Um Modelo contundente de lesão da medula espinhal cervical unilateral Usando o Impactor horizonte infinito

Summary

Uma maneira confiável e repetível para produzir uma lesão da medula espinhal cervical unilateral utilizando o pêndulo horizonte infinito é descrito. O método leva vantagem de um quadro projetado e grampo para estabilizar a coluna. O procedimento padronizado e biomecânica lesão os parâmetros resultam em lesões suficientes e sustentados.

Abstract

Embora a maioria dos humanos lesões da medula espinhal ocorrer na medula cervical, a grande maioria da pesquisa de laboratório emprega modelos animais de lesão da medula espinal (SCI), na qual o cabo vertebral torácica é ferido. Além disso, porque a maioria dos humanos lesões da medula ocorrer como resultado de romba, trauma não penetrante (acidente de veículo automóvel, por exemplo, lesões desportivas) onde a medula espinal é violentamente atingido por osso deslocado ou tecidos moles, a maioria dos investigadores SCI são da opinião que a maioria dos modelos de lesão clinicamente relevantes são aqueles em que a medula espinal é rapidamente contundido. ¹ Portanto, um passo importante para a avaliação pré-clínica de novos tratamentos no seu caminho para a tradução humana é uma avaliação da sua eficácia num modelo de contusão SCI dentro A medula cervical. Aqui, descrevemos os aspectos técnicos e consequentes resultados anatômicos e comportamentais de um modelo unilateral contundente da cervical SCI que emprega oHorizonte Infinito impactor lesão medular.

Ratos Sprague Dawley foram submetidos a uma laminectomia unilateral do lado esquerdo no C5. Para optimizar a reprodutibilidade dos resultados biomecânicos, funcional e histológica do modelo de lesão, contundido as medulas espinais, utilizando uma força de impacto de 150 kdyn, uma trajectória de impacto de 22,5 ° (animais rodado a 22,5 °), e um local de impacto fora da linha média de 1,4 mm. A recuperação funcional foi avaliada através do cilindro de criação, teste escada horizontal, preparação e teste modificado Montoya escadaria até 6 semanas, após o que as medulas espinhais foram avaliados histologicamente para poupador substâncias branca e cinzenta.

O modelo de lesão aqui apresentado transmite consistentes e reprodutíveis forças biomecânicas para a medula espinal, uma característica importante de qualquer modelo experimental SCI. Isto resulta em danos histológica discreta para a metade lateral da medula espinal, que é em grande parte contido em tele lado ipsilateral da lesão. A lesão é bem tolerado pelos animais, mas não resulta em déficits funcionais do membro anterior, que são significativa e sustentada nas últimas semanas após a lesão. O modelo de lesão cervical unilateral apresentado aqui pode ser um recurso para pesquisadores que desejam avaliar terapias potencialmente promissores antes da tradução humana.

Protocol

1. Configure: Frame e Design Pinça para Segurar o Animal

1. A moldura e grampo para prender o animal foi customizado para acomodar o horizonte infinito (IH) Impactor de lesão medular.
2. A base do quadro é uma plataforma de alumínio cortado em as seguintes dimensões (30,2 cm x 20,3 cm x 1,3 cm), a fim de se encaixar no suporte de guia tabela que vem padrão com o dispositivo IH (Figura 1A).
3. Quatro Flexaframe placas de apoio do pé (Fisher Scientific, Toronto, ON) estão ligados à plataforma e oito hastes Flexaframe de apoio (Fisher Scientific, Toronto, ON, 30,5 cm) são montados utilizando oito conectores Flexaframe de apoio (Figura 1B).
4. Dois conectores Flexaframe de suporte adicionais, inerentes aos valores médios duas varas, a casa feita sob encomenda vale para o grampo (Figura 1B).
5. O ângulo pelo qual medula espinal do animal é rodado em relação à vertical é estabelecida por keeping uma da haste horizontal no lugar e variando a altura da haste de outro horizontal (Figura 2).
6. O grampo é 35,6 milímetros de comprimento, 25,4 milímetros de altura e com uma mandíbula milímetros 7,6 concebido para agarrar rigidamente sob o processo transverso de C4 a C6 (Figura 1C). Detalhes adicionais sobre o desenho grampo têm sido descritos anteriormente por Choo et ai., 2009.

