Summary
دالة فاصل الدهنية (FSL) يبني يسمح تعديل خصائص سطح الخلايا الحية وvirions دون فقدان للحيوية. الأسلوب يتطلب اتصال بسيط فقط من التوصل إلى حل بناء FSL مع خلية / الفيريون وعفوية ومستقرة التأسيس سطح يحدث.
Abstract
القدرة على تعديل / تصور السطوح البيولوجية ، ومن ثم دراسة الخلية المحورة / الفيريون في طائفة من في المختبر والمجراة في بيئات ضروري لكسب مزيد من التبصر في وظيفة معينة أو جزيئات الكيان برمته. وتقتصر عموما دراسات بيولوجية لتعديل السطح الهندسة الوراثية للكائن أو مرفق من الأنصاف التساهمية الكيميائية لسطح الخلية 1،2. لكن هذه التقنيات التقليدية لكشف الخلية المتفاعلات الكيميائية ، أو أنها تتطلب معالجة كبيرة لتحقيق النتائج المرجوة ، مما يجعلها مرهقة ، وأنها قد تؤثر أيضا على البقاء دون قصد / ظائف الخلية المحورة. مطلوب طريقة بسيطة لتعديل دون ان تسبب أذى على سطح الخلايا.
في الآونة الأخيرة تقنية جديدة ، فقد طرحت كودي تكنولوجيا مجموعة من يبني رواية تتألف من ثلاثة عناصر : رئيس مجموعة وظيفية (F) ، هل A (S) وذيل المادة الدهنية (L) ويعرف وظيفة ، أو الدهن ، فاصل FSL constructs3. هل تم تحديد (S) لتوفير بناء هذا هو التشتت في الماء ، ولكن سيكون عفويا وستابلي تدرج في غشاء.
FSL بناء الأنصاف وظيفية (F) حتى الآن وتشمل مجموعة واسعة من ساتشاريديس الدم بما في ذلك المحددات المتعلقة المجموعة ، والأحماض السياليك ، السكريات hyaluronan ، fluorophores ، البيوتين ، radiolabels ، ومجموعة من الببتيدات 12/03. وقد استخدمت يبني FSL تعديل في الأجنة ، الحيوانات المنوية ، الزرد ، والخلايا الظهارية / بطانة الرحم ، وخلايا الدم الحمراء ، وvirions لإنشاء نظم مراقبة الجودة والألواح التشخيص ، لتعديل خلية التصاق / تفاعل / الانفصال / الشلل ، وعليها في المختبر وفي التصوير من الخلايا الحية / virions 12/03.
عملية تعديل الخلايا / virions هي عامة وبسيطة للغاية. الإجراء الأكثر شيوعا هو احتضان خلايا (في وسائل الإعلام الحرة الدهن) حلا لFSL يبني لمدة 1-2 ساعات في 37 درجة مئوية 40-10. أثناء الحضانة وFSL يبني تلقائيا تدرج في الغشاء ، واكتمال العملية. غسل اختيارية. وتعرف الخلايا المعدلة ويبني FSL kodecytes 6-9 ، في حين يتم virions kodevirions 10.
FSL يبني كما استخدمت الحقن المباشر وkodecytes / kodevirions في النماذج الحيوانية التجريبية 7،8،10. جميع kodecytes / kodevirions يبدو أن تحتفظ حيويتها الطبيعية وظيفة في حين كسب وظيفة جديدة من طراز F 7،8،10،11 شاردة.
مزيج من تشتت حيويا في وسائل الإعلام ، إلى إدماج عفوية أغشية الخلايا ، وسمية منخفضة واضح ، يجعل FSL يبني أدوات بحثية قيمة لدراسة الخلايا وvirions.
