Summary
Neointimahyperplasie ist die primäre Ursache von Stenosen in arterialisierte Adern. Wir schlagen ein neues Protokoll, wobei der rechte äußere Jugularvene gepfropft mit der Manschette Technik in der Arteria carotis communis von Sprague Dawley Ratten. Die Überlebensrate betrug 100% zum Zeitpunkt des Opfers.
Abstract
Neointimahyperplasie ist eine der primären Ursachen der Stenose in arterialisierte Venen, die von großer Bedeutung im arteriellen koronaren Bypass-Operation, bei peripheren arteriellen Bypass-Operation sowie arteriovenösen Fisteln sind. 1-5 Das experimentelle Vorgehen der Venentransplantats Zwischenschaltung in der Arteria carotis communis durch die Manschette-Technik wurde in mehreren Forschungsprojekten angewendet worden, um die Ätiologie der Neointimahyperplasie und therapeutischen Möglichkeiten, um es anzugehen untersuchen. 6-8 Die Manschette verhindert Schiffes Anastomosen Umbau und induziert Turbulenzen innerhalb des Transplantats und damit die Entwicklung von Neointimahyperplasie.
Mit der Vena cava superior Graft ist ein etablierter Klein-Tiermodell für venöse Arterialisierung Experiment. 9-11 Dieser Strom Protokoll bezieht sich auf ein etabliertes Halsschlagader graft Zwischenschaltung Technik zuerst von Zou et al., 9 sowie andere. 12-14
Um das Verfahren zu vereinfachen und die Zahl der Versuchstiere möglichst gering zu halten, wird eine ausführliche Bedienungs-Protokoll durch Video-Training vorgestellt. Dieses Video sollte helfen, den Neuling Chirurgen sowohl die Manschette-Technik und die Venentransplantats Zwischenschaltung lernen. Dabei wurde die rechte äußere Jugularvene in der Manschette-Technik in der Arteria carotis communis von 21 weibliche Sprague Dawley Ratten in drei gleich große Gruppen, die am Tag 21, 42 und 84, jeweils geopfert wurden kategorisiert gepfropft. Insbesondere wurden keine Spendertiere erforderlich, weil auto-Transplantationen durchgeführt wurden. Die Überlebensrate betrug 100% zum Zeitpunkt des Opfers. Darüber hinaus war das Transplantat Offenheitsrate 60% während der ersten 10 operierten Tieren und 82% für die restlichen 11 Tiere. Der Blutfluss zum Zeitpunkt der Opfer war 8 ± 3 ml / min. Abschließend diese chirurgische Protokoll erheblich vereinfacht, optimiert und standardisiert diese Layoutlicated Prozedur. Es gibt Anfänger Chirurgen einfach, Schritt-für-Schritt-Anleitung erklärt, mögliche Fallstricke, was ihnen zu helfen, Know-how schnell zu gewinnen und vermeiden Sie nutzlose Opfer von Versuchstieren.
Protocol
Ein. Experimental Animals
- Erhalten eines lokalen Ethikkommission Zulassung für alle Experimente, die durchgeführt wird, in Übereinstimmung mit den Richtlinien Tierschutz FELASA wird.
- Verwenden weiblichen Sprague-Dawley-Ratten zur Verfügung von jedem kommerziellen Züchter (zB Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Deutschland) erwerben. Wir haben 21 Tiere in drei Gruppen von 7 Tieren je, die bei 3, 6 und 12 Wochen getötet wurden postoperativ unterteilt. Zum Zeitpunkt des Kaufs, sollten die Tiere 12 Wochen alt und wiegen 250-300 g.
- Halten Sie die Tiere in klimatisierten Räumen mit einer Umgebungstemperatur von 21 ° C, 60% relative Luftfeuchtigkeit und eine 12-Stunden-Hell-Dunkel-Zyklus mit freiem Zugang zu Futter und Wasser.
2. Anästhesie und Operative Vorbereitung
- Induzieren Vollnarkose durch Verwendung einer Plexiglas-Box an dem Anästhesiegerät, eingestellt bei einem Sauerstoff-Fluss von 1 L / min und einen Verdampfer Isofluoran with 5% Narkosegas.
