Summary
В этом видео мы опишем метод для живого изображения ячейки асимметричного деления органа чувств и клетки-предшественники клеток эпидермиса в неповрежденных
Abstract
С момента открытия зеленый флуоресцентный белок (GFP), произошло революционное изменение в использовании живого-клеточной визуализации как инструмент для понимания фундаментальных биологических механизмов. Поразительные успехи были особенно очевидны в дрозофилы, чей обширный инструментарий мутантов и трансгенных линий обеспечивает удобную модель для изучения эволюционно-сохраняется развития и клеточных биологических механизмов. Мы заинтересованы в понимании механизмов, контролирующих клеточное судьба спецификации взрослых периферической нервной системы (ПНС) у дрозофилы. Щетина, которые покрывают головы, грудной клетки, живота, ног и крыльев взрослой мухи отдельных mechanosensory органов, и были изучены в качестве модельной системы для понимания механизмов Notch-зависимых решений ячейки судьбы. Сенсорные органы предшественника (СОП) клетки microchaetes (или небольшая щетина), распределены по всему эпителия куколки грудной клетки, и задаются в течение первых 12 часов после начала pupariation. После уточнения, SOP клетки начинают делиться, разделения определитель ячейки судьба Numb одной дочерней клетки во время митоза. Numb функции клеточных автономных ингибитор сигнального пути Notch.
Здесь мы покажем способ следовать динамики белков в СОП клетки и ее потомства в течение нетронутыми куколки грудной клетки, используя комбинацию тканеспецифические Gal4 водителей и GFP-меткой слитые белки 1,2. Этот метод имеет преимущество перед фиксированным ткани или культивированный эксплантов, поскольку он позволяет проследить все развитие органов у спецификация нейронных предшественником роста и терминальной дифференцировки органа. Поэтому мы можем прямо коррелируют изменения в поведение клеток к изменениям в терминальной дифференцировки. Более того, мы можем объединить жить метод визуализации с мозаичными анализа с репрессируемый маркер ячейки (MARCM) систему оценки динамики меченых белков митотического СОП под мутанта или дикого типа условий. Используя эту технику, мы и другие показали, роман взглянуть на регулирование асимметричной деление клеток и контроль Нотч сигнализации активации в СОП клеток (примеры включают в себя ссылки 1-6,7, 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
- Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
- Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
- Emery, G., Knoblich, J. A.
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
- Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
- Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
- Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
- Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
- Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
- Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
- Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).