2. Cirurgia

1. Macho Sprague Dawley (Charles River Laboratories) pesando 300-350 g foram anestesiados com isofluorano (4% para a indução e 2% para manutenção) em oxigénio (1 L / min).
2. Uma vez que os animais estão sob o plano da anestesia, o animal é colocado em um quadro estereotáxico (Kopf, Tujunga, CA).
3. Para minimizar a hemorragia durante a cirurgia mL procedimento de lidocaína 0,4 (20 mg / mL; Bimeda - MTC Animal Health Inc., Cambridge, Ontario, Canadá) com epinefrina é injectado por via intramuscular em torno do local cirúrgico no dorsoregião do pescoço l.
4. Um 4-5 centímetros incisão na linha média dorsal é feita usando um bisturi estéril (# 15), a partir da base do crânio e estendendo caudalmente.
5. Pinças esterilizadas Adson sem rodeios são utilizados para dissecar através da musculatura dorsal para alcançar a coluna, e um afastador Alm estéril (Ferramentas Ciência Belas, North Vancouver, BC) é inserido para manter os músculos separados.
6. Usando o bisturi # 15, os músculos sobreposição de lâminas de C4-C7 são raspadas, iniciando na linha média e varrendo-os lateralmente.
7. Uma incisão com um bisturi estéril (# 15) é feita para o músculo ligado aos processos transversais em ambos os lados da espinha, a fim de encaixar a braçadeira por baixo dos processos transversais de C4 a C6.
8. Com uma multa estéril ponta Friedman-Pearson Rongeur (Ferramentas Ciência Belas, North Vancouver, BC), a lâmina C5 esquerda é cuidadosamente removida para visualizar a dura ea medula espinhal.
9. Uma haste com um diâmetro de 1,5 mm é deslizado por baixo dos braçospara sustentar o animal para cima, elevando assim a coluna um pouco e facilitar a inserção de fixação.
10. Monte a mandíbula da pinça estéril para laterais processos transversos de C4 a C6 e aperte os parafusos.
11. Retire o afastador Alm.

3. Lesão Medular

1. Depois de a braçadeira é montado sobre o animal, o animal é movido para o pêndulo IH.
2. O grampo é inserida nos suportes de metal sobre as duas hastes meio da armação que foram protegidos com um ângulo de 22,5 ° fora de horizontal (Figura 2).
3. A tomada de tesoura que oferece ajustes de altura estável, (VWR, Mississauga, ON) é levantada até que o animal está plano.
4. Assegure-se que o grampo é horizontal pela colocação de um pequeno nível de cilindro na parte superior do grampo e apertando os parafusos. É importante que todos os parafusos estão apertados ea configuração é rígida, sem qualquer movimento.
5. O resto do procedimento é realizado sob uma microscope (Leica MZ8).
6. Abaixar e têm como objectivo a ponta do pêndulo (15 mm de diâmetro, com arestas arredondadas), utilizando o botão de ajuste vertical e os dois botões de ajuste horizontal no pêndulo IH até que o centro da ponta do pêndulo paira acima do vértice do C6 processo espinal.
7. Uma vez que a ponta do pêndulo está centrada, girar o botão de ajuste do eixo y um e dois por sua vez, quinto (1,4 mm) para mover a ponta lateralmente para o lado esquerdo e do eixo x botão de ajuste horizontal para mover a ponta do pêndulo para o centro do C5.
8. Abaixar a ponta até que é um pouco acima da dura a fim de verificar que a ponta do pêndulo é destinada a metade lateral da matéria cinzenta.
9. Gire o botão de ajuste vertical de duas voltas para levantar a ponta 4 mm acima da dura-máter.
10. Certifique-se que a área de impacto é seca utilizando um cotonete ou vara.
11. Definir a força desejada a 150 kdyn sobre o programa e clique em "Iniciar Experiment" para acionar o pêndulo.
12. Após a lesão, a ferida é fechada em layers com Vicryl 5-0. A buprenorfina (0,03 mg / kg SC, Temgesic; Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ) e solução salina (10 mL) é administrada por via subcutânea duas vezes ao dia antes e durante dois dias após a cirurgia. Os animais são cuidadosamente monitorizados duas vezes por dia durante 2 semanas e uma vez por semana durante 6 semanas pós-lesão.

