Summary
Deneysel tasarımlar fetal beyin gebelik sırasında apoptoz ve nörotrofik peptid uygulama alkol maruz kalmanın etkilerini araştırmak burada odaklanmak önerdi. Üreme fetal beyin koleksiyonuna ayrıntılı bir açıklama açıklanmıştır. Apoptozun belirlenmesi için teknikler de detaylı bir şekilde tarif edilmektedir.
Abstract
Fetal beyin gelişimi erken embriyonik aşamalarında doğum öncesi alkol maruz kalma etkilerini araştırmak için deneysel tasarımlar zorlu. Bu daha çok fetal beyin ve alkol prenatal maruz kalma sonucu apoptotik hücrelerin belirlenmesi için kendi kesit bir mikrodiseksiyon zorluğu kaynaklanmaktadır. Deneyler fetal beyin dokusunda hücre ölümü kimlik yetiştiriciliği farelerden alınan görsel teknikler sağlar tanımlanmıştır. Bu çalışma, C57BL / kullanılan alkolün indüklediği apoptoza karşı fetal alkol maruz kalma ve trofik peptid rolü üzerinde çalışılması için hayvan modeli olarak, 6 farenin. Üreme embriyonik yaş tam evresini belirlemek için bir 2 saatlik paspas pencereden oluşur. Kurulu bir fetal alkol maruz kalma modeli fetal beyinlerinde prenatal alkol maruz kalma etkilerini belirlemek için bu çalışmada kullanılmıştır. Bu hamile fareler için besin tek kaynağı olarak alkol ya da çift-beslenen sıvı diyetler ücretsiz erişim içerir.
Apoptoz soruşturma için, fetal beyin ilk vibratome aparatı ile kesit kolaylaştırmak için bir peel-away kalıp kullanarak jelatin gömülür. Paraformaldehit gömülü ve sabit fetal beyinleri kolayca kesitli ve serbest yüzen bölümleri apoptosis ya da hücre ölümünün belirlenmesi için Superfrost Plus, slaytlar monte edilebilir.
TÜNEL (TdT-aracılı dUTP Nick uç etiketleme; TdT: terminal deoksinükleotidil transferaz) tahlili hücre ölümü ya da apoptoz hücreleri tanımlamak için kullanılmıştır. Bu dikkat çekicidir ki apoptosis ve hücre-aracılı sitotoksisite, DNA parçalanması ile karakterize edilir. Bu nedenle, görsel TÜNEL-pozitif hücrelerde hücre ölümü veya apoptotik hücrelerin bir göstergesidir.
Burada deneysel tasarımlar fetal beyinlerinde gebelik sırasında alkol etkilerini araştırmak için kurulmuş bir sıvı diyet kullanımı hakkında bilgi ve nörotrofik peptidlerin rolü sağlar. Bu üreme ve hamile fareler beslenme, fetal beyin Microdissecting ve apoptoz belirlenmesi içerir. Birlikte, bu görsel ve metinsel teknikleri fetal beyinlerinde zararlı ajanların prenatal maruz araştırmak için bir kaynak olabilir.
Introduction
Burada açıklanan deneysel yöntemlerin amacı, beslenme Microdissecting ve hücre ölümü tespit, ıslah içeren çeşitli teknikler kullanarak fetal alkol maruz modelinde trofik peptidlerin nöroprotektif etkilerini değerlendirmektir. Laboratuvarımızda çalışmak alkol miktarı vadede bir insan içme paradigma benzer olabilir ılımlı alkol içme, bir model olarak alkol ile karışık bir sıvı diyet yer vardır 1-5 tüketilen. Biz ve diğerleri fetal alkol maruz kalmanın zararlı etkilerine karşı nöroprotektif üç peptit türevleri belirledik. Hayvan modelleri kullanarak embriyonik aşamalarında alkol maruz araştıran çalışmalar nöro potansiyel mekanizmalarının belirlenmesi yol ve müdahale prosedürlerinin geliştirilmesi için izin verebilir. Bu hamilelik sırasında alkol maruz kalmanın zararlı etkileri nöroprotektif etkileri ve zayıflama hakkında geniş bilgi verebilir.