Protocol
بروتوكول يلي وصف الإجراء عامة لادراج يبني FSL (الشكل 1) في الأغشية البيولوجية. عن البساطة والبروتوكول تشير فقط إلى الخلايا (kodecytes) ، والتي هي عند تركيز 100 ٪. شريطة أن ومع ذلك ، فإن الخلايا يرادف مصطلح virions (kodevirions) أو الكائنات الحية أو الهياكل الخلوية وتركزها في مخفف ليست مهمة ، هي دائما ثابتة بين الاختبارات ، وضوابط ، والتجارب. مع خلايا الدم الحمراء حجم الخلية معبأة هو عادة 80 ٪ ، ولكن مع virions والأجنة والخلايا الأخرى التي عادة ما هو أقل من 1 ٪. الأسلوب هو قوي جدا وسوف تنتج الأغشية تعديل عند استخدامها من قبل أي من الاختلافات ، ولكن سوف تكون هناك حاجة لتحسين وصقل توحيد درجة من التعديل المطلوب لتطبيقات محددة.
1. إعداد التركيبات FSL
- لتحضير الأوراق المالية بناء FSL إعادة الحل الأول للمنتج FSL الجافة (الجدول 1) عن طريق إضافة 1.0mL من مخفف (أو كما هو محدد في ادخال المنتج) إلى القارورة المنتج. يصوتن لفترة وجيزة (30 ثانية). وهذا يعد حلا 1mg/mL ، والتي يمكن aliquoted في حاويات معقمة ميكرولتر 100 وتخزينها على 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد ، أو تجميدها لمدة تصل إلى 3 أشهر.
- العمل على إعداد الحلول لبناء FSL الإدراج ، قبل فترة وجيزة لاستخدام يصوتن (30 ثانية) محلول المخزون إلى التجانس أي المذيلات. تمييع بناء FSL في المخزن (ويفضل أن لا تحتوي على الدهون أو المواد مسعور جدا) إلى التركيز المطلوب أو أكثر من مجموعة وإذا رغبت في ذلك.
ملاحظات :
- وسوف يبني FSL إدراج عادة في الخلايا التي تحتوي على الدهون في وسائل الاعلام ولكن لن تتطلب عادة بقدر تركيزات 50X FSL أعلى مما لو كان العمل في برنامج تلفزيوني أو وسائل الإعلام الأخرى الدهون الحرة.
- فإن مجموعة العمل التخفيفات تعتمد على التطبيق ، وحساسية طريقة الكشف ، ونوع من بناء FSL ، ودرجة من التعديل المطلوب. وعادة ما تتراوح بين التخفيف يكون بين 1-50 ميكروغرام لكل من FSL مل من مخفف ليبني FSL الكربوهيدرات و100-100 ميكروغرام / مل ليبني FSL أخرى مثل fluorophores والبيوتين.
- إذا كان إعداد الإدراج منظفة تحتوي على عدة FSL بناء ، إضافة ببساطة يبني معا في نفس مخفف بتركيز عملهم العادية. إذا كان واحد هو بناء على تركيز أعلى بكثير من آخر ، قد تكون هناك حاجة إلى بعض التعديلات (الزيادة) في تركيز أقل للبناء. بدلا من ذلك يمكن أن تضاف بنيات بالتسلسل ، ويفضل مع التركيز على أعلى بناء الأول ، تليها أقل.
- قد FSL تركيزات بناء فوق 1000 ميكروغرام / مل إدخال كميات كبيرة من الدهون في غشاء الخلية ، ويمكن أن تغير شكل الخلية أو جعله أكثر عرضة للتحلل.
- يجب أن يتم تخزين FSL حلول العمل في بناء 2-8 درجة مئوية وتستخدم في غضون بضعة أيام.
- يمكن أن تضعف البنى FSL في المياه ولكن سوف يكون تخفيض الاستقرار ويجب أن تستخدم في غضون ساعات. إذا كان إدراج حزمة يحدد المياه كما سيتم إعادة مخفف المنتج في قارورة تحتوي أيضا على أملاح (على النحو المحدد في إدراج الحزمة).
2. ادراج أنشئ FSL (ق) في الأغشية
- أول غسل الخلايا للFSL تعديل خالية من الدهون غير منضم بواسطة الطرد المركزي واستخدام وسائل الإعلام في برنامج تلفزيوني أو الدهن الحر خلية كحل يغسل.