4. Os resultados representativos

Vinte e nove macho Sprague Dawley (Charles River Laboratories) pesando 300-350 g foram feridas com uma definição de força de 150 kdyn. A ponta do pêndulo foi destinado 1,4 milímetros lateral à linha mediana, a um ângulo de 22,5 ° fora da vertical. A força média real foi de 155,55 ± 0,73 kdyn. O deslocamento média foi de 1512,72 ± 27,86 uM ea velocidade foi 120,24 ± 0,52 mm / s (Figura 3).

Desfechos Comportamento

A recuperação funcional foi avaliada utilizando a horizontal escada, teste de criação do cilindro, da preparação de teste,e modificado Montoya teste escada ^1. Os animais foram treinados antes da lesão e avaliada em 2, 4 e 6 semanas pós-lesão. Houve prejuízos forelimb significativas sofridas ao longo do período experimental.

Teste de Escada Horizontal. Antes da lesão, os animais feita apenas 4,75 ± 0,73% erros no membro anterior ipsilateral ao percorrer toda a escada espaçadas irregularmente horizontal. Após a lesão, os animais demonstraram aumento significativo na porcentagem de erros membro anterior. Os erros por cento ipsilaterais forelimb foram 26,97 ± 2,92%, 26,23 ± 2,84% e 22,06 ± 2,05% a 2, 4 e 6 semanas após a lesão, respectivamente (Figura 4A). Importante, a insuficiência forelimb sobre este teste foi mantida durante as 6 semanas.

Criação de teste do cilindro. O percentual de forelimb ipsilateral (esquerdo + ambos) o uso durante a exploração diminuiu significativamente após a SCI.Antes da lesão, os animais utilizados no membro anterior ipsilateral 75,12 ± 2,25%. Após a lesão, os animais utilizados no membro anterior ipsilateral 8,59 ± 1,80% em 2 semanas, 14,25 ± 2,65% a 4 semanas e 11,76 ± 2,66% em 6 semanas (Figura 4B).

Modificado Montoya teste Staircase. O número de pelotas recuperados com o membro anterior ipsilateral diminuiu drasticamente após a lesão. Antes da lesão, os animais recolhidos 84,85 ± 2,88% das recompensas alimentares. No entanto, aos 2, 4 e 6 semanas após a lesão, os animais recuperados somente 30,91 ± 4,03%, 28,94 ± 4,38% e 25,86 ± 3,09% das pelotas (Figura 4C).

Higiene teste. Houve quedas dramáticas nos escores de cuidados especiais após a lesão. Depois de SCI, as pontuações ipsilaterais coçar foram 2 semanas: 2,00 ± 0,17, 4 semanas: 1,83 ± 0,17 e 6 semanas: 1,79 ± 0,11 (FIGUre 4D).

Resultados histológicos

A massa branca e poupadores matéria Grey. Um exemplo de uma lesão da medula espinal, a uma força de 150 kdyn, o ângulo de 22,5 ° e têm como objectivo lateral de 1,4 milímetros é apresentada na Figura 5. A lesão resultou em danos substanciais à substância branca e cinzenta no lado ipsilateral. Ambos corticoespinhal e vias rubroespinal ficaram feridas e 23 dos 29 animais apresentaram lesão parenquimatosa contido no lado ipsilateral. A extensão longitudinal do dano da matéria branca e cinzenta foi 2400 e 2400 rostralmente caudalmente (Figura 6). Ao adicionar as seções para fornecer uma estimativa grosseira do "spread cumulativo" de branco e cinza poupador matéria (2000 mM rostral e caudal do epicentro), o lado ipsilateral teve apenas 51,8% da substância branca poupado e 39,7% da massa cinzenta comparados remanescente para o lado contralateral (Figura 6).

<img alt = "Figura 1" src = "files/ftp_upload/3313/3313fig1.jpg /" />
Figura 1. Horizonte Infinito impactor lesão medular. A. Impactor horizonte infinito e global definida. B. Quadro configurar. C. imagem Close-up do grampo para a realização de processos transversos cervicais. D. Especificação (unidade: polegada) do grampo. Tolerância sugerida <0,002 em (Choo et al. De 2009). Clique aqui para ver maior figura .

Figura 2. A. Moldura ilustração e correspondente configurado para atingir a rotação da medula espinal de 0 ° (neutro) ou B. 22,5 °, com o objectivo lateral de 1,4 mm.