Prenatal alkol maruz kalma etkileri mümkün önlenmesi in vitro ve in vivo 6,7 1,2,4,8,9 nöroproteksiyon dahil olmak gösterilmiştir peptitler ile gebe farelerin tedavisinde içerebilir. Bu peptidler arasında, ADNF-9 ya da SAL olarak bilinen SALLRSIPA, aktivite bağımlı nörotrofik faktör (ADNF) 7,10 türetilmiştir. Dizisi NAPVSIPQ peptid olarak adlandırılan NAP, başka bir peptit aktivite bağımlı nöroprotektif protein (ADNP) 6,11 elde edilen, alkol maruz kalma 12,13 ile ilişkili oksidatif strese karşı güçlü bir koruyucu etki göstermiştir. Buna ek olarak, son zamanlarda fetal alkol maruz modeli 2 önemli bir nöroprotektif rol oynadığı yeni bir sentez peptit, colivelin belirledik. Colivelin ADNF-9 ve AGA-(C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP) oluşmaktadır. Bu peptidlerin kullanımının önemi onlar yeteneğine sahip olmasıdıralkole bağlı apoptoz ve beyin gelişimi açıklarının etkilerini önlemek için beyin-kan bariyeri çapraz.
Deneysel yöntem alkol kaynaklı apoptoz karşı nöro-koruyucu etkisi test etmek için C57BL / 6 fareleri kullanılmıştır. Biz bir sperm fiş ve vajinal smear 1-5 tespiti ile ortaya gibi doğru, embriyonik gün 0 (E0) tahmin etmek için yerine bir gecede ıslah bir 2 saatlik pencere benimsemiştir. Bu hamile farelere stres neden olabilir gavaj yolu, ile yerine alkol teslimat ücretsiz kabul edilir gibi, besleme tüpleri ile bir sıvı diyet kullandık. Öte yandan, mikrodiseksiyon erken evrelerinde fetal beyinleri kesme karşılaşılan olabilir fetal beyin dokusunun, yumuşak olması nedeniyle zor olabilir. Burada, mikrodiseksiyon ile ilgili tüm zorlukları ile başa çıkmak için görsel teknikleri göstermektedir. Ayrıca, fetal beyin kesit de zor olabilir çünkü, benimsediğimizjelatin gömme peel-away kullanarak kalıplara fetal beyin gömme içeren bir tekniktir. Biz 50 mikron kalınlığında serbest dalgalı bölümlerde fetal beyin kesme başarılı olmuştur. Bu bizim hücre ölümü belirlenmesi de dahil olmak üzere, fetal beyin bölümlerini içeriği protein herhangi bir değişiklik araştırmak için izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Hayvanlar Yetiştirme ve Trofik Peptit Tedavi
- 2 saat için erkek ev kafesleri içine dişi farelerde (~ 6 hafta eski, ortalama ağırlığı 20 g) koyarak cins C57BL/mice.
- Hemen ardından bir sperm fiş ve / veya vajinal smear olup olmadığını kontrol edin.
- Pozitif ise, embriyonik gün 0 (E0) bu zaman noktası belirleyin.
- Son zamanlarda açıklandığı gibi E7, kontrol ve tedavi gruplarına hamile kadın ağırlık-maç (3 grup) atanır 4: 1) Alkol (etanol) sıvı diyet grubu (ALC), 2) çift-beslenen kontrol grubu (PF), 3) alkol maruz kalma sıvı diyet (ALC/ADNF-9) yanında ADNF-9 peptid intraperitoneal (ip) enjeksiyon alacaksınız peptid tedavi grubunda,. ALC ve PF diyetler hazırlanmasının ayrıntıları ve ip enjeksiyonları prosedürü son çalışmaları 4 bulunabilir.
- Besinlerin tek kaynak olarak ücretsiz olarak temin edilebilir günlük alkol sıvı diyet ölçün. PF sıvı diyet tek tek t yokedo bir ALC baraj hem günlük ölçülebilir.