- حزمة الخلايا أو تعليق في 100 ميليلتر من مخفف.
- في نفس الوقت إعداد الضوابط التي ينبغي من الناحية المثالية على حد سواء خلايا معدلة (المحتضنة مع PBS بدلا من حل FSL) و / أو الخلايا المعدلة مع بناء FSL حميدة ولكن ذات الصلة.
- إضافة 100 ميكرولتر من تمييع الحل المناسب للFSL (تحتوي على 1 أو أكثر بنيات FSL) إلى الخلايا واحتضان لمدة 1-2 ساعات عند 37 درجة مئوية. ويمكن الحصول على نتيجة مشابهة من قبل 6 ساعات الحضانة عند 25 درجة مئوية أو بين عشية وضحاها (18 ساعة) عند 4 درجات مئوية -- من المستحسن خلط كل بضع ساعات في حال استخدام الايقاف الخلية الثقيلة.
- يغسل (اختياري) مرتين مع برنامج تلفزيوني أو وسائل الإعلام لإزالة أي FSL مجانا يبني ويعد نظام التعليق المناسب.
ملاحظات :
- يمكن أن تستخدم لتعليق مخفف الخلايا وسائل الإعلام أن تكون ثقافة الخلية ، برنامج تلفزيوني ، وحلول التخزين المحمولة ، الخ ، ولكن يفضل أن يكون من دون الدهون (مثل الجنين مصل العجل) أو المنظفات (مثل توين).
- ويمكن استخدام أحجام مختلفة (من 100 ميكرولتر) نسب (1:01 من الخلايا / حل FSL) أو شروط الحضانة من الوقت ودرجة الحرارة وفرت نفس النسبة ، والتركيز ، وحجم وتستخدم للحصول على نتائج يمكن استنساخه.
3. المناولة والتخيل
- ويمكن بمجرد الانتهاء من عملية التعديل FSL يتم تخزين في kodecytes 4-8 درجة مئوية في وسائل الإعلام الحرة الدهن أو استخدامها.
- Kodecytes kodevirions وتتصرف عموما نفس خلايا معدلة / virions ويمكن هندلإد وينظر تحت أنظمة الاختبار العادي (المجهري ، الأمصال ، التدفق الخلوي ، الخ). لديهم عادة أي متطلبات خاصة باستثناء تجنب المذيبات / المنظفات / الدهون التي يمكن أن يبني أزل الدهن من الأغشية.
ملاحظات :
- وسوف يبني البقاء في غشاء الخلايا الخاملة ، مثل خلايا الدم الحمراء ، إذا تخزين الدهون في وسائل الإعلام الحرة لحياة الخلية. سيكون في الخلايا النشطة مع أغشية تكون استوعبت يبني ومءيض ، بمعدل تعتمد على النشاط غشاء الخلية.
- وعادة ما تحتوي على خلايا ميتة على مستويات عالية من البنى FSL ، ويمكن استخدام هذه الخلايا لفصل غير قابل للحياة من خلايا قابلة للحياة.
- إذا تم تخزين kodecytes (أو المستخدمة في الجسم الحي) في وسائل الإعلام التي تحتوي على الدهون / البيئات ، مثل بناء المصل / البلازما وأزل ببطء من الغشاء على مدى ساعات أو أيام ، اعتمادا على درجة الحرارة وتركيزات الدهون / التراكيب.
4. ممثل النتائج :
- نتائج ممثل التالية تعتمد على بناء المستخدمة (الجدول 1) ، وتركيزه إدراج وحساسية وخصوصية نسبية للنظام لكشف (ق). عموما فإن جميع البنى FSL إدراجها في الخلايا بعد 1 ساعة ولكن الظروف المثلى سوف تحتاج إلى أن تنشأ في كل حالة.