Figura 3. Força representativa e gráficos de deslocamento para impactor horizonte infinito. A seta indicates o tempo em que a ponta do pêndulo atingiu 20 kdyn eo ponto quando a gravação de deslocamento é iniciada. A força real é lido a partir do pico da curva de força versus tempo eo deslocamento correspondente é calculado. Os gráficos abaixo mostram uma típica 150 contusão kdyn, Deslocamento A. vs gráfico de tempo, B. Força vs gráfico Time. Estes gráficos mostram que a força real obtido foi de 152 kdyn, eo deslocamento do pêndulo para a medula foi medido como sendo de 1287 uM. para ver figura maior .

Figura 4. Avaliações comportamentais para a força de 150 kdyn, angulação do pêndulo de 22,5 ° e têm como objectivo de 1,4 mm à esquerda da linha média. A. Teste de escada horizontal. B. teste criação do cilindro. C. Modificado teste escadaria Montoya. D. Higiene teste. O membro anterior ipsilateral resultou em significativa e SusNed deficiências em comparação com o membro anterior contralateral.

Figura 5. Imagens representativas da medula lesionada de rostral caudal de 1600 mm a 1600 uM.

Figura 6. Avaliações histológicas. A. Matéria por cento branco e cinza poupado. Importa cerca de 2000 mM de o epicentro da lesão foi em grande parte poupada. B. cumulativa branco e cinza assunto poupado com 2.000 mM de o epicentro da lesão. O lado ipsilateral tinham significativamente menos poupado substâncias branca e cinzenta em relação ao lado contralateral. Clique aqui para ver maior figura .

Discussion

Neste artigo, descrevemos um modelo de contusão cervical unilateral com o horizonte infinito (IH) impactor, a uma força de 150 kdyn, um ângulo de 22,5 ° fora da vertical, e um objectivo lateral, de 1,4 mm da linha média. Com essas configurações, fomos capazes de produzir sofridos déficits comportamentais no membro anterior ipsilateral com o rompimento do parênquima contido em grande parte para o lado ipsilateral, onde verificou-se que ocorreu um dano considerável para as regiões onde as vias rubroespinal, reticuloespinhal, vestibuloespinhal e corticoespinhal seria de esperar que executar. O desenvolvimento deste modelo ocorreu em uma série de três experiências que estabeleceram a força lesão óptima, a localização de impacto fora de linha média, e grau de rotação. Em primeiro lugar, verificou-se que as forças de prejuízo abaixo de 150 kdyn não produziu suficientes e sustentados défices funcionais. Além disso, com a ponta do pêndulo colidir com o cordão vertical (isto é, sem rotação), que frequentemente observada picos no fOrce vs curvas de tempo, sugerindo que a ponta do pêndulo foi bater o osso no lado ventral do canal espinhal. Muitos destes animais também não têm graves ou sustentada défices funcionais. Consistente com esta, o dano análise histológica nestes animais com os picos de força súbita, revelou lesão parenquimatosa que era tanto leve e muito lateralmente colocado no interior da medula espinal. Por isso, girou os animais de tal forma que a trajetória do pêndulo foi de 22,5 ° fora da linha média vertical. Por ter a ponta do pêndulo vêm em mais perpendicular à medula espinal, nós resolvido o problema da ponta batendo contra o chão ventral do canal espinal, mas observou-se lesão parenquimatosa considerável sobre o lado contralateral da medula espinal. Finalmente, destinada a pêndulo menos três diferentes distâncias ao largo da linha média, 1,0, 1,2 e 1,4 mm, usando um 150 força kdyn e um ângulo de 22,5 °. Observou-se que não havia diferenças de comportamento entre a 1,0, 1,2 e 1,4 mm sittings, mas como o alvo de impacto foi movido lateralmente, que era mais provável que o dano bruto parenquimatosa poderia ser contido no lado ipsilateral. Por isso, chegou em nossas configurações atuais de contusão unilaterais de uma lesão kdyn 150 entregues em 22,5 ° fora da vertical, com a ponta do pêndulo destinado 1,4 milímetros para a esquerda da linha média.

