源提供援助，摄影和剪辑。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | BD Biosciences | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | |
| Adhesive | JB Weld | ||
| Adhesive: Silicone caulk | |||
| Solder and soldering iron | |||
| Bleach | |||
| Xylene | |||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | ||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Magnetic Stand | Narishige International | GJ-8 | |
| Micromanipulator | Narishige International | MN 151 | |
| Miniboard (Headstage) | Grass Technologies | F-15EB/B1 | |
| Polyview Adaptor Unit | Grass Technologies | PVA 8 | |
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Technologies | 15LT | |
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | |
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
References
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W.
- Gallarda, B. W. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, 233-236 (2008).
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- Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
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