- ويمكن استخدام البنى FSL لتسمية خارج مجموعة متنوعة من الخلايا الحية 3-9،11،14. في الأمثلة هو مبين في الشكل كانت تستخدم 2 أجنة في مراحل مختلفة (كما هي الخلية الهشة) ، ولكن يمكن أيضا خلايا أخرى تسمى (الشكل 3) أو يلفها virions (الشكل 4) يكون. FSL - فلوريسئين يسمح لوضع العلامات مباشرة من السطوح (الشكلان 2-4) ، في حين FSL - البيوتين وغيرها من البنى FSL قد يتطلب استخدام نظام الكشف الثانوي (عادة أفيدين / أضداد / lectins) لاظهار وجودهم (الأرقام 5) .
- يمكن تركيبها مجموعة علامات دم خصوصية الإنسان أو الحيوان إلى الخلايا ، بما في ذلك خلايا الدم الحمراء 4-9 (الشكل 6). كما مبلغ FSL بناء على kodecyte هو السيطرة عليها واستنساخه 4-6 ، يمكن إجراء kodecytes عن الكميات الأضداد (الجدول 2 والشكل 6). المصدر الفعلي للخلايا ليست مهمة ، فإنها يمكن أن تكون أي نوع ، أو حتى من نفس الأصل كمصدر للجسم ، وبالتالي ضمان على مستضد الوحيد هو أن يتفق عرضه 7،8 FSL (الشكل 6).
الجدول 2. التفاعلات المصلية ممثل الثلاثة المختلفة FSL - A (الثلاثية) kodecytes اختبارها ضد الخلايا الحمراء من التخفيفات وحيدة النسيلة المضادة. أنتجت 50 ميكرومتر من حل FSL - A (الثلاثية) عندما حضنت مع حجم مساو من الخلايا الحمراء يا جماعة قوية وإيجابية مستضد الخلايا ، والتي يمكن اكتشافها من خلال التخفيف من 1:512 وحيدة النسيلة المضادة. في 5 -- و 10 أضعاف أقل FSL - A (الثلاثية) التي تنتج حلول kodecytes مع مجموعة دم أقل تعبير مستضد.
الشكل 1. نظرة عامة FSL بناء. وكأنه يبني FSL زهرة تتكون من ثلاثة عناصر رئيسية. يمكن للرئيس وظيفية (F) في حالة بناء FSL تكون مجموعة متنوعة من مختلف الفئات الوظيفية بيولوجيا ، وهو هل (S) مصممة للحث على المباعدة بين الولادات F بعيدا عن غشاء ، وتحسين المياه وتشتت تكون غير المتفاعلة مع المصل ، في حين أن الدهن diacyl يسمح للبناء لدمج عفويا الى السطوح. (I) FSL - GB3 مع مجموعة الدم 3 غيغابايت (أو ف ك) ثلاثي السكاريد Galα4Galβ4Glcβ حاتمة. (II) FSL - A (الثلاثية) مع مجموعة دم حاتمة ثلاثي السكاريد GalNAcα3 (Fucα2) Galβ. (ثالثا) FSL - فلوريسئين. (رابعا) FSL - البيوتين مع شاردة واحد F البيوتين. المجموعة الفنية للهياكل في الثالث ومترافق - I إلى مشتق من أديبات تنشيط dioleoylphosphatidylethanolamine (مخدر) بينما الرابع هل هو هيكل carboxymethylglycine - أديبات القائمة.
الشكل 2. المسمى FSL - أجنة الفئران فلوريسئين. جميع الصور هي من الأجنة الحية التي وصفت بها عند المنطقة الشفافة (ZP) وسليمة (أي بناء FSL مرت ZP لتسمية الجنين داخل البيت). صور من الأول إلى الرابع من ZP هي خالية من المفرج عنهم من أجنة ZP مع وضع العلامات مع حمض آخر tyrodes FSL - فلوريسئين. تلطيخ متطابقة يحدث بغض النظر عما إذا كانوا أجنة FSL مع تعديل ZP سليمة أو خالية ZP. وصفت مباشرة مع أجنة FSL - فلوريسئين ، من قبل ساعة 2 37 درجة مئوية الأسلوب في المصل وسائل الاعلام الحرة خلية ثقافة ، وغسلها ومن ثم ينظر تحت المجهر مضان. (I) ZP اطلاق سراح اثنين من خلايا الجنين الفئران ، وتبين أيضا الكلاسيكية مكثفة تلوين الجسم القطبي. (II - III) ZP حرة أربع خلايا الأجنة والخلايا eight الفئران ، سواء تلطيخ غامضة تظهر الخلايا التي هي عمومياتIDE الطائرة المجهر التركيز. (رابعا) ZP 16 خلية الجنين مجانا الفئران. (V) ZP سليمة أجنة الفئران الكيسة (D4 - D5) حيث وصفت كلا من الجنين وزونا.