- Pflegen Sie die Narkose mit dem Isofluoran Verdampfer bei 1,5%, sobald die tiefe sensorischen Reflexen der Tiere unterdrückt werden.
- Befestigen Sie die Ratten in Rückenlage auf einem Körper Warmhalteplatte.
- Bereiten Sie den Betriebsbereich von jedem Tier, indem ihr Fell mit einer Enthaarungscreme, vom Kieferwinkel bis 2 cm unter dem Man. sterni.
- Planen einer sterilen chirurgischen Feld durch die Aufmerksamkeit auf das Operationsgebiet, die Fläche auf dem Tier und der Vorderseite des Chirurgen hergestellt:
- Reinigen Sie den Tisch mit einem Desinfektionsmittel.
- Bereiten Sie die Inzisionsstelle durch die Verwendung mehrerer Anwendungen chirurgische Macchia Lösung (z. B. Chlorhexidin und 70% Isopropylalkohol). Anwenden des ersten Chlorhexidin, den Alkohol zweiten und schließlich der Scrub-Lösung.
- Tragen Sie einen Einweg-OP-Kittel und OP-Handschuhe, oder alternativ, Prüfung Handschuhe, die zuvor w gewaschenit einem chirurgischen Desinfektionsmittel.
- Verwenden Sie sterile Mikrochirurgie Instrumente im Operationsverfahren.
- Verwenden Sie ein Operationsmikroskop (Wild Heerbrugg M650, Gais, Schweiz) in 10-20-fache Vergrößerung.
3. Anatomie
Abbildung 1 zeigt die Anatomie der Ratte Hals:
1a) Situs vor dem Durchtrennen des rechten M. sternocleidomastoideus.
1b) Situs nach Durchtrennung des rechten M. sternocleidomastoideus.
4. Cuff Vorbereitung
Schneiden Sie die Bündchen in einer Länge von 3 mm von Hand aus einem Kunststoffrohr (Portex, Innendurchmesser 0,75 mm, Außendurchmesser 0,94 mm, Smiths Medical, UK). Diese Manschetten aus einem rohrförmigen Manschettenkörper einschließlich des kompletten Volumens des Kunststoffrohrs und eine Manschette, bestehend aus Handgriff Hälfte der Manschette Volumen. Sowohl die Manschette Körper und die Manschette Griff sollten gleichermaßen lon seing. Die Manschette Handgriff zum Manipulieren der Manschette während des chirurgischen Verfahrens wesentlich. Nachdem die Manschette über den Behälter geschoben wird, wird ein Mini Bulldog Klammer gleichzeitig an der Manschette Griff und dem Gefäß angeordnet ist, um von Blutungen zu verhindern, sollten die Manschette in Position und gewährleisten Stabilität.
5. Cuff-Technik
- Schieben Sie die Manschette über das Schiff.
- Unmittelbar danach, Evert das Schiff, ziehen Sie sie über die Außenseite der Manschette Körper und fixieren Sie es mit einem 7-0 Seidenligatur. Auf diese Weise wird das Lumen der Manschette mit Endothel bedeckt. Danach rutschen die venöse Transplantat über der Manschette Körper und fixieren Sie es mit einer neuen 7-0 Seidenligatur. Thrombusbildung zu verhindern, ist es wesentlich, die Venentransplantat Krawatte sehr nahe an der Manschette befestigen Rand um das Blut vom Kontaktieren der Krawatte Halten der Arterie in Linie zu vermeiden. Dies ist entscheidend für die distale Anastomose aufgrund der Blutströmungsrichtung. Jedoch nach Ansicht der Autoren ist jedoch nicht berücksichtigtWesentlich für die proximale Anastomose aus dem gleichen Grund.
6. Surgical Procedure
6.1 Vorbereitung des rechten äußeren Halsschlagader
- Stellen Sie eine ungefähre 2,5 cm langen mittleren zervikalen Inzision direkt über dem Man. sterni.
- Vollständig zu trennen ein 1 cm langes Segment der rechten Vena jugularis externa aus den umgebenden Geweben
- Ligieren die venösen Zuflüsse mit 7-0 Seidenfäden.
