우리는 비대칭 수용체 - 패턴 기판에서 셀을 회전 궤도를 관찰하고 분석하기 위해 프로토콜을 설명합니다. 결과 데이터는 레이블이없는 세포 분리 및 분석을위한 수용체 - 패턴 기판의 엔지니어링하는 데 유용합니다.
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이 논문에서
요약
초록
비대칭 수용체 패턴에 압연에 의해 흐름에 직교 세포의 측면 변위는 세포 1 라벨이없는 분리 및 분석을위한 새로운 장치의 개발을위한 기회를 제공합니다. 이러한 장치는 지속적인 흐름 분리, 또는 다른 셀 또는 phenotypes 수용체 표현의 수준을 구별하기 접착력을 조절 수용체 패턴 측면 변위를 사용할 수 있습니다. 수용체 - 패턴 기판의 셀 압연 궤도의 본질을 이해하는 것은 기판과 같은 장치의 설계 기술이 필요합니다.
여기, 우리는 세포 압연 접착력 2를 지원 비대칭 수용체 패턴에 셀 압연의 탄도를 연구를위한 프로토콜을 보여줍니다. P - selectin 수용체의 잘 정의된, μm의 규모 패턴이 흐름 챔버에 통합되었습니다 골드 코팅 슬라이드에 microcontact 인쇄를 사용하여 가공되었습니다. PSGL - 1 리간드 3 표현 HL60 세포 무늬 라인의 들판을 가로질러 거듭하고 거꾸로 명시야 현미경에 시각되었습니다. 세포는 측면 편향 1 결과 패턴의 경사 가장자리를 따라 굴러 및 추적. 각 세포는 일반적으로 패턴 가장자리를 따라 일정한 거리 (모서리 추적 길이로 정의)를 압연 가장자리에서 분리하고, 다운 스트림 패턴 reattached. 이 분리가 어려운 흐름 챔버의 출구 입구에서 세포의 전체 궤적을 추적할 수 있습니다 있지만, 입자 추적 소프트웨어는 그들이 하나의 수용체에 이동하는 때 시간 동안 세포의 압연의 탄도를 분석하고 항복하는 데 사용된 - 패턴 라인. 궤도는 다음 셀 롤링 판매율과 다른 패턴으로 각 셀의 가장자리 추적 길이의 배포판을 얻기 위해 조사되었다.
이 프로토콜은 수용체 패턴에 세포 회전 궤도를 quantifying과 패턴 각도 및 전단 응력 등이 엔지니어링 매개 변수를 관련된 유용합니다. 이러한 데이터는 레이블이없는 세포 분리 및 분석을위한 microfluidic 장치의 설계에 유용합니다.
프로토콜
1. 롤링 HL60 세포
1.1. 문양의 기판 제작.
- 골드 코팅 유리 슬라이드에 PEG 분자의 자기 조립 monolayers을 (샘스) 교체하기 위해 microcontact 인쇄 (μCP) 4-7 사용 : α = 10의 경사 각도와 수용체의 패턴을 정의 microcontact 인쇄 polydimethylsiloxane (PDMS) 우표를 조작 SU - 8 성형 공정에 의해 °. 20 분 피라 냐는 물고 기지 너한테 솔루션 (황산의 혼합 3시 1분 30 % 과산화수소로)와 금 표면을 청소하고 사용하기 전에 24.5 ° C에서 풍부한 디 물로 표면을 씻어. 에탄올의 5mM PEG 솔루션 잉크 PDMS 스탬프를. 20 분 동안 공중에 우표를 건조시킵니다. 부드럽게 40 초에 대한 황금의 표면에 도장을 넣고 금 표면과 스탬프 사이 좋은 연락 방법이 있는지 확인하십시오. 초과 압력이 필요하지 않습니다. 에탄올로 표면을 씻어 N 2의 흐름에 따라 그것을 건조.
- 24.5에서 3 시간 동안 재관류 챔버 (전자 현미경 과학)를 사용 ° C 패턴 P - selectin과 함께 남아있는 지역. P - selectin 솔루션 (15 μg / DPBS에 ML) 내에 기판을 품어 풍부한 DPB....
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토론
우리는 microcontact 인쇄 2를 사용 가공 비대칭 수용체 - 패턴 표면에 세포 회전 궤도를 조사하기 위해 프로토콜을 설명합니다. PEG와 P - selectin 영역 사이의 명확한 대비를 보여주는 패턴 표면의 광학 현미경 이미지는 스탬핑이 성공적인지 여부를 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 샤프, 직선 가장자리는 스탬핑이 잘 수행하면 볼 수 있습니다. 하드 스탬프 누르면 패턴의 정밀도를 제한 스탬프 변형이 발생할 수 있습니다. 물결 모양 가장자리는 잉크 농도가 너무 높으 또는 스탬핑 시간이 너무 긴 경우 얻을 수 있습니다. 우표와 표면 사이의 접촉 불량은 우표의 크기 (<0.5 cm 2) 너무 작은 경우가 아닌 균일한 PEG 패턴 발생합니다. 비 - 신선한 잉크 솔루션 때문에 P - selectin을 passivate 감소 능력의 PEG - 패턴 영역에서 압연 세포가 발생할 수 있습니다. 실제 경사 각도가 표면과 상호 작용하지 않습니다 자유 흐르는 세포의 패턴과 궤도의 영상.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 프로젝트는 MIT에서 기술 혁신에 대한 Deshpande 센터 (RK와 JMK)와 화학 및 생물 분판 프로그램을 통해 RK로 NSF 경력 보너스 0,952,493에 의해 지원되었다. 우리는 솔저 Nanotechnologies (외설) 및 시설의 사용을위한 MIT의 마이크로 기술 연구소 (MTL)에 대한 연구소 주셔서 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 인간 전골수성 백혈병 세포 | ATCC | CCL-240 | HL60 세포 |
| 금 코팅 유리 슬라이드 | EMF | TA134 | 금 슬라이드 |
| (1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol) | Sigma-Aldrich | 674508 | PEG |
| 재조합 인간 P-selectin | R&D Systems | ADP3-050 | P-selectin |
| 소 혈청 알부민 | Rockland Immunochemicals | BSA-50 | BSA |
| Dulbecco’s 인산염 완충 식염수 | Mediatech, Inc. | 21-030 | DPBS |
| 황산 | Sigma-Aldrich | 339741 | |
| 과산화수소 | Sigma-Aldrich | 316989 |
참고문헌
- Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors. Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).
- Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R.
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재인쇄 및 허가