الشكل 3. FSL - فلوريسئين والزرد 14. (I) Microangiography على يرقات HPF 52 الزرد (آخر ساعة الإخصاب) حقنه مباشرة في الدورة الدموية مع FSL - فلوريسئين. اتسخت الأوعية الدموية الزرد. (II) تم إنشاؤها FSL - فلوريسئين الكلى خلايا الأنسجة اسماك الزرد غير متجانسة (ZK kodecytes) فيفو السابقين ثم الصغرى تحقن في الدورة الدموية للاسماك الزرد 52 HPF المتلقي. وفي الملاحظات المجراة من kodecytes ZK أدلى 2 ساعات بواسطة الحقن آخر من التصوير الأوعية الدموية تحت مضان مع مرور الزمن المجهري. أظهر شريط فيديو هو إطار واحد مع الخلايا الكبيرة التي تسير بخطى بطيئة أو غير متحركة (المشار إليها مع السهام البرتقالي) وسرعة نقل الخلايا (الصور غير واضحة بسبب الحركة -- وأشار مع السهام الخضراء). الوسم يسمح في الوقت الحقيقي في المراقبة المجراة من السلوك وbiodistribution في kodecytes ZK. (ثالثا) تحققت من امتصاص عن طريق الفم FSL - فلوريسئين بغمر الأجنة الزرد في FSL - فلوريسئين تحتوي على وسائل الاعلام لمدة تصل إلى 5 أيام. وقد تحقق من خلال نقل الأجنة الغسيل في وسائل الإعلام التي لا تحتوي على ثوابت FSL (مطلوب ما لا يقل عن 6 ساعات ولكن يمكن لعدة أيام). (الثالث ألف) الحقل المجهري برايت من الزرد FSL - فلوريسئين معاملة المقابلة لصورة مضان المتاخمة (IIIB). ويقع تفضيلي fluoresence في الأمعاء. لم يلاحظ أي تلوين في الأجنة السيطرة غير المعالجة (وIVA IVB).
الشكل 4. FSL - فلوريسئين توسيم virions 10 VSV وH1N1. (I) وصفت مباشرة فيروس التهاب الفم الحويصلي (VSV) مع 10 ميكروغرام / مل FSL - فلوريسئين لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية ، يليه تحديد بارافورمالدهيد مع 4 ٪ ثم التدفق الخلوي. لم يكن مطلوبا تنقية kodevirion VSV العلامات FSL آخر. (II) التدفق الخلوي للخلايا الخصية الخنازير المصابة مع الإنسان وRico/8/1934 بورتو / (H1N1) المسمى kodevirions باستخدام FSL - فلوريسئين. وتعتبر خلايا مصابة مثل خط أسود في حين التحام kodevirion H1N1 مع نتائج ST الخلايا في خلية فلوري (خط أحمر).