A justificativa para fazer modelos de lesão cervical disponível para o teste de terapias SCI é clara: a maioria das pessoas sofrem lesões na medula da coluna cervical, a função da extremidade superior é fundamental para essas pessoas, e os ensaios clínicos de novas intervenções neuroprotetoras ou neuroregenerative estão concentrando cada vez mais cervicais em pacientes com LM, a fim de usar a recuperação motora segmentar como uma medida de resultado. Lesão na medula espinhal cervical pode ocorrer através de laceração, contusão, compressão ou. Entre estes modelos de lesão, contusão e ferimentos de compressão melhor representam o ob processo fisiopatológicoservido no SCI humana. ^1,2,3 De acordo com uma pesquisa recente da comunidade de pesquisa SCI, 72% dos 324 entrevistados concordam que a lesão contusão é o modelo de lesão de maior relevância clínica da SCI. ¹

Desde a descrição Reginald Allen do primeiro dispositivo de peso gota-experimental para a geração de lesões da medula espinhal no ambiente de laboratório ^4, um número de dispositivos de contusão têm sido desenvolvidos, num esforço para optimizar reprodutibilidade e geralmente simular a patologia de ferimentos. ³ The New York University pêndulo utiliza componentes electromecânicos para medir o deslocamento lesão e da velocidade durante queda de peso ^5,6. Aqui, a gravidade da lesão é ditada pela altura a partir do qual o peso é descartado. Em contraste, no Ohio State University pêndulo (OSU) eo sistema de lesão multimechanism concebido por Choo et ai. (2009), o deslocamento máximo da medula espinal é determinada, eo impar forçated para a medula é então medido. O pêndulo IH é distinta em que o utilizador determina a força aplicada, e, em seguida, o deslocamento é medido. Embora cada um desses sistemas (de queda de peso versus controle de deslocamento versus força-controle) tem suas vantagens teóricas, a relativa facilidade de utilização, disponibilidade comercial e disponibilidade de suporte técnico do fabricante do pêndulo IH tornaram cada vez mais popular em últimos anos.

De um ponto de vista técnico, é de notar que as modificações significativas foram feitas no método para fixação dos animais e os proteger antes do impacto (Figura 1). Para aperfeiçoar a consistência das nossas lesões e para acomodar a anatomia única da coluna cervical, que estabilizou os animais com um sistema de custom-built de fixação que agarra firmemente os processos transversos da coluna cervical. ⁷ Como os grampos que são fornecidos com o IH impactor tem por objetivo manter o spiprocessos nous dentro da coluna vertebral torácica, achamos que não eram tão bem adequado para os processos muito menores espinhosos da coluna cervical. A armação e do sistema de aperto mantém os animais muito rigidamente durante o impacto, com praticamente 'derrapagem' não entre a braçadeira ea coluna. ⁷ O dispositivo de aperto é relativamente fácil de usar e aplicar à coluna vertebral. Um número de estagiários e técnicos em laboratório têm utilizado com sucesso consistente. Dissecção adicional dos tecidos moles mais lateralmente fora o aspecto dorsal da coluna cervical Porém, é necessária a fim de apreender os processos transversos, e sangramento pode ser encontrado em fazê-lo. Hemostasia é tipicamente alcançado simplesmente aplicando uma leve pressão com um pequeno pedaço de esponja cirúrgica. Além disso, a braçadeira é concebido especificamente para animais no intervalo de peso 300-350 g, e seria necessário modificação para acomodar animais menores (embora isto poderia provavelmente ser conseguido com espaçadores apresentados between os dois braços do grampo).