6.2 Vorbereitung der rechten Arteria carotis communis
- Bereiten Sie den M. sternocleidomastoideus und durchschneiden sie in der Mitte.
- Bereiten Sie die rechte Arteria carotis communis sorgfältig darauf achten, nicht auf die Arterie oder die Vagusnerv komprimieren. Mobilisieren Sie es aus der Carotis-Bifurkation bis zum Truncus brachiocephalicus.
- Anschließend ligieren es zweimal in der Mitte mit 7-0 Seidennähte vor dem Durchtrennen.
- Schieben Sie eine Nylon-Manschette consisting von einem Körper und einem Griff (2a) über das distale Ende des gemeinsamen Halsschlagader, wodurch es wichtig sicherzustellen, dass die Manschette Griff hinter dem Schiff (Abbildung 2b).
- Klemmen die Manschette Ende des distalen A. carotis communis mit einem Mini Bulldog Schelle genau auf der Manschette, um die Stabilität Griff (2c) zu gewährleisten.
- Anschließend schneiden die Arterie direkt hinter der Ligatur, wobei das entstehende arteriellen Stumpfes so lang sein wie der Manschette Körper sollte.
- Spülen des arteriellen Lumens mit Heparin-Kochsalzlösung (20 IU Heparin / ml 0,9% NaCl). Stellen Sie eine Ligation loop beiseite in der richtigen Position für die spätere Verwendung.
- Ziehen Sie den arteriellen Stumpf und schieben Sie sie wie eine Hülse über der Manschette Körper.
- Anschließend ziehen Sie die Ligation Schleife und Knoten sie fest.
- Um die Arterie ein Herausrutschen aus dem Ärmel zu verhindern, kann Sie bei der Umsetzung einen Trick: erfassen sowohl die Arterienwand und die Naht mit der rechten Hand simultaneously und mit der linken Pinzette (Abbildung 2d) zu den Knoten (Abbildung 2e).
- Wiederholen Sie den Vorgang für den proximalen arteriellen Stumpf (Abbildung 2f).
6,3 venöse Transplantat Positionierung
- Excise eine 1 cm-langen Segment des eingespannten externen Halsschlagader
- Da die beiden gefesselten Arterien zu weit voneinander entfernt sind voneinander für das venöse Zwischenschaltung, ungefähre der richtige Abstand für dieses Verfahren unter Verwendung einer 3-0 Vicryl-Nahtmaterial welche Sie sollten Schleife um jedes Mini Bulldog Klemme.
- Criss-cross beide Nähte.
- Anschließend ziehen Sie die Fäden in entgegengesetzter Richtung, so dass die richtige Positionierung der Manschette arteriellen Stümpfen (Abbildung 2g)
- Spülen Sie die Venensegment mit dem Heparin-Kochsalzlösung.
- Schieben Sie ein Ende des zuvor rückgängig Venensegment über den gefesselten distalen A. carotis und sichern Sie sie in der richtigen Positiontion mit einem seidenen 7-0 Ligatur.
- Es ist wichtig zu beachten, dass der Umfang der Vene muß vollständig und gleichmäßig gegriffen sein.
- Spülen Sie die Venensegment mit Heparin-Kochsalz-Lösung, und schieben Sie das andere Ende des Venensegment über den proximalen A. carotis Stumpf.
- Füllen Sie das Ligation (Abbildung 2h);
- Entfernen Sie die Mini-Bulldog Klemmen einer nach dem anderen, zuerst auf dem distalen A. carotis Stumpf und dann auf der proximalen ein, wodurch ungehinderte Durchblutung und den Arterialisierung des venösen Graft (Abbildung 2i). Die Operation gilt als erfolgreich, wenn die Durchblutung und Pulsation innerhalb des Transplantats und der Arteria carotis communis (visuell) eingehalten werden.
6.4. Wundverschluss
Für die subkutane fortlaufende Naht, verwenden 4-0 Vicryl. Für eine kutane fortlaufende Naht, verwenden 3-0 Vicryl.