الشكل 5. FSL - البيوتين الخلايا المسمى والتصور لاحقة عبر أفيدين المسمى 7،8. وصفت أول كل الخلايا مع FSL - البيوتين : 1 ساعة عند 37 درجة مئوية ، وغسلها ثم تفاعلت مع fluorophore المسمى أفيدين ، وغسلها والرطب منصة للفحص المجهري مضان. (I) صورة جمعت مبائر من الكيسة جنين الفئران. (II) وسط شريحة مبائر الجنين من الصورة السابقة. (ثالثا) الحيوانات المنوية حية متحركة الإنسان -- عدم وضوح يحدث نتيجة لحركتهم. (رابعا) الثابتة (آخر بارافورمالدهيد 4 ٪ الإدراج) الحيوانات المنوية البشرية. (V) كرات الدم الحمراء الإنسان. (سادسا) الثابتة (4 ٪ بارافورمالدهيد قبل الإدراج) RL95 سرطان بطانة الرحم البشري. (سابعا) RL95 بطانة الرحم محلول سرطانة الخلايا البشرية الخط. (الثامن) بيوتين RBC kodecytes وحظ في عينة الدم المأخوذة 2 ساعة بعد التسريب في الوريد مع kodecytes (VIIIa) الذي يمثل حقل ينظر تحت المجهر الضوئي في حين أن (VIIIb) هو نفس الحقل ينظر تحت مضان ، وتحديد kodecytes الموجودتان في الميدان من رأي. ويمكن احتساب نسبة kodecytes إلى خلايا غير المسماة يمكن استخدامها كمؤشر للبقاء على قيد الحياة. (التاسع) لايف الإنسان kodecytes البيوتين بطانة تصور ملزمة لavidinylated الخرز.
الشكل 6. FSL الكربوهيدرات لإضافة علامات فئة الدم عن التنميط المصلي. (I) تم إنشاؤها الإنسان الخلايا الحمراء kodecytes جليلي مع تركيز مجموعة من FSL - جليلي (500 ميكروغرام / مل) واختبار المصل ضد التخفيفات الإنسان. خلايا الدم الحمراء الإنسان لا تحدث بشكل طبيعي مع مستضد جليلي مستضد أجنبي. ويمكن استخدام مثل هذه kodecytes إلى مستويات كمية من الأجسام المضادة في مصل الدم. في هذا المثال تم تحديد الجهات المانحة لديها عيار مكافحة جليلي من 1:32. (II) يمكن من خلال خلق kodecytes مع تناقص مستويات FSL ("عيارات المستضد") ، وهو مستوى المستضد الأمثل للكشف عن الأجسام المضادة يحدد (في هذا المثال لو أ). يمكن إنشاء خلايا فقط تعطي نتيجة إيجابية عند مستوى يتجاوز عيار الأضداد محددة. مستوى المستضد FSL المطلوبة لإعطاء نتيجة إيجابية يعتمد على مدى الكشف عن نوعية ومستوى الأجسام المضادة. لمستضدات الكربوهيدرات ، فإن الحل FSL من 100 ميكروغرام / مل نتيجة عادة في رد فعل ايجابي قوي. (ثالثا) تم تعديل مجموعة O الإنسان خلايا الدم الحمراء لديهم مستوى معين من ألف نملةIGEN (A kodecytes موحدة) ، واستخدامها بدقة وبتكاثر quantitate مكافحة A في مصل الإنسان. في هذا المثال لمكافحة عيار A في اختبار المصل يا جماعة هو 01:32 وأعدت kodecytes من الخلايا المتبرع الحمراء. (رابعا) فصيلة الدم وتستخدم وباء المستضدات إدراجها في وقت واحد واحد يا جماعة عينة الخلايا الحمراء لإنشاء kodecytes باء ضعيفا ضعيفا. ويمكن استخدام هذه kodecytes لABO أغراض مراقبة الجودة. هذه النتيجة تبين من تحليل A A B خصيصا kodecyte ضعيفة ضعيفة اختباره ضد الكواشف المضادة والمعادية لل- A - B ويعطي ردود الفعل المتوقعة ضعيفة.