No que diz respeito ao alvo pretendido da lesão, procurou-se ferir tanto o corticoespinhal (CST) e rubroespinal (RST) tratos do lado ipsilateral apenas, uma vez que estes desempenham um papel tanto em função forelimb em roedores. ⁸ No nosso estudo, funcional déficits foram avaliados com o teste de escada horizontal, teste de criação de cilindro, aliciamento de teste e Montoya teste de escada. Tanto o teste de escada horizontal e criação de cilindro são avaliações importantes após os modelos lesão cervical. ^8,9,10,11 O teste de escada horizontal obriga os animais a utilizar ambos os membros torácicos suas lesadas e para chegar à escada, e, portanto, as medidas de teste a função compensatória e adaptativa do membro anterior. Durante o treinamento pré-lesão, os animais normalmente vai "pegar" ou colocar sua pata sobre as barras com os seus dígitos, enquanto atravessava a escada. Após graves ou moderadas cervicais unilaterais contusões, a maioria desta função motora é abolished, e os animais não são mais capazes de consistentemente fazer ou compreender os degraus. ^2,12 O teste examina criação cilindro de recuperação natural, analisando o uso forelimb voluntária. Tipicamente, o uso do membro anterior feridas ao explorar é drasticamente reduzido após a lesão. A perda dessas funções estão provavelmente relacionados com uma combinação de ambos interrupção axonal e para a erradicação dos neurônios motores no epicentro da lesão, que inervam os músculos como deltóide, bíceps, extensor do carpo radial longus e os extensores Carpi músculos radial brevis ^13. O teste da preparação, como o teste de criação do cilindro, examina o comportamento bruto natural dos animais. O modificada escadaria Montoya avalia as funções de controle ou dígito, fina, dos membros anteriores. Surpreendentemente até à data, há apenas um estudo que utilizou o teste de Montoya modificação da escada em cervical SCI ^14. Juntos, estes testes avaliam tanto os componentes finas e grossas do totalfunções de membro torácico.

Outros estudos têm também descritos modelos contusão cervical, que têm sido tipicamente concebidos com algumas modificações a um dispositivo de contusão pré-existente torácica. ^{2,12,15,16,17} Dunham et al. (2011), Popovich et ai. (2010) e Sandrow et al. (2008) todas utilizadas, o pêndulo IH. Dunham et al. (2011) caracterizaram o modelo de lesão usando 100, 200 e 300 kdyn através da avaliação do teste de criação cilindro, Passarele análise da marcha, vermicelli teste manuseamento e teste de escada horizontal. Popovich et ai. (2010) ferido a medula espinhal cervical, a uma força de 175 kdyn e observou os resultados funcionais utilizando o teste de plano inclinado, cilindro teste criação eo teste de BBB. Sandrow et al. (2008) usou uma força de 200 kdyn e deslocamentos resultantes de 1,6 a 1,8 mm e, em seguida, avaliados resultados comportamentais com o teste de locomoção forçada, locomoção campo forelimb aberto, teste de força de preensão e wal gradeteste k. Trabalho prévio do nosso laboratório utilizado o Ohio State University impactor em deslocamento 1,5 milímetros para testar unilaterais contusões do colo do útero (com uma força máxima de 200 kdyn) ^18. Gensel et al. (2006) usou um Mascis / New York University impactor usando 10 g em 6,5 mm e 12,5 mm de altura e avaliados resultado comportamental com o aliciamento teste teste escada, horizontal, teste de criação de cilindro e Semi-Automática teste Passarela (Passarela análise da marcha). Soblosky et al. (2001) utilizou um dispositivo de Allen modificado de queda de peso (10,5 g) a animais de lesão em 5,00, 2,50 ou 1,25 mm numa alturas 25,0 °, e avaliado o teste de escada horizontal e teste de criação cilindro para avaliar a recuperação comportamental. É difícil comparar o nosso modelo de lesão com o estudo de Sandrow et al. (2008), já que nenhum dos testes funcionais coincidir com o nosso estudo. Quando comparamos os resultados funcionais a outros estudos, o nosso modelo de lesão atual IH é geralmente menos grave para o 300kdyn grupo de Dunham et al. (2011), mas mais grave em comparação com outros relatórios cervicais contusão unilaterais. Os animais do nosso modelo de lesão não foram capazes de realizar os testes funcionais até duas semanas após a lesão enquanto que outros modelos de lesão iniciar testes funcionais a partir de 1 semana após lesão. Para o teste de escada horizontal, Soblosky et al. (2001) relataram o número total de tiras sem o número total de passos. O erro percentual ipsilateral menos 6 semanas pós-lesão para o nosso modelo corrente de cerca de 25%, em comparação a estudar por Lee et al. (2010) e Gensel et al. (2006), relataram que os erros na gama de 10 - 15% e Dunham et al. (2011) relataram que erro de 40% para o grupo kdyn 300 e 20% para os 100 e 200 grupos kdyn. Para o teste de criação do cilindro, Popovich et ai. (2010) relataram a duração de criação. O nosso 15-20% de uso forelimb ipsilateral para o ângulo de 22,5 ° foi comparável ao observado com um 5.0 gota mm peso ^12. Comparando-se os déficits comportamentais que resultaram do Impactor NYU, Gensel et al. (2006) relata a abolição total do uso pata ipsilateral para a altura de 12,5 mm. Dunham et al. (2011) relataram cerca de 5, 10 e uso forelimb 20% para os animais ipsilateral kdyn 100, 200 e 300. Para o teste de grooming, os animais marcados menos do que os grupos de prejuízo relatados por Gensel et al. (2006).