7. Recovery and Postoperative Management </ P>
- Lassen Sie die Tiere aus der Narkose erholen auf einer flachen Papier Betten unter einem Infrarot-Wärmelampe. Sie nicht wieder die operierten Tiere auf das Tier Wartebereich, bis alle Tiere normal erscheinen.
- Postoperativ verwalten Buprenorphin (Temgesic) in der Konzentration von 0,03-0,05 mg / kg KG sc alle 8-12 Stunden für 2 Tage. Buprenorphin kann kurz vor Isofluoran Induktion verabreicht werden.
- Überwachung Tiere postoperativ ihren Allgemeinzustand und Anzeichen von Krankheit oder Infektionen.
8. Blood Flow Measurement
Die postoperative Durchgängigkeit des Transplantats wurde durch den Blutfluss Messung bewiesen, indem ein Forschungs Transonic Blutfluss Messsystem (Modell: TS420, Transonic Systems Europe BV, Maastricht, Niederlande) mit einer perivaskulären Flowprobe (3 mm, MA3PSB). Das System basiert auf dem Doppler-Prinzip.
9. Repräsentative Ergebnisse
Durch faithfully halten die Anweisungen erwähnten, war die mittlere Dauer der Operationen etwa 65 min. Die Tiere zeigten eine ausgezeichnete Kondition und nahm an Gewicht zu als während des gesamten Versuchs erwartet: am Startpunkt des Betriebs die Tiere gewogen 312 ± 20,39 g. Am Opfer Zeitpunkt von 3 Wochen nach der Operation ist die Tiere gewogen 325,2 ± 28,7 g, nach 6 Wochen 333 ± 39,9 g und nach 12 Wochen 362,22 ± 29 g.
Keine Infektionen wurden am Ort der Operation und keine Wunden entwickelt beobachtet. Die Operationswunden verheilt zum erwarteten Zeitpunkt. Die neurologische Kontrolle zeigte keine Anzeichen von Hirninfarkt oder motorische Mangel. Je später war ein wichtiger Punkt, da die Tiere in der Halsschlagader operiert wurden und einer der beiden externen Halsschlagader wurde entfernt und als Auto-Transplantation. Keine allergischen Reaktionen auf die postoperative Schmerzlinderung Therapie beobachtet.
> Alle Tiere wurden wachsam und sozialen während des gesamten Versuchs. Ihre Gewohnheiten zu erhalten Nahrung und Wasser unverändert während der ganzen Zeit.
Die Überlebensrate aller Experimente betrug 100% zum Zeitpunkt des Opfers. Das Transplantat Durchgängigkeit lag bei 60% für die ersten 10 operierten Tieren und entsprechend 82% für die restlichen 11 Tiere. Die gesamte Transplantat Durchgängigkeit betrug 71%. Der Blutfluss in den arterialisierte venösen Transplantate wurde zum Zeitpunkt des Opfers gemessen und betrug 8 ± 3 ml / min ohne statistisch signifikanten Unterschiede zwischen den drei Opfer Zeitpunkten.
Abbildung 1. Anatomie der Ratte Hals. 1a) Situs vor dem Durchtrennen des rechten M. sternocleidomastoideus. 1b) Situs nach Durchtrennung des rechten M. sternocleidomastoideus.
. Abbildung 2 Intraoperative mikroskopischen Bildern: a) bestehend aus Manschette Cuff-Manschette-Körper und Griff, b) Manschette aufgesteckt über dem distalen Ende des gemeinsamen Halsschlagader, c) Spannen des distalen Manschette Arteria carotis communis Stumpf, d) Umstülpen die Arteria carotis communis Stumpf über der Manschette; e) die Sicherung der umgestülpten Arteria carotis communis Stumpf mit einer Ligatur; f) Situs nach Eversion der beiden gefesselt distalen und proximalen Arteria carotis communis Baumstümpfe; g) kreuzweise Technik zur Annäherung der beiden gefesselt A. carotis communis Baumstümpfe; h) Situs nach venöser Zwischenschaltung; i) Situs nach der Reperfusion des venösen Interponat.