- Bir önceki 24 saat boyunca tüketilen sıvı diyet hacmi kaydedilebilir 30-mL vida kapaklı tüpler mezun oldu ve taze hazırlanmış diyet E7 gelen E13 her gün sağlanmalıdır.
2. Fetusların ve Fetal Brain Mikrodisseksiyon diseksiyonu
- Derin bir servikal dislokasyon ardından CO 2 prosedüre fareler ötenazi tarafından E13 hamile fareler kurban.
- % 70 etanol ile kesi karın sitesi temizleyin.
- Steril makas ve forseps kullanarak karın kesi yapmak.
- Karın açıldığında, bir forseps ile tutarak ve uzak rahim mesometrium gözyaşı diğer forseps kullanarak rahim teşrih. Embriyoların delinmesiyle önlemek için yavaş yavaş bu işlemi yapmak istediğinizden emin olun.
- Rahim embriyo çıkarın ve Hanks 'Dengeli Tuz çözeltisi içeren (60 mm x 15 mm) bir hücre kültürü çanak içine aktarabilirsiniz (HBSS) buz gibi soğuk suda.
- Mikrodiseksiyon için stereomikroskop altında tüm embriyolardan fetal beyin parçalara ayır.
- Mikrodiseksiyon için ultra-ince forseps kullanarak, kafatası ortaya çıkarmak için başın üst kısmında embriyo cilt çekin.
- Bir kez kafatası maruz ve net bir şekilde daha sonra omurilik ve beyin sapı alanlarda beynin arka kısmından başlayarak kafatasının soyulabilir, mikrodiseksiyon stereomicroscope altında görüntülendi.
- Başın ön kısımlarına posterior gelen parça kafatası parçası kalkmasına emin olun.
- Fetal beyin görsel maruz sonra, onları ayıklamak devam.
- Primordium koku ampul tabanından metencephalon en tabanına fetal beyin parçalara ayır.
- Tüm sonek 2-3 gün süreyle% 4'lük paraformaldehit içerisinde fetal beyinleri. Eğer Western Blot veya enzimatik deneyleri için onları test ise Ayrıca her baraj diğer fetal beyin dondurabilirsiniz.
3. Kesit için Jelatin Fetal Brain katıştırma
- Jelatin sınıf A% 10 hazırlayın
- Yarım bir peel-away gömme kalıp doldurun ve jelatin katılaşır kadar bekleyin.
- Katılaşmış jelatin üstüne yerleştirin kontrolü ve prenatal tedavi fetal beyin yan yana. Bu deney ve kontrol gruplar arasındaki hücre ölümü İmmuno tutarlı koşulları tutmaktır.
- (Jelatin çok sıcak olmadığından emin olun) tam bir kalıp yapmak için fetal beyin üstüne jelatin sıvı ekleyin.
- 15 dakika fetal beyin tutan hazırlanan jelatin kalıp buzdolabında.
- Soyulmakdaha sonra gömme kalıp plastik ve iki gün süreyle% 4'lük paraformaldehit içine önceden hazırlanmış jelatin içeren fetal beyinleri aktarın.
- Yerleştirin ve bölüm fetal beyin sabit jelatin koronal kesit için 50 mikron kalınlığında vibratome kesit makinesi (Leica VT 1000S) kullanarak. Daha iyi anatomik özellikleri sağlar, çünkü bu kalınlık bizim çalışmalarda test edilir. Buna ek olarak, 25 um kalınlıkta ve aynı zamanda daha yüksek bir% 10 jelatin fötal beyin gömülü içeren bu tekniği ile test edilebilir. Ön beyin üzerinde bazal ganglion tepe düzeyde vibratome kullanarak koronal bölümleri kesilmiş unutmayın
- Fosfat tamponlu tuz (PBS) çözeltisi içinde fetal beyin bölümleri toplayın.
- Suda SuperFrost Plus slaytlar fetal beyin bölümleri monte edin.
- 15 dakika için monte edilmiş bölümleri kurutun.
- TUNEL reaksiyon ertesi gün test için PBS slaytlar (fetal beyin bölümleri ile monte) yerleştirin.