Histologicamente, o modelo de lesão aqui apresentado geralmente induz maior lesão parenquimatosa em comparação com outros modelos de lesão cervicais hemicontusion, mas menos do que o dano relatado por Popovich et ai. (2010). A extensão rostral caudal do nosso e lesão foi de 4,8 mm, em comparação a 8,0 mm de Popovich et ai., 4,0 mm de Lee et al. e de 3,6 mm em Gensel et al. estudos utilizando o pêndulo de IH, OSU e NYU impactor impactor, respectivamente. ^2,18 No epicentro da lesão, encontramoscerca de matéria cinzenta de 20% poupado no nosso modelo de lesão, em comparação com Lee et al. (2010) em 10%, Gensel et al. (2006) em 20-50%, e et Soblosky ai. (2001) em 31-99%. Para poupador matéria branca, o modelo de lesão aqui apresentado deixou cerca de tecido 20% restantes no epicentro em comparação com 30% em Lee et ai, (2010), 5 -. 10% em Gensel et ai, (2006) e 18 -. 62 % em Soblosky et al., (2001) no epicentro lesão. No estudo, realizado por Lee et al., (2010) do trato rubroespinal sofreu um prejuízo significativo, mas o trato corticoespinhal muitas vezes apareceu intacto. Popovich et ai. (2010) relatou abolição completa dos dois setores. Gensel et al. (2006) relataram danos parciais ao trato corticoespinhal e destruição completa do trato rubroespinal para as configurações tanto de altura. Soblosky et al. (2001) relatam danos parciais ao trato rubroespinal, mas sem prejuízo para o trato corticoespinhal. Estes relatórios reforçam ainda mais a importância de ferir ambos os trechos descendentes, a fim de produzir suficientes déficits funcionais ^19. Também vale notar que, em Popovich et al. (2010), Gensel et al. (2006) e Soblosky et al. (2001), as lesões também se estendeu para o lado contralateral. A importância desta questão da extensão para o lado oposto no nosso modelo é discutível, dado que não houve diferenças de comportamento entre as lesões destinadas 1,0, 1,2, e 1,4 mm fora da linha média (dados não publicados), mas seria desejável conter o lesão para o lado ipsilateral, desde que utilizado o lado contralateral como controle 'ileso'. Embora não foi, em alguns animais, um método de cruzamento de danos parenchmyal para o lado contralateral, este era mínimo. Ao comparar a representação de branco e cinza danos matéria como seja uma razão entre os lados ipsilateral e contralateral, ou como a extensão absoluta de dano, houve virtualmente nenhuma diferença (dados não publicados).

> e_content "Em conclusão, relatamos o desenvolvimento de uma lesão no contusão unilateral, e esperamos fornecer informações suficientes sobre o seu desenvolvimento e técnica. Outros que desejam estudar terapias pré-clínicos SCI pode empregar tal modelo, usando um dispositivo de pêndulo que está amplamente disponível (pêndulo de horizonte infinito). Estamos utilizando o modelo de avaliação de intervenções neuroprotetores, com a esperança de dar apoio probatório importante pré-clínica para tratamentos específicos antes da tradução humana.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Infinite Horizon Impactor	Precision Systems and Instrumentation	IH-0400
Aluminum metal sheet	Metalsupermarlets.com	APT6061/500
Flexaframe support foot plates	Fishers Scientific	1466625Q
Flexaframe support rods	Fishers Scientific	1466610GQ
Flexaframe Support Connectors	Fishers Scientific	1466620Q
Clamp1	Custom made		Choo et al., 2009
Metal holders	Custom made		See above
Impactor tip	Custom made		Diameter: 1.15 mm
Stereotaxic frame	David Kopf Instruments	Model 900
Cylinder Level	YIJIA TOOLS	YJ-SL0620
Microscope	Leica		Model #: MZ8
Laboratory scissor jack	VWR	12620-902