Discussion
تعديل وخلايا virions مع ثوابت FSL هي تقنية بسيطة جدا وقوية 11/03. لوصف وتمييز FSL بناء خلايا معدلة وغير معدلة virions من الخلايا ، التي تسمى kodecytes وkodevirions 60-10 على التوالي ، ولكن فقط عندما يمكن أن تظهر في مجموعة وظيفية وعرض لتكون موجودة على الغشاء بهم. عندما تتم kodecytes مع تركيزات مختلفة من يبني FSL ، يمكن الإشارة إليها من قبل تركيز المحلول بناء FSL تستخدم لخلق لهم ، على سبيل المثال 15 ميكروغرام / مل وkodecytes ، أو إذا تم استخدام أكثر من واحد لمدة FSL ثم مجتمعة ، مثال : + 7،8 kodecytes البيوتين. عندما خلايا مختلفة وينبغي مقارنة ، بما في ذلك نوع من الخلايا في الوصف ويوصى ، على سبيل المثال البيوتين الخلية الحمراء أو kodecytes kodecytes البيوتين 7،8 بطانة الرحم.
وعلى الرغم من أن عملية الإدراج قوية جدا والإدراج (وإن كان ذلك بمعدلات مختلفة) تحدث على نطاق واسع درجة حرارة 4-37 درجة مئوية ، وخلال دقائق إلى ساعات ، للحصول على استنساخه الإدراج التحكم الصارم للوقت الاتصال ، ودرجة الحرارة ، وتركيز FSL ( مطلوبة بما في ذلك صياغة مخفف) وإلى حد أقل تركيز الخلية. حتى الآن ، ويمكن استخدام كافة بنيات FSL لتعديل الخلايا عن طريق نفس الأسلوب 11/04 ، ومع ذلك فمن المتوقع أن ظروف معينة ستكون اكثر ملائمة لتدفق العمل و / أو متطلبات التعامل الأمثل للخلايا / virions إلى تعديل . تركيز FSL الدقيق لتحقيق التأثير المطلوب يحتاج إلى يحدده المستخدم 4. وبناء الخلايا الناتجة FSL تعديل / virions يمكن عادة أن تستخدم بالطريقة نفسها باعتبارها الخلية معدلة / الفيريون في النظم البيولوجية أو تحليلية 4-11. كما سوف يبني FSL أزل ببطء من السطوح عند تعديل على اتصال مع حلول الدهون 7،8 ، أو يتم امتصاصها من قبل خلايا نشطة 11 ، لا بد من النظر في هذه المسائل فيما يتعلق بمستوى النشاط إشارة أو الحصول عليها على مدى فترات من الزمن. يمكن ان تكون ثابتة Kodecytes (على سبيل المثال غلوتارالدهيد / الفورمالين) بعد الإدراج قدمت تثبيتي ، لا تحتوي على دهون ويبلغ حجمه المذيبات وجماعة وظيفية متوافق مع مثبت. يمكن تعديل الخلايا ثابتة بدلا من يبني مع FSL.
ويمكن بالإضافة إلى تعديل أسطح الخلية والفيريون أيضا أن يبني FSL غرست مباشرة إلى الدورة الدموية للحيوانات المختبر مما تسبب في تعديل الخلايا الحية المتداولة 7 و 12 لكبح الفيروسات ، والسموم ، و 12 و 7 الأضداد. يبني FLS قد استخدمت أيضا لتزيين الليبوزومات ويمكن طباعتها على أسطح الورق 13 ، حيث شل ، ويمكن استخدامها في فحوصات التشخيص.
وينبغي أن القدرة على تعديل الخلايا الحية بسهولة مع مجموعة متزايدة من يبني FSL يثبت أن تكون البحوث مفيدة وأداة للتنمية لدراسة البيولوجيا سطح الخلية.
Disclosures
ديبورا ألف فارغ وستيفن م. هنري والموظفين وحملة الاسهم من بيوتك المحدودة كودي مالك البراءة التكنولوجيا كودي. دان باس هو موظف من سيغما الدريخ ، والتي رعت الإنتاج من هذه المادة عن طريق الفيديو.