4. De için TUNEL reaksiyonHücre Ölümü veya Apoptoz koruması
(TUNEL: TdT-aracılı dUTP Nick Son Etiketleme; TdT: terminal deoksinükleotidil transferaz). Bu testte hücre ölümü belirlenmesi amaçlanmıştır.
- 37 ° C (20 ml PBS içerisinde karışık proteinaz K, 300 ul), 5 dakika boyunca proteinaz K (20 ug / ml) ile Superfrost Plus, slaytlar monte edilmiş fötal beyin kesitlerinin Treat. Slaytlar) 5-Plend açık maile monte edilir.
- Orbital çalkalayıcı altında 5 dakika boyunca PBS ile üç kez fetal beyin kesitlerinin (slaytlar monte) yıkayın.
- % 3 oda sıcaklığında, 10 dakika (3 ml% 30 27 H 2 O 2 mL% 100 metanol) (slaytlar bir karıştırıcı içinde olmamalıdır) boyunca metanol H 2 O 2 bölümleri inkübe edin.
- Yörüngesel bir çalkalayıcı içinde 5 dakika boyunca PBS ile üç kez bölümleri durulayın.
- Buz üzerinde 2 dakika (4 ° C) (100 ul TritonX + 0.1 gr sodyum sitrat + 99.9 ml damıtılmış için geçirgenliği çözelti içinde bölümler (% 0.1% 0.1 sodyum sitratta TritonX-100) inkübed su).
- Yörüngesel bir çalkalayıcı içinde 5 dakika boyunca PBS içinde bölümler iki kez çalkalayın.
- Slaytlar bölümleri civarında kuru bir alanda.
- PAP Kalem kullanarak SuperFrost Plus slaytlar üzerinde bariyer çizin. Bu, herhangi bir TÜNEL-pozitif hücrelerin saptanması için bölümlere tedavi etmek için kullanılan çözeltinin sızmasını önlemek için amaçlanmıştır.
- 37 ° C'de 1 saat boyunca TÜNEL Reaksiyon karışımı, (şişe, 1 ila 50 ul ve şişe 2 450 ul) ° C bölümleri inkübe, kontrol şişe 2 çözeltisi içinde inkübe edilerek, kullanılacaktır.
- Orbit çalkalama altında PBS üç kez 5 dakika ile durulayın.
- Doku etrafında kuru bir alanda.
- 37, 30 dakika için dönüştürücü-POD ile bölümler inkübe ° C.
- Tris HCI (pH 7.5, 0.05 M) ile 5 dakika boyunca bölümlere üç kez yıkayın.
- % 0.05 3'-3'-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB) ve% 0.003 'H 2 O 2 (25 ml Tris HCI, pH 7.5, 0.05 M + 25 ul% 3 H 2 + 2 0 500 içinde 7 dakika boyunca bölümleri inkübe ul DAB) 4 de Oribtal çalkalayıcı altında ° C (buz) ve karanlıkta () yeni 5-Plend açık mailler bu işlemi yapmak istediğinizden emin olun.
- Orbital çalkalayıcı altında PBS üç kez 5 dakika ile bölümleri durulayın.
- Bir sonraki bölümde protokol ayrıntılı olarak Nissl boyama için onları işlemek daha sonra, PBS içinde en fazla 24 saat için PBS içinde slaytlar bölümleri tutun.
Not: DAB kanserojen. Eldiven kullanın ve bir kez tüm deneyler ile bitmiş çamaşır suyu ile kullanılan tüm yemekleri temizleyin.
5. Mikroskobik Gözlem için Fetal Beyin Bölüm hazırlanması için Nissl boyama
- Nissl boyama işlemi biyolojik güvenlik kabini içinde yapılmalıdır.
- 2 dakika süreyle deiyonize su ile birlikte kayar bölümler durulayın.
- 2 dakika süreyle% 70 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- 6 dakika boyunca% 95 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- 2 dakika süreyle% 70 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- Deiyonize wat en bölümleri durulayın2 dakika süreyle er.
- Kresil Violet bölümleri 3 dakika Leke inkübe edin.
