Summary
الخلايا القاتلة الطبيعية هي مجموعة صغيرة من الخلايا الليمفاوية. هنا نبين كيفية عزل هذه الخلايا من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من تقنيات StemCell. ويتم الحصول على الخلايا قادرة على البقاء وبمنأى عن الأجسام المضادة ، وبالتالي على استعداد لاستخدامها في عدد من الإجراءات.
Abstract
الطبيعية القاتلة (ناغورني كاراباخ) الخلايا الليمفاوية كبيرة السامة للخلايا الحبيبية التي تنتمي إلى نظام المناعة الفطرية وتلعب أدوارا رئيسية في القتال ضد السرطان والالتهابات ، ولكن هي أيضا متورطة في المراحل الأولى من الحمل ورفض الزرع. هذه الخلايا موجودة في الدم المحيطي ، والتي يمكن عزلها. يمكن عزل الخلايا باستخدام اختيار إما إيجابية أو سلبية. لاختيار إيجابي نستخدم الأضداد الموجهة إلى علامة السطحية موجودة فقط على الخلايا التي تهم لاختيار سلبية في حين نستخدم خليط من الأجسام المضادة التي تستهدف علامات موجودة على سطح الخلايا ولكن كل الخلايا ذات الاهتمام. يقدم هذا الأسلوب الأخير في الاستفادة من ترك خلايا مصلحة خالية من الأجسام المضادة ، مما يقلل من خطر تنشيط الخلايا غير المرغوب فيها أو differenciation. في هذا البروتوكول عن طريق الفيديو نظهر كيفية فصل الخلايا القاتلة الطبيعية من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من التقنيات RosetteSep StemCell. الإجراء ينطوي على الحصول على الدم المحيطي الإنسان (تحت المراجعة المؤسسية التي أقرها المجلس التنفيذي لبروتوكول حماية الموضوعات البشرية) وخلطها مع مزيج من الأجسام المضادة التي من شأنها ربط علامات غائبا عن الخلايا القاتلة الطبيعية ، ولكنها موجودة على كل الخلايا وحيدة النواة الأخرى الموجودة في الطرفية الدم (مثل الخلايا اللمفية تي ، وحيدات...). الأجسام المضادة الموجودة في الكوكتيل هي مترافق إلى الأجسام المضادة الموجهة إلى glycophorin وكريات الدم الحمراء في. وبالتالي فإن جميع الخلايا غير المرغوب فيها وتكون خلايا الدم الحمراء محاصرين في المجمعات. ثم يتم تخفيف المزيج من الكوكتيل الدم والأجسام المضادة ، overlayed على التدرج Histopaque ، وطرد. ويمكن جمع الخلايا القاتلة الطبيعية (> 80 ٪ نقية) في واجهة بين Histopaque والبلازما المخفف. زجاجات مماثلة متوفرة للتخصيب السكان خلية أخرى ، مثل الخلايا اللمفية تي الإنسان.
Protocol
يتم تضمين بروتوكول مفصلة مع كل العزلة روزيت كوكتيل سبتمبر ومتاحة على الانترنت على موقع التكنولوجيات StemCell 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ويمكن عزل الخلايا باستخدام هذه التقنية فصل السكان الى مزيد من مجموعات أخرى مختلفة باستخدام العازل الخلية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | Stem Cell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure. | ||||
References
- Procedures and instruction manuals. , http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.