Abbildung 3. Schematische Darstellung des Situsnach der Reperfusion des venösen Interponat. Klicken Sie hier für eine größere Abbildung zu sehen .
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Discussion
Zwischenschaltung eines externen Halsschlagader Transplantat in der Arteria carotis communis ist eine anspruchsvolle Mikrochirurgie Technik. Dieses Video hilft dem Anfänger Chirurgen beherrschen diese Technik in kürzester Zeit mit einem niedrigeren Verschwendung von Versuchstieren.
Inhalative Anästhesie ist die beste Option für diese Operation, da sie eine zu tiefe Narkose Bühne vermeidet, kann auch gesteuert werden und ermöglicht es dem Chirurgen genug Zeit zu bedienen. Darüber hinaus ist die Ratte ist ein experimentelles Tier, das eine geeignete Größe, solche komplexen chirurgischen Techniken wesentlich einfacher zu praktizieren, im Vergleich zu dem Maus bietet.
Der Vorteil der Verwendung des Cuff-Verfahrens ist, dass Behälter mit unterschiedlichen Durchmessern luminalen anastomosiert werden kann. Es ist wichtig, den gesamten Umfang der Manschette und umgestülpten Gefäßen ligieren zu Blutungen nach der Reperfusion zu vermeiden. Dieses Modell ist sehr geeignet, um die Hämodynamik von hohem Blutdruck Geschwindigkeit und niedriger Scherbeanspruchung zu simulieren und zu untersuchen,Mechanismen, die die Entwicklung von neointimaler Hyperplasie beeinflussen. Die Manschette verhindert Schiffes Anastomosen Umbau und induziert Turbulenzen innerhalb des Transplantats und damit die Entwicklung von Neointimahyperplasie.
Um die Bildung von Thromben zu verhindern, ist es wichtig, die Venentransplantats tie 2 in einer geeigneten Position, um die Assoziation Blut mit der Gleichstand 1 Halten der Arterie im Ort (Abbildung 3) zu verhindern platzieren. 9 Bindung des Venentransplantats in der empfohlenen Weise begrenzt thrombotischen Veranstaltungen auf 12-13% und Verschluss des Gefäßes zu noch niedrigeren Proportionen. 15 Da es im Betrieb Video zu sehen, ist es nicht leicht, die Krawatte gerade Platz in dieser vorgeschlagenen Position. Die Autoren betrachten es als entscheidend für die distale Anastomose, insbesondere wegen der Blutströmungsrichtung. Im Gegensatz dazu soll dies nicht als absolut wichtig für das proximale Anastomose aus dem gleichen Grund.
Im Gegensatz zu den Verfahren mit dem caval vEin als Transplantat diese Autotransplantation mit der externen Halsschlagader als das Transplantat reduziert sich die notwendige Anzahl der Versuchstiere um die Hälfte. Letztlich Zwischenschaltung eines externen Halsschlagader Transplantat in der Arteria carotis communis ist eine anspruchsvolle Mikrochirurgie Technik. Dieses Video hilft dem Anfänger Chirurgen beherrschen diese Technik in kürzester Zeit mit einem niedrigeren Verschwendung von Versuchstieren. Dieses Modell ist ein hervorragendes Mittel für Anfänger Chirurgen, um die Manschette-Technik, die derzeit im Bereich der Organtransplantation bei Kleintieren eingesetzt üben.
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Disclosures
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Acknowledgments
Diese Studie wurde von der Forschungs-förderung Programm "START" der Medizinischen Fakultät der RWTH Aachen, Deutschland (: "Die Arterialisation venöser Gefäße" START 690753 Titel) finanziert. Wir möchten Mrs. Mary-Joan Blümich für ihre hervorragende Bearbeitung Unterstützung danken.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Braided Silk black 7-0 | Ethicon Products | 892100 | |
| Vicryl 3-0 | Ethicon Products | J285G | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon Products | J284G | |
| Portex non sterile nylon tubing 0.75 mm, 0.94 mm Fine-Bore Polyethylene (Polythene) Tubing | Portex UK | 800/200/175/100 | |
| Isofluorane 5 % | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon |
References
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