- 2 dakika boyunca iyonu giderilmiş su içinde bölümleri durulayın.
- 2 dakika süreyle% 70 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- 3 dakika boyunca% 95 etanol + 3 ml buzlu asetik asit içinde bölümler inkübe edin.
- 2 dakika süreyle% 95 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- 2 dakika için üç kez% 100 etanol içinde bölümler inkübe edin.
- 10 dakika için üç kez Ksilen bölümleri inkübe edin.
- Fetal beyin bölümleri tutarak Slaytlar Permount ve kapak kayma cam slaytlar kullanılarak monte edilebilir.
- Monte gecede mikroskobik gözlem ve analizler öncesinde slaytlar bırakın.
- Mikroskobik gözlem ve Mikroskobik Leica dik mikroskop altında yapılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Deneysel yöntemler 2 saat yetiştirme pencere doğru gebelik aşamasında tahmin için gerekli olduğunu göstermektedir burada açıklanan. Biz E13 yaşına embriyoların diseksiyonu göstermiştir. Ayrıca E13 fetal beyin mikrodiseksiyon gösterdi. Bu prosedür, Şekil 1 'de tarif çeşitli aşamalarda (AC), içerir. Fetal beyin primordium koku ampul tabanından metencephalon baz (Şekil 1) disseke edilir. Fetal beyin sonra immunokimyasal tespiti için% 4 paraformaldehid sabitlenir. Tespit edildikten sonra, fetus beyni jelatin% 10 gömülü olan ve Şekil 2 'de tarif edildiği gibi vibratome kesit için hazırlanmıştır. Fötal beyin adım adım gömme daha düşük büyütme gerçekleştirildi unutmayın. Gömülü Fetal beyin Şekil 1'de yüksek büyütmede görüntülenebilir. Ayrıca, ön beyin üzerinde ganglion itibar düzeyinde koronal fetal beyin bölümleri yapabilirsinizvibratome kullanılarak elde edilen ve immünohistokimyasal tespiti için slaytlar monte edilebilir. Bu TÜNEL-pozitif hücreleri (Şekil 3) sayısını içerir. Biz doğum öncesi alkol pozlama PF kontrol grubu (Şekil 3a) göre ganglion itibar içinde TUNEL-pozitif hücreler (Şekil 3b) artış neden burada göstermektedir. ADNF-9 verilen grupta önemli ALC grubuna kıyasla TÜNEL-pozitif hücreler (Şekil 3C ve 3D) alkole bağlı artış azalttı.
Şekil 1. E13 fetal beyin Mikrodisseksiyon. Embriyolardan disseke fetal beyin Aşamaları ac gösteri adım adım prosedürü s. A) Dissected kontrolü (PF) ve alkol (ALC) prenatal embriyo maruz. B) c) PF ve ALC grupların Dissected fetal beyin.
Şekil 2. Kesit için fetal beyin gömme yöntemi. Aşamaları vibratome kesim için nesne jelatin blok ayarına fetal beyin gömme hazırlanmasından (ae) göstermektedir adım adım işlemleri. A) doldurulmuş Peel-away gömme kalıp yarım jelatin ile, b) PF kontrolü ve ALC gruplarından Fetal beyin kalıp yan yana yerleştirilir ve jelatin kaplı, c) Peel-away gömme kalıp dört tarafı kesilir, d) fetal beyin gömülü jelatin ve hazır paraformaldehid sabit olması, e) gefetal beyin içeren latin kalıp vibratome kesit için nesne yerleştirilir.