Acknowledgments
المؤلفان بالشكر دان باس من سيغما الدريخ لعرض الفيديو. ونحن نشكر أيضا دون فرع شيرني Evgenii ، Chesla سكوت ، Hadac اليزابيث ، هاريسون أماندا ، داميان هيثكوت ، أنيكا هولت ، لان تشينغ تشوان ، ماكينتوش سوزانا ، Komarraju Sarvani ، Korchagina ايلينا ، اوليفر كارولين مارتن اولسون ، ستيفن باركر ، Rodinov ايجور الكسندر Tuzikov ويليامز اليانور لنتائجها والمساهمة في التوليف ، وتصميم البنى FSL وتحديد النشاط البيولوجي.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sigma name | Company | Sigma product number | Construct (KODE Biotech name) |
| FSL-A(tri) | Sigma-Aldrich | F9307 | FSL-A(GALNa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
| FSL-B(tri) | Sigma-Aldrich | F9557 | FSL-B(GALa3[Fa2]GALb)-SA1-L1 |
| FSL-GB3 | Sigma-Aldrich | F9807 | FSL-GB3(GALa4GALb4GLCb)-SA1-L1 |
| FSL-Lea(tri) | Sigma-Aldrich | F9682 | FSL-LEA(GALb3[Fa4]GLCNb)-SA1-L1 |
| FSL-biotin | Sigma-Aldrich | F9182 | FSL-CONJ(1Biotin)-SC2-L1 |
| FSL-Galili | Sigma-Aldrich | F9432 | FSL-GALILI(GALa3GALb4GLCNb)-SA1-L1 |
| FSL-Fluorescein | Sigma-Aldrich | F1058 | FSL-FLRO4(fluorescein)-SA2-L1 |
| Table 1. | |||
References
- Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. Engineering targeted viral vectors for gene therapy. Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).
- Strable, E., Finn, M. G. Chemical modification of viruses and virus-like particles. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 327, 1-21 (2009).
- Henry, S., Bovin, N. The development of synthetic peptidolipids, glycolipids and other lipid-linked structures to create designer red cells. Transfusion. 48, Suppl 2S. 194A-194A (2008).
- Frame, T., Carroll, T., Korchagina, E., Bovin, N., Henry, S. Synthetic glycolipid modification of red blood cell membranes. Transfusion. 47, 876-882 (2007).
- Hult, A. K., Frame, T., Henry, S., Olsson, M. L. Flow cytometry evaluation of red blood cells transformed with variable amounts of synthetic A and B glycolipids. Vox Sang. 95, Suppl 1. 180-180 (2008).
- Henry, S. Modification of red blood cells for laboratory quality control use. Curr. Opin. Hematol. 16, 467-472 (2009).
- Oliver, C., Blake, D., Henry, S. In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen incompatible red cells in an animal model. Transfusion. , Forthcoming (2011).
- Oliver, C., Blake, D., Henry, S. Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes. Transfusion. , Forthcoming (2011).
- Heathcote, D., Carroll, T., Wang, J. J., Flower, R., Rodionov, I., Tuzikov, A., Bovin, N., Henry, S. Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto erythrocytes. Transfusion. 50, 635-641 (2010).
- Hadac, E. M., Federspiel, M. J., Chernyy, E., Tuzikovb, A., Korchagina, E., Bovin, N. V., Russell, S. J., Henry, S. M. Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions. J Virol Meth. 10, Forthcoming (2011).
- Blake, D., Lan, A., Love, D., Bovin, N., Henry, S. Fluorophore-kodecytes - fluorescent function-spacer-lipid (FSL) modified cells for in vitro and in vivo analyses. FEBS J.. 277, Suppl 1. 199-199 (2010).
- Harrison, A. L., Olsson, M. L., Brad Jones, R., Ramkumar, S., Sakac, D., Binnington, B., Henry, S., Lingwood, C. A., Branch, D. R. A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms. Glycobiology. 27, 515-524 (2010).
- Barr, K., Diegel, O., Parker, S., Bovin, N., Henry, S. Function-Spacer-Lipid (FSL) constructs enable inkjet printing of blood group antigens. FEBS J. 277, Suppl 1. 235-235 (2010).
- Lan, C. -C. Modeling inflammatory bowel disease [dissertation]. , University of Auckland. Auckland. (1988).