Şekil 3,. PF (a) grubu ile karşılaştırıldığında ALC grup (b) 'deki ok ile gösterildiği gibi E13 aşamada ganglion eminence TÜNEL tahlili kullanılarak alkolün indüklediği apoptoza karşı nörotrofik peptid, ADNF-9, Etkileri. Prenatal alkol maruz kalma hücre ölümü ile artışlara neden. Doğum öncesi alkol maruz kalma ile birlikte ADNF-9 yönetim TUNEL-pozitif hücreler (c) 'de azalma gösterdi. İstatistiksel analizler ADNF-9 yönetim TÜNEL pozitif hücreler (d) 'de, alkol kaynaklı artışlara önlediğini ortaya koymaktadır. Değerler ortalama ± SEM olarak gösterilmiştir. * P <0.05; ** p <0.01 (Newman-Keul en post hoc testi). Yok her grup için = 4. Ölçek çubuğu = 100 mikron. El izni ile yayın (4), yayımlanmaktadırSevier (lisans # 2904310752995).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu çalışmada yer alan yöntemleri ve teknolojisi Prenatal beyinlerinde alkole maruz kalma ve bu etkilerin önlenmesi trofik peptidlerin rolü etkilerini göstermektedir. Bu farklı gebelik dönemlerinde istismar veya fetal beyinlerinde diğer zehirli kimyasal maddelerin diğer ilaçlar çalışma hakkında bilgi sağlayabilir.
Üreme paradigması ile ilgili olarak, bazı durumlarda, sperm fişin tespit gözlemlenmeyen olabilir. Bu noktada, bu mümkün sperm olumlu algılama sağlayabilir, mikroskobik gözlem altında bir slayt vajinal smear test etmek önemlidir.
Bu beslenme PF kontrolü ve alkol içeren sıvı diyet ücretsiz erişim içerir bu çalışmada belirtilmiştir. En az 30 nem ve% 22-24 aşmayan bir sıcaklığı ° C diyet 1,2 24 saat ücretsiz erişim sırasında diyetin kalitesini izlemek için gereklidir. Ayrıca, gerekli olduğudiyet günlük taze hazırlanmalıdır. Beslenme tüpleri her kullanımdan sonra temizlenmelidir.
Fetal beyin mikrodiseksiyon zorluklar vardır. Bu test embriyonik aşamada bağlıdır. Örneğin, E13 yaşındayken disseke fetal beyin E18 de disseke fetal beyin göre uğraşmak zor olabilir. Bu E18 de, fetal beyin iyi gelişmiş ve kafatası kafatası hala koparmak için yumuşak ve zor E13, göre koparmak için kolay hale geldi olmasından kaynaklanmaktadır. Bu noktada, E13 fetal beyin diseksiyon zaman, bu el yazması ile birlikte verilen video gösterildiği gibi kafatası parçası-by-parça koparmak için önemlidir.
Jelatin fetal beyin gömme ile ilgili olarak, bu immünohistokimyasal analiz için kullanılmak üzere hazır bölümleri elde etmek için en iyi tekniktir bulundu. Fetal beyin daha iyi kesme sahip olmak için, önemli olduğunu 4% paraformaldehid fiksasyonfetal beyin içeren jelatin blok tamamlandı. Bu nedenle, bu en az iki gün sürebilir, ve jelatin blok üçüncü gün kesime hazır olabilir. Bölümlerin kalınlığı da bir faktördür, 50 mikron kalınlığında genellikle TUNEL yöntemi 1,2,4 olarak immunokimyasal tespiti için test edilir. Bununla birlikte, 25 um kalınlıkta ve daha da test edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Hiçbir açıklama yapılacak.
Acknowledgments
Bu araştırma projesi Alkol İstismarı ve Alkolizm Ulusal Enstitüsü Ödülü sayısı R21AA017735 (YS) tarafından desteklenmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Alkol İstismarı ve Alkolizm veya Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Enstitüsü resmi görüşlerini temsil etmemektedir. Yazar ayrıca, bu yazının düzenleme için Charisse Montgomery teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Superfrost Plus Slides | VWR | 48311-703 | |
| PAP PEN | Research Products Int. Corp. | 195506 | |
| 5-Plend Open Mailer | Heathrow Scientific, LLC | HS 15983G | |
| Peel away embedding molds | Electron Microscopy Sciences | 70182 | |
| In situ cell death detection kit, POD | Roche Diagnostics, Inc | 11684817910 | |
| Hanks' Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-120 | |
| Gelatin Type A | FisherScientific | G8-500 | |
| Stereomicroscope | W. NUHSBAUM, Inc | Leica M60, KL 200 LED | |
| Micro-Vibratome | Leica, Inc | Leica VT 1000S | |
| Moria Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | 11370-40 | 2 pairs |
| Graduate 30 ml feeding tubes | Dyets, Inc | 900012 | |
| Vitamin Mix | Bio-Serv. Inc. | F8031 | |
| Mineral Mix | Bio-Serv. Inc. | F8598 | |
| Maltose Dextrin | Bio-Serv. Inc. | 3650 | |
| Ethyl alcohol 190 Proof, 5 gallons | 111000190-SS05 | Pharmco-AAPER | |
| Upright microscope | W. NUHSBAUM, Inc | LEICA DM 4000 |
References
- Sari, Y. Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse. Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).
- Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S. A novel peptide, colivelin, prevents alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mice: signaling pathway investigations. Neuroscience. 164 (4), 1653-1664 (2009).
- Sari, Y., Hammad, L. A., Saleh, M. M., Rebec, G. V., Mechref, Y. Alteration of selective neurotransmitters in fetal brains of prenatally alcohol-treated C57BL/6 mice: quantitative analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry. Int. J. Dev. Neurosci. 28 (3), 263-269 (2010).
- Sari, Y., Weedman, J. M., Ge, S. Activity-dependent neurotrophic factor-derived peptide prevents alcohol-induced apoptosis, in part, through Bcl2 and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways in fetal brain of C57BL/6 mouse. Neuroscience. 202, 465-473 (2012).
- Sari, Y., Zhang, M., Mechref, Y. Differential expression of proteins in fetal brains of alcohol-treated prenatally C57BL/6 mice: a proteomic investigation. Electrophoresis. 31, 1-14 (2010).
- Bassan, M., Zamostiano, R., Davidson, A., Pinhasov, A., Giladi, E., Perl, O., Bassan, H., Blat, C., Gibney, G., Glazner, G., Brenneman, D. E., Gozes, I. Complete sequence of a novel protein containing a femtomolar-activity-dependent neuroprotective peptide. J. Neurochem. 72 (3), 1283-1293 (1999).
- Brenneman, D. E., Hauser, J., Neale, E., Rubinraut, S., Fridkin, M., Davidson, A., Gozes, I. Activity-dependent neurotrophic factor: structure-activity relationships of femtomolar-acting peptides. J. Pharmacol. Exp. Ther. 285 (2), 619-627 (1998).
- Spong, C. Y., Abebe, D. T., Gozes, I., Brenneman, D. E., Hill, J. M. Prevention of fetal demise and growth restriction in a mouse model of fetal alcohol syndrome. J. Pharmacol. Exp. Ther. 297 (2), 774-779 (2001).
- Sari, Y., Gozes, I. Brain deficits associated with fetal alcohol exposure may be protected, in part, by peptides derived from activity-dependent neurotrophic factor and activity-dependent neuroprotective protein. Brain Res. Brain Res. Rev. 52 (1), 107-118 (2006).
- Brenneman, D. E., Gozes, I. A femtomolar-acting neuroprotective peptide. J. Clin. Invest. 97 (10), 2299-2307 (1996).
- Zamostiano, R., Pinhasov, A., Gelber, E., Steingart, R. A., Seroussi, E., Giladi, E., Bassan, M., Wollman, Y., Eyre, H. J., Mulley, J. C., Brenneman, D. E., Gozes, I. Cloning and characterization of the human activity-dependent neuroprotective protein. J. Biol. Chem. 276 (1), 708-714 (2001).
- Offen, D., Sherki, Y., Melamed, E., Fridkin, M., Brenneman, D. E., Gozes, I. Vasoactive intestinal peptide (VIP) prevents neurotoxicity in neuronal cultures: relevance to neuroprotection in Parkinson's disease. Brain Res. 854 (1-2), 257-262 (2000).
- Steingart, R. A., Solomon, B., Brenneman, D. E., Fridkin, M., Gozes, I. VIP and peptides related to activity-dependent neurotrophic factor protect PC12 cells against oxidative stress. J. Mol. Neurosci. 15 (3), 137-145 (2